一种肝素钠的制备工艺的制作方法

本发明涉及肝素钠的制备，具体涉及一种肝素钠的制备工艺。

背景技术：

肝素钠是肝素的钠盐，本质上是分子量不同的粘多糖相混合在一起的硫酸氨基多糖的钠盐，广泛存在于哺乳动物欧立(Ehrlich)氏肥大细胞中，具有高效抗凝血、防止血栓形成和降血压功效，并可用于治疗某些免疫复合体(Immuno Complex)疾病，有广泛使用和开发价值。肝素钠提取一般是从猪或牛的肠粘膜中进行提取，由于粘膜内的肝素与其它粘多糖、蛋白质结合在一起，所以需要先将肝素从复合物中分离出，然后再对其进行分离纯化。另外，在提取肝素钠之前还需要对小肠进行清洗、剥离肠粘膜等预处理操作，基于小肠的特性，预处理的机械化操作仍具有很大空间。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供了一种肝素钠的制备工艺，该工艺在小肠预处理阶段以及肝素钠提取阶段均进行了改进，大幅度提高了肝素钠的生产效率及粗品得率。

本发明采取的技术方案如下：

1.一种肝素钠的制备工艺，包括如下步骤：

(1)小肠清洗并理顺；

(2)灌水清洗小肠内部，并同时根据是否漏水判断小肠是否有漏洞；

(3)刮肠机将小肠的浆膜层、肌层、粘膜及粘膜下层分离；

(4)取粘膜和粘膜下层搅碎成浆液，氢氧化钠调节pH至7.5～8.0，同时加热至45～55℃，按浆液与酶的质量比1:6～8、1:2～3000的比例加入复合风味蛋白酶及链蛋白酶，保温搅拌2～3h，然后将温度上升至70～90℃，保温20～30min，过滤；

(5)将步骤(4)过滤后获得的滤液用D-208强碱型II型阴离子交换树脂进行吸附，吸附完毕后用质量分数4～6％的氯化钠溶液清洗2h；

(6)洗涤过后采用4～6mol/L氢氧化钠溶液洗脱6～8h，过滤获得洗脱液；

(7)调节洗脱液的pH至6.0～6.5，然后加入0.8～1倍体积的预冷乙醇，沉淀10～20h，脱水，烘干获得肝素钠粗品。

优选的，所述步骤(1)中用清洗机对小肠进行清洗，所述清洗机包括机架、传送带、喷淋装置、清洗桶以及驱动电机，所述喷淋装置设于传送带后部上方，所述清洗桶设于传送带前部上方，所述清洗桶包括外壳、旋转桶、驱动螺杆和循环泵；外壳和循环泵均固定于机架，所述外壳倾斜设置，所述旋转桶同轴的设于外壳内部，旋转桶的桶壁上设有多个通水孔；旋转桶的底面固定有沿轴向向下伸出并与外壳转动连接的转轴；转轴的外圆面设有轮齿；所述驱动螺杆水平设置并与转轴连接形成蜗轮蜗杆机构；转轴为中空结构并与旋转桶的内腔相通；所述循环泵的进液口设有进水管，进水管自上向下伸进旋转桶内；循环泵的出液口通过出水管连接于转轴。

优选的，所述外壳和旋转桶的底部均设有出料口，所述通水孔的孔径不大于5mm。

优选的，所述出水管与转轴之间通过旋转接头连接，所述旋转接头包括前接头、筒体、壳体、前对接管、后对接管和压紧弹簧；前接头、壳体和筒体三者按顺序排列并且同轴设置，前接头上设有用于与转轴固定连接的螺纹；后对接管同轴设置于筒体内并且二者轴向滑动配合，前对接管同轴固定于前接头并伸进壳体内，壳体与筒体之间密封固定连接，前对接管与壳体之间通过轴承组件转动连接并与后对接管同轴对接，所述压紧弹簧套在后对接管外部并支撑于后对接管和筒体之间用于为前对接管提供弹力使前对接管与后对接管之间沿轴向压紧，筒体的侧壁设有用于连接出水管的高压水接头，轴承组件包括沿前对接管轴向排列的两个径向轴承和支撑于两个径向轴承之间的轴向推力轴承；所述轴向推力轴承与两个径向轴承之间均设有挡块，其中一个挡块沿轴向压紧于相应径向轴承的内圈，另外一个挡块沿轴向压紧于相应径向轴承的外圈；壳体与筒体连接的一端内部固定有一个压盖，壳体远离筒体的一端设有径向向内的凸台，通过压盖将轴承组件紧压于凸台定位，筒体与后对接管之间、壳体与前对接管及压盖之间以及压盖与前对接管之间均通过密封圈进行密封。

优选的，所述喷淋装置包括喷水外壳、喷水内筒和水泵；喷水外壳和水泵均固定安装于机架；所述喷水外壳和喷水内筒均为圆柱筒状结构，喷水内筒设于喷水外壳内部，喷水内筒与喷水外壳同轴设置并转动配合，喷水外壳侧壁设有喷口；喷水内筒的侧壁均匀布置有多个出水孔；喷水内筒的一端敞开并与水泵的出口连通，喷水内筒的另一端封闭；各出水孔的孔心线绕喷水内筒的轴线顺时针或者逆时针倾斜。

优选的，所述传送带、水泵、循环泵以及驱动螺杆均由驱动电机驱动。

优选的，所述步骤(5)中树脂吸附时搅拌速度为50～60r/min。

本发明的有益效果在于，本发明在肠衣清洗过程中摒弃了以往人工清洗的传统，使清洗质量以及效率得到大幅的提升，节约了人力成本。另外，本发明通过优化肝素钠的提取和分离条件，使得到的粗品肝素钠的效价达到100U/mg，并且获得的产品颜色较白，提取效果较佳。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。

图1为本发明清洗机的结构示意图；

图2为图1中A-A剖视图；

图3为旋转接头结构示意图。

具体实施方式

下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。

本实施例的肝素钠的制备工艺，包括如下步骤：

(1)小肠清洗并理顺；

(2)灌水清洗小肠内部，并同时根据是否漏水判断小肠是否有漏洞；

(3)刮肠机将小肠的浆膜层、肌层、粘膜及粘膜下层分离；

(4)取粘膜和粘膜下层搅碎成浆液，氢氧化钠调节pH至7.5～8.0，同时加热至45～55℃，按浆液与酶的质量比1:6～8、1:2～3000的比例加入复合风味蛋白酶及链蛋白酶，保温搅拌2～3h，然后将温度上升至70～90℃，保温20～30min，过滤；

(5)将步骤(4)过滤后获得的滤液用D-208强碱型II型阴离子交换树脂进行吸附，吸附完毕后用质量分数4～6％的氯化钠溶液清洗2h；

(6)洗涤过后采用4～6mol/L氢氧化钠溶液洗脱6～8h，过滤获得洗脱液；

(7)调节洗脱液的pH至6.0～6.5，然后加入0.8～1倍体积的预冷乙醇，沉淀10～20h，脱水，烘干获得肝素钠粗品。

其中，步骤(1)中，使用清洗机对小肠进行清洗，如图1、图2及图3所示，具体地，所述清洗机包括机架1、传送带2、喷淋装置3、清洗桶4以及驱动电机5，所述喷淋装置3设于传送带2后部上方，所述清洗桶4设于传送带2前部上方，所述清洗桶4包括外壳6、旋转桶7、驱动螺杆8和循环泵9；外壳6和循环泵9均固定于机架1，所述外壳6倾斜设置，所述旋转桶7同轴的设于外壳6内部，旋转桶7的桶壁上设有多个通水孔；旋转桶7的底面固定有沿轴向向下伸出并与外壳6转动连接的转轴10；转轴10的外圆面设有轮齿；所述驱动螺杆8水平设置并与转轴10连接形成蜗轮蜗杆机构；转轴10为中空结构并与旋转桶7的内腔相通；所述循环泵9的进液口设有进水管11，进水管11自上向下伸进旋转桶7内，进水管11伸进旋转桶7内的一端设有过滤塞27，使进入进水管11内的水通过过滤塞27滤除污物，同时避免小肠在水流作用下吸入进水管11内；循环泵9的出液口通过出水管12连接于转轴10；所述外壳6和内筒的底部均设有出料口13；所述喷淋装置3包括喷水外壳14、喷水内筒15和水泵16；喷水外壳14和水泵16均固定安装于机架1；所述喷水外壳14和喷水内筒15均为圆柱筒状结构，喷水内筒15设于喷水外壳14内部，喷水内筒15与喷水外壳14同轴设置并转动配合，喷水外壳14侧壁设有喷口；喷水内筒15的侧壁均匀布置有多个出水孔；喷水内筒15的一端敞开并与水泵16的出口连通，喷水内筒15的另一端封闭；各出水孔的孔心线绕喷水内筒15的轴线顺时针或者逆时针倾斜；以传送带2的进料端为前侧，出料端为后侧，喷淋装置3的喷洒范围由喷水外壳14侧壁设置的喷口所在的扇形角度决定，能产生足够大的喷洒范围，而且水流沿倾斜设置的出水孔喷出时产生反作用力能使喷水内筒15旋转，进而使喷洒形成的水柱在空间内移动，能对小肠表面进行全面清洗，部件少，结构简单，清洗效果好；旋转桶7通过转轴10转动连接于外壳6，为了保证旋转桶7的结构稳定性，在旋转桶7外圆面与外壳6内壁之间安装有水润滑轴承，转轴10的外圆面与外壳6之间也设有轴承，外壳6和旋转桶7的轴线倾斜5～10°，向旋转桶7及外壳6内注满水后，将待清洗的小肠放入旋转桶7内，利用旋转桶7的旋转使小肠在其内部翻滚，而旋转桶7内的水在循环泵9的作用下循环流动，并且水由上部被抽出后由转轴10的内孔进入，而水流能够将成团的小肠冲散，进而实现充分的清洗，提高清洗效率及清洗质量；为了便于向外壳6及旋转桶7内注水，进水管11采用三通管结构，将其中一个管口连接至水源，通过阀门控制管路的通断实现注水和水循环的切换；两个出料口13处均设有可打开的门板；由于外壳6和旋转桶7形成双层结构，因此打开外壳6上的门板可先将水及清洗过程产生的污物排出，再将旋转桶7上的门板打开使清洗后的小肠在重力作用下掉落在输送带上向后运送，运送过程中利用喷淋装置3进行二次清洗，以冲去小肠表面残留的污水，输送带的后端下方放置有料桶17，料桶17固定于机架1，因此经两次清洗之后的小肠收集在料桶17内；所述通水孔的孔径不大于5mm，避免小肠进入通水孔内，保证水流的畅通；所述出水管12与转轴10之间通过旋转接头18连接，所述旋转接头18包括前接头19、筒体20、壳体21、前对接管22、后对接管23和压紧弹簧24；前接头19、壳体21和筒体20三者按顺序排列并且同轴设置，前接头19上设有用于与转轴10固定连接的螺纹；后对接管23同轴设置于筒体20内并且二者轴向滑动配合，前对接管22同轴固定于前接头19并伸进壳体21内，壳体21与筒体20之间密封固定连接，前对接管22与壳体21之间通过轴承组件转动连接并与后对接管23同轴对接，所述压紧弹簧24套在后对接管23外部并支撑于后对接管23和筒体20之间用于为前对接管22提供弹力使前对接管22与后对接管23之间沿轴向压紧，筒体20的侧壁设有用于连接出水管12的高压水接头25，轴承组件包括沿前对接管22轴向排列的两个径向轴承和支撑于两个径向轴承之间的轴向推力轴承；所述轴向推力轴承与两个径向轴承之间均设有挡块，其中一个挡块沿轴向压紧于相应径向轴承的内圈，另外一个挡块沿轴向压紧于相应径向轴承的外圈；壳体21与筒体20连接的一端内部固定有一个压盖26，壳体21远离筒体20的一端设有径向向内的凸台，通过压盖26将轴承组件紧压于凸台定位，筒体20与后对接管23之间、壳体21与前对接管22及压盖26之间以及压盖26与前对接管22之间均通过密封圈进行密封；由于出水管12与转轴10之间存在相对转动，因此采用旋转接头18能较好的适应转轴10的旋转，同时保证出水管12与转轴10之间的连通，旋转接头18采用独特无漏型密封设计，性能稳定。传送带2、水泵16、循环泵9以及驱动螺杆8均由驱动电机5驱动，传送带2的滚轮轴、水泵16的动力输入轴、循环泵9的动力输入轴以及驱动螺杆8相互平行并通过带轮和V带传动连接在一起，驱动电机5的动力输出轴通过带轮和V带传动连接于传送带2的滚轮轴，为了便于动力的通断控制，在传送带2的滚轮轴、水泵16的动力输入轴、循环泵9的动力输入轴以及驱动螺杆8与相应的带轮之间均设有离合器，可根据实际需要接合或断开动力。

步骤(2)中清洗小肠内部的同时，根据小肠壁是否漏水判断某处是否有破洞，如果有破洞需要将小肠在破洞处截开。

步骤(4)中氢氧化钠加入量要控制得当，调节pH至7.5～8.0，而不易太高，pH太高易导致产品发黄发粘；加热至45～55℃，按浆液与酶的质量比1:6～8、1:2～3000的比例加入复合风味蛋白酶及链蛋白酶进行酶解，使肝素与蛋白质分离；然后将温度上升至70～90℃，可以酶失活。

步骤(5)中D-208强碱型II型阴离子交换树脂的使用量可以为肝素钠滤液的两倍重量；吸附完毕后氯化钠溶液清洗时严格控制氯化钠的使用量，因为一方面氯化钠使用量过大容易造成废水废液污染问题，使废液处理成本增加，另一方面肝素钠的纯度也会受到影响。

步骤(6)中用氢氧化钠溶液洗脱时氢氧化钠的浓度要控制好，浓度过低不易保证肝素负离子转变为肝素钠，浓度过高又易造成废液污染。

步骤(7)中乙醇沉淀时，最好在搅拌的同时逐渐加入乙醇，以避免局部乙醇浓度突然增高，而且最好是用预冷过的乙醇，否则就会使肝素钠的部分空间构象受到破坏，从而降低其活性。

在本发明所述的提取工艺下，获得的粗品肝素钠效价达到100U/mg，产品颜色较白，提取效果较佳。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。