一种复合微生物制剂生产工艺的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种复合微生物制剂生产工艺，该复合微生物制剂原料重量百分比包括以下组分：浓缩光合菌剂45％～50％，多菌剂45％～50％，复合保护剂2％～3％；所述的多菌剂包括酵母菌、枯草芽孢杆菌、硝化细菌、乳酸菌其中的至少一种或任意组合；所述的复合保护剂各组分重量百分比为甘油40％～50％，吐温20?20％～30％，硼酸钠30％～40％。本发明的复合微生物制剂明显提高了水体中的溶氧量，提高鲈鱼苗、虾苗和蟹苗等水产产品的成活率，降低了水体COD和氨氮含量。且生产过程很少产生废气、废渣和废水污染。因此，该套生产工艺的产品和副产品均能充分利用，达到无危害、无污染，属于节能减排生产。
【专利说明】—种复合微生物制剂生产工艺
[0001]本申请为本申请是申请号为201210436672.8，申请日为2012年11月06日，名称为“一种复合微生物制剂及其生产工艺”的发明专利申请的分案申请。
【技术领域】
[0002]本发明涉及一种水产养殖【技术领域】，尤其涉及一种复合微生物制剂生产工艺。
【背景技术】
[0003]随着海水养殖业的快速发展,海洋环境和海水养殖环境日益恶化。据资料表明，我国的主要养殖区，约有50%的池塘受到较严重的污染，30%的池塘受到中度污染，有20%的池塘受到轻度污染。主要表现在:一是在养殖过程投放的饲料不充分利用、动物排泄物造成的产生大量的富营养养殖废水。当虾池排放的污水物质总量超出海洋区域内环境容量的时，造成海洋水质污染和富营养化。二是在养殖过程中使用消毒剂、抗菌素对海洋和养殖环境造成较大的影响。富含消毒剂和抗菌素的养殖水大量排放后，对近岸水域微生物生态系统产生了直接的影响。各类污染物质进入近岸水域生态环境后，其最终的降解和净化都与微生物的活动有关。当正常的微生物生态系统受到干扰或破坏之后，污染物质的分解速率易受到影响，自净能力明显降低，这样将会导致水质的进一步恶化。三是养殖废水排放造成自身污染。养殖水大量排放污染到近岸水域的同时，造成近岸水域污染后，海水中的氨氮和硫化物等有害物质含量升高。当这种受污染的海水再抽(放)使用，也造成了自身污染，危及养殖业的本身。
[0004]随着水质恶化的日益加剧，全面改善水环境的微生物制剂已成为当今消费者追求的目标。如何合理利用水资源，建立绿色无公害生态养殖模式是日前急待解决的问题。
[0005]微生物制剂又称“有益微生物”等，它是以直接从自然界中分离的有益菌为主体开发出来的新型产品，是指一类有助于稳定宿主固定菌群，对宿主能产生有益影响的活菌制剂，微生物制剂对水产品无毒副作用，无残留性和抗药性，能有效净化养殖废水。微生物技术作为一项高效、节能的环保技术，已被国外广泛用于治理水域环境。本发明研究开发复合微生物制剂产品，并应用于水产养殖，探讨了其使用效果。证实了它在海水养殖业中应用前景广、潜力大，具有广泛的经济效益和社会效益。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是提供一种复合微生物制剂生产工艺，采用高浓度光合菌、乳酸菌、放线菌、枯草芽孢杆菌、硫化细菌、硝化细菌、反硝化细菌等80多种微生物复合培养，开发出新型无毒微生物制剂。将其用于改善养殖环境，净化养殖水质，以提高养殖生物成活率，减少海洋环境污染。
[0007]本发明通过以下技术方案予以实现:
[0008]一种复合微生物制剂，其特征在于，该复合微生物制剂原料重量百分比包括以下组分:浓缩光合菌剂45%~50%，多菌剂45%~50%，复合保护剂2%~3% ;[0009]所述的多菌剂包括酵母菌、枯草芽孢杆菌、硝化细菌、乳酸菌其中的至少一种或任
意组合；
[0010]所述的复合保护剂各组分重量百分比为甘油40 %~50 %，吐温2020 %~30 %，硼酸钠30%~40%。
[0011]所述的复合微生物制剂，其特征在于，其中的光合菌剂采用如下配方发酵培养:培养基分为种子培养基和生产培养基，种子培养基配方为:醋酸钠2.5g~3.5g，氯化铵
0.6g~L 4g,磷酸二氢钾0.5g~L 5g,硫酸镁0.3g~0.8g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠0.5g~
1.5g,复合B族维生素溶液Iml~2ml，酵母膏0.1g~0.5g,矿物质水1000ml,PH6.8~7.0 ;其生产培养基配 方为:醋酸钠2.5g~3.5g，氯化铵0.6g~1.4g，磷酸二氢钾0.5g~1.5g，硫酸镁0.3g~0.8g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠0.5g~1.5g,复合B族维生素Iml~2ml,亚硫酸钠1.5g，自来水1000ml, PH6.8~7.0。
[0012]所述的复合微生物制剂，其特征在于，多菌剂菌种采用如下配方发酵培养:甘蔗废糖蜜40g~60g,氯化铵4g~6g,豆柏45g~65g,磷酸二氢钾2g~4g,硫酸镁0.3g~1.2g，酵母膏0.3g，淀粉0.5g~3g，碳酸钙Ig,自来水1000ml, PH6.8~7.0。
[0013]同时，本发明还提供一种复合微生物制剂的生产工艺，其特征在于，它包括以下步骤:
[0014](I)制备浓缩光合菌剂
[0015](2)制备多菌剂，先培养多菌种，然后制得多菌剂；
[0016](3)混合，将制得的光合细菌高浓缩剂和多菌剂混合按体积1:1的比例混合，并加入复合保护剂；
[0017](4)灌装；
[0018](5)成品。
[0019]所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂之前，还有如下依次步骤:光合细菌富集、光合细菌分离、光合细菌纯化、光合细菌鉴定，筛选光合菌剂发酵培养基，培养光合菌剂；所述步骤(2)制备多菌剂之前,还有如下依次步骤:多种菌菌种驯化，筛选多菌种发酵培养基。
[0020]所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂是先用1000ml热水煮20g淀粉，淀粉糊化后加入羧甲基水溶性壳聚糖80g，共煮lOmin，待冷却后补足冷开水到1000g即得到菌剂浓缩剂，使用时将Ikg加入1000kg的光合细菌菌液中，混匀，静置24小时后移去60%上清液，即得下层高浓缩光和菌剂。
[0021]所述的光合细菌富集，其富集培养基为:富集培养基:醋酸钠3.2g，氯化铵1.1g,磷酸二氢钾1.2g，硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液 1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0 ;
[0022]所述的光合细菌分离，其分离培养基为:醋酸钠3.2g，氯化铵1.lg，磷酸二氢钾1.2g,硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0，1.8%琼脂粉；
[0023]所述的光合细菌纯化是将待分离样品加到富集培养液中，胶塞密封后厌氧光照培养，当培养液呈红棕色时，再转接到新鲜培养液二次富集，用平板倾注法厌氧分离。倾注法厌氧分离是将分离平板置于干燥锅内，在锅底添加焦性没食子酸与碳酸钠的混合物，用真空泵抽取锅内空气，充入氮气，以此操作3次后，于光照下培养7天，挑取平板上不同特征的菌落斜面培养。
[0024]所述培养光合菌剂是先将培养基组份按5L量配成10:1，既浓缩母液为500ml，然后煮沸消毒，冷却后接到新洗净的5L塑料桶中，按8%接种量接入400mL新鲜菌液，直接用自来水补足到5L，同上连续接种培养30批，检测每两批的活菌总数及杂菌率，同时用富集培养基做比较，与第O批相比计算第30批的活菌保持率。
[0025]所述步骤(2)制备多菌剂是用20L发酵罐连续发酵30批，每批发酵液作为下批的菌种液，发酵温度30°C，摇床转数为200rpm，通气比为1: 0.5，接种量8%，发酵25h，每两批发酵液检测一次其活菌总数和杂菌率。
[0026]所述的复合B族维生素包括:维生素BJOOmg，维生素B260mg，维生素B690mg，烟酰胺300mg,泛酸钙30mg,蒸懼水1000mL。[0027]本发明的有益效果为:明显提高了水体中的溶氧量，提高鲈鱼苗、虾苗和蟹苗等水产产品品的成活率，降低了水体COD和氨氮含量。本发明产品生产过程很少产生废气、废渣和废水污染，在浓缩光合细菌过程中产生的废弃液可以用于蔬菜种植，而且该废弃液可以提高蔬菜产量和品质。因此，该套生产工艺的产品和副产品均能充分利用，达到无危害、无污染，属于节能减排生产。
【专利附图】
【附图说明】
[0028]图1为本发明所述的一种复合微生物制剂及其生产工艺的流程图。
【具体实施方式】
[0029]下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式并不局限于实施例表示的范围。
[0030]实施例1
[0031]一种复合微生物制剂，其特征在于，该复合微生物制剂原料重量百分比包括以下组分:浓缩光合菌剂48 %，多菌剂49 %，复合保护剂3 % ；
[0032]所述的多菌剂包括酵母菌、枯草芽孢杆菌、硝化细菌、乳酸菌其中的至少一种或任
意组合；
[0033]所述的复合保护剂各组分重量百分比为甘油40%，吐温2025%，硼酸钠35%。
[0034]所述的复合微生物制剂，其特征在于，其中的光合菌剂采用如下配方发酵培养:培养基分为种子培养基和生产培养基，种子培养基配方为:醋酸钠2.5g,氯化铵Ig,磷酸二氢钾lg，硫酸镁0.5g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠Ig,复合B族维生素溶液1.5ml,酵母膏Ig,矿物质水1000ml，PH6.8~7.0 ;其生产培养基配方为:醋酸钠2.5g，氯化铵lg，磷酸二氢钾lg，硫酸镁0.5g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠lg，复合B族维生素1.5ml,亚硫酸钠1.5g,自来水1000ml, PH6.8 ~7.0。
[0035]所述的复合微生物制剂，其特征在于，多菌剂菌种采用如下配方发酵培养:甘蔗废糖蜜40g,氯化铵4.5g,豆柏50g,磷酸二氢钾2.5g,硫酸镁0.5g,酵母膏0.3g,淀粉1.5g,碳酸钙 Ig,自来水 1000ml, PH6.8 ~7.0。
[0036]同时，本发明还提供一种复合微生物制剂的生产工艺，其特征在于，它包括以下步骤:[0037](I)制备浓缩光合菌剂
[0038](2)制备多菌剂，先培养多菌种，然后制得多菌剂；
[0039](3)混合，将制得的光合细菌高浓缩剂和多菌剂混合按体积1:1的比例混合，并加入复合保护剂；
[0040](4)灌装；
[0041](5)成品。
[0042]所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂之前，还有如下依次步骤:光合细菌富集、光合细菌分离、光合细菌纯化、光合细菌鉴定，筛选光合菌剂发酵培养基，培养光合菌剂；所述步骤(2)制备多菌剂之前,还有如下依次步骤:多种菌菌种驯化，筛选多菌种发酵培养基。
[0043]所述步骤⑴制备浓缩光合菌剂是先用1000ml热水煮20g淀粉，淀粉糊化后加入羧甲基水溶性壳聚糖80g，共煮lOmin，待冷却后补足冷开水到1000g即得到菌剂浓缩剂，使用时将Ikg加入1000kg的光合细菌菌液中，混匀，静置24小时后移去60%上清液，即得下层高浓缩光和菌剂。
[0044]所述的光合细菌富集，其富集培养基为:富集培养基:醋酸钠3.2g，氯化铵1.1g,磷酸二氢钾1.2g，硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液 1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0 ;
[0045]所述的光合细菌分离，其分离培养基为:醋酸钠3.2g，氯化铵1.lg，磷酸二氢钾1.2g,硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0，1.8%琼脂粉；
[0046]所述的光合细菌纯化是将待分离样品加到富集培养液中，胶塞密封后厌氧光照培养，当培养液呈红棕色时，再转接到新鲜培养液二次富集，用平板倾注法厌氧分离。倾注法厌氧分离是将分离平板置于干燥锅内，在锅底添加焦性没食子酸与碳酸钠的混合物，用真空泵抽取锅内空气，充入氮气，以此操作3次后，于光照下培养7天，挑取平板上不同特征的菌落斜面培养。
[0047]所述培养光合菌剂是先将培养基组份按5L量配成10: 1，既浓缩母液为500ml，然后煮沸消毒，冷却后接到新洗净的5L塑料桶中，按8%接种量接入400mL新鲜菌液，直接用自来水补足到5L，同上连续接种培养30批，检测每两批的活菌总数及杂菌率，同时用富集培养基做比较，与第O批相比计算第30批的活菌保持率。
[0048]所述步骤(2)制备多菌剂是用20L发酵罐连续发酵30批，每批发酵液作为下批的菌种液，发酵温度30°C，摇床转数为200rpm，通气比为1: 0.5，接种量8%，发酵25h，每两批发酵液检测一次其活菌总数和杂菌率。
[0049]所述的复合B族维生素包括:维生素BJOOmg，维生素B260mg，维生素B690mg，烟酰胺300mg,泛酸钙30mg,蒸懼水lOOOmL。
[0050]实施例2
[0051]一种复合微生物制剂，其特征在于，该复合微生物制剂原料重量百分比包括以下组分:浓缩光合菌剂49%，多菌剂49%，复合保护剂2% ；
[0052]所述的多菌剂包括酵母菌、枯草芽孢杆菌、硝化细菌、乳酸菌其中的至少一种或任
意组合；
[0053]所述的复合保护剂各组分重量百分比为甘油42%，吐温2025%，硼酸钠33%。[0054]所述的复合微生物制剂，其特征在于，其中的光合菌剂采用如下配方发酵培养:培养基分为种子培养基和生产培养基，种子培养基配方为:醋酸钠3g,氯化铵Ig,磷酸二氢钾lg，硫酸镁0.8g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠0.5gg,复合B族维生素溶液2ml,酵母膏0.1g,矿物质水1000ml，PH6.8~7.0 ;其生产培养基配方为:醋酸钠3g，氯化铵lg，磷酸二氢钾lg，硫酸镁0.8g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠0.5gg,复合B族维生素2ml,亚硫酸钠1.5g,自来水1000ml, PH6.8 ~7.0。
[0055]所述的复合微生物制剂，其特征在于，多菌剂菌种采用如下配方发酵培养:甘蔗废糖蜜50g，氯化铵5.5g，豆柏50g，磷酸二氢钾2g，硫酸镁0.7g，酵母膏0.3g，淀粉3g，碳酸钙Ig,自来水 1000ml, PH6.8 ~7.0。
[0056]同时，本发明还提供一种复合微生物制剂的生产工艺，其特征在于，它包括以下步骤:
[0057](I)制备浓缩光合菌剂
[0058](2)制备多菌剂，先培养多菌种，然后制得多菌剂；
[0059](3)混合，将制得的光合细菌高浓缩剂和多菌剂混合按体积1:1的比例混合，并加入复合保护剂；
[0060](4)灌装；
[0061](5)成品。
[0062]所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂之前，还有如下依次步骤:光合细菌富集、光合细菌分离、光合细菌纯化、光合细菌鉴定，筛选光合菌剂发酵培养基，培养光合菌剂；所述步骤(2)制备多菌剂之前,还有如下依次步骤:多种菌菌种驯化，筛选多菌种发酵培养基。
[0063]所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂是先用1000ml热水煮20g淀粉，淀粉糊化后加入羧甲基水溶性壳聚糖80g，共煮lOmin，待冷却后补足冷开水到1000g即得到菌剂浓缩剂，使用时将Ikg加入1000kg的光合细菌菌液中，混匀，静置24小时后移去60%上清液，即得下层高浓缩光和菌剂。
[0064]所述的光合细菌富集，其富集培养基为:富集培养基:醋酸钠3.2g，氯化铵1.1g,磷酸二氢钾1.2g，硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液 1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0 ;
[0065]所述的光合细菌分离，其分离培养基为:醋酸钠3.2g，氯化铵1.lg，磷酸二氢钾1.2g,硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0，1.8%琼脂粉；
[0066]所述的光合细菌纯化是将待分离样品加到富集培养液中，胶塞密封后厌氧光照培养，当培养液呈红棕色时，再转接到新鲜培养液二次富集，用平板倾注法厌氧分离。倾注法厌氧分离是将分离平板置于干燥锅内，在锅底添加焦性没食子酸与碳酸钠的混合物，用真空泵抽取锅内空气，充入氮气，以此操作3次后，于光照下培养7天，挑取平板上不同特征的菌落斜面培养。
[0067]所述培养光合菌剂是先将培养基组份按5L量配成10: 1，既浓缩母液为500ml，然后煮沸消毒，冷却后接到新洗净的5L塑料桶中，按8%接种量接入400mL新鲜菌液，直接用自来水补足到5L，同上连续接种培养30批，检测每两批的活菌总数及杂菌率，同时用富集培养基做比较，与第O批相比计算第30批的活菌保持率。[0068]所述步骤(2)制备多菌剂是用20L发酵罐连续发酵30批，每批发酵液作为下批的菌种液，发酵温度30°C，摇床转数为200rpm，通气比为1: 0.5，接种量8%，发酵25h，每两批发酵液检测一次其活菌总数和杂菌率。
[0069]所述的复合B族维生素包括:维生素BJOOmg，维生素B260mg，维生素B690mg，烟酰胺300mg,泛酸钙30mg,蒸懼水lOOOmL。
[0070]实施例3
[0071]一种复合微生物制剂，其特征在于，该复合微生物制剂原料重量百分比包括以下组分:浓缩光合菌剂50%，多菌剂48%，复合保护剂2% ；
[0072]所述的多菌剂包括酵母菌、枯草芽孢杆菌、硝化细菌、乳酸菌其中的至少一种或任意组合；
[0073]所述的复合保护剂各组分重量百分比为甘油48%，吐温2020%，硼酸钠32%。
[0074]所述的复合微生物制剂，其特征在于，其中的光合菌剂采用如下配方发酵培养:培养基分为种子培养基和生产培养基，种子培养基配方为:醋酸钠3.5g，氯化铵1.4g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.Sg,氯化钠2.0g,碳酸氢钠lg，复合B族维生素溶液1.5ml，酵母膏
0.lg，矿物质水1000ml, PH6.8~7.0 ;其生产培养基配方为:醋酸钠3.5g，氯化铵1.4g，磷酸二氢钾0.5gg,硫酸镁0.8g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠Ig,复合B族维生素1.5ml,亚硫酸钠
1.5g,自来水 1000ml, PH6.8 ~7.0。
[0075]所述的复合微生物制剂，其特征在于，多菌剂菌种采用如下配方发酵培养:甘蔗废糖蜜60g,氯化铵4.5g,豆柏55g,磷酸二氢钾2g,硫酸镁1.2g,酵母膏0.3g,淀粉2.5g,碳酸钙 Ig,自来水 1000ml, PH6.8 ~7.0。
[0076]同时，本发明还提供一种复合微生物制剂的生产工艺，其特征在于，它包括以下步骤:
[0077](I)制备浓缩光合菌剂
[0078](2)制备多菌剂，先培养多菌种，然后制得多菌剂；
[0079](3)混合，将制得的光合细菌高浓缩剂和多菌剂混合按体积1:1的比例混合，并加入复合保护剂；
[0080](4)灌装；
[0081](5)成品。
[0082]所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂之前，还有如下依次步骤:光合细菌富集、光合细菌分离、光合细菌纯化、光合细菌鉴定，筛选光合菌剂发酵培养基，培养光合菌剂；所述步骤
(2)制备多菌剂之前,还有如下依次步骤:多种菌菌种驯化，筛选多菌种发酵培养基。
[0083]所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂是先用1000ml热水煮20g淀粉，淀粉糊化后加入羧甲基水溶性壳聚糖80g，共煮lOmin，待冷却后补足冷开水到1000g即得到菌剂浓缩剂，使用时将Ikg加入1000kg的光合细菌菌液中，混匀，静置24小时后移去60%上清液，即得下层高浓缩光和菌剂。
[0084]所述的光合细菌富集，其富集培养基为:富集培养基:醋酸钠3.2g，氯化铵1.1g,磷酸二氢钾1.2g，硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液 1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0 ;
[0085]所述的光合细菌分离，其分离培养基为:醋酸钠3.2g，氯化铵1.lg，磷酸二氢钾1.2g,硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液
1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0，1.8%琼脂粉；
[0086]所述的光合细菌纯化是将待分离样品加到富集培养液中，胶塞密封后厌氧光照培养，当培养液呈红棕色时，再转接到新鲜培养液二次富集，用平板倾注法厌氧分离。倾注法厌氧分离是将分离平板置于干燥锅内，在锅底添加焦性没食子酸与碳酸钠的混合物，用真空泵抽取锅内空气，充入氮气，以此操作3次后，于光照下培养7天，挑取平板上不同特征的菌落斜面培养。
[0087]所述培养光合菌剂是先将培养基组份按5L量配成10: 1，既浓缩母液为500ml，然后煮沸消毒，冷却后接到新洗净的5L塑料桶中，按8%接种量接入400mL新鲜菌液，直接用自来水补足到5L，同上连续接种培养30批，检测每两批的活菌总数及杂菌率，同时用富集培养基做比较，与第O批相 比计算第30批的活菌保持率。
[0088]所述步骤(2)制备多菌剂是用20L发酵罐连续发酵30批，每批发酵液作为下批的菌种液，发酵温度30°C，摇床转数为200rpm，通气比为1: 0.5，接种量8%，发酵25h，每两批发酵液检测一次其活菌总数和杂菌率。
[0089]所述的复合B族维生素包括:维生素BJOOmg，维生素B260mg，维生素B690mg，烟酰胺300mg,泛酸钙30mg,蒸懼水lOOOmL。
[0090]产品有效期试验
[0091]含有光合细菌、枯草芽胞菌、假丝酵母菌、硝化细菌等多菌种的产品中加入保护剂后，保存6个月后，产品中有效活菌数继续达到68亿/mL，保存12个月后有效活菌数维持在57亿/mL(详见表1)。
[0092]表1保质期试验结果
【权利要求】
1.一种复合微生物制剂生产工艺，其特征在于，它包括以下步骤: (1)制备浓缩光合菌剂 (2)制备多菌剂，先培养多菌种，然后制得多菌剂； (3)混合，将制得的光合细菌高浓缩剂和多菌剂混合按体积1:1的比例混合，并加入复合保护剂； (4)灌装； (5)成品； 其中，浓缩光合菌剂45 %~50 %，多菌剂45 %~50 %，复合保护剂2 %~3 %;所述的多菌剂包括酵母菌、枯草芽孢杆菌、硝化细菌、乳酸菌其中的至少一种或任意组合；所述的复合保护剂各组分重量百分比为甘油40 %~50 %，吐温2020 %~30 %，硼酸钠30 %~40 %。
2.根据权利要求1所述的复合微生物制剂生产工艺，其特征在于，在所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂之前，还有如下依次步骤:光合细菌富集、光合细菌分离、光合细菌纯化、光合细菌鉴定，筛选光合菌剂发酵培养基，培养光合菌剂；所述步骤(2)制备多菌剂之前,还有如下依次步骤:多种菌菌种驯化，筛选多菌种发酵培养基。
3.根据权利要求2所述的复合微生物制剂生产工艺，其特征在于，所述步骤(1)制备浓缩光合菌剂是先用1000ml热水煮20g淀粉，淀粉糊化后加入羧甲基水溶性壳聚糖80g，共煮lOmin，待冷却后补足冷开水到1000g即得到菌剂浓缩剂，使用时将Ikg加入1000kg的光合细菌菌液中，混匀，静置24小时后移去60%上清液，即得下层高浓缩光和菌剂。
4.根据权利要求3所述的复合微生物制剂生产工艺，其特征在于，所述的光合细菌富集，其富集培养基为:富集培养基:醋酸钠3.2g，氯化铵1.lg，磷酸二氢钾1.2g硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液1.5mL,纯化水1000mL, ρΗ6.8 ~7.0 ; 所述的光合细菌分离，其分离培养基为:醋酸钠3.2g，氯化铵1.lg，磷酸二氢钾1.2g，硫酸镁0.50g,氯化钠2.0g,碳酸氢钠1.0g,酵母膏0.1Og,复合B族维生素溶液1.5mL,纯化水 1000mL, ρΗ6.8 ~7.0，1.8%琼脂粉； 所述的光合细菌纯化是将待分离样品加到富集培养液中，胶塞密封后厌氧光照培养，当培养液呈红棕色时，再转接到新鲜培养液二次富集，用平板倾注法厌氧分离。倾注法厌氧分离是将分离平板置于干燥锅内，在锅底添加焦性没食子酸与碳酸钠的混合物，用真空泵抽取锅内空气，充入氮气，以此操作3次后，于光照下培养7天，挑取平板上不同特征的菌落斜面培养。
5.根据权利要求4所述的复合微生物制剂生产工艺，其特征在于，所述培养光合菌剂是先将培养基组份按5L量配成10: 1，既浓缩母液为500ml，然后煮沸消毒，冷却后接到新洗净的5L塑料桶中，按8%接种量接入400mL新鲜菌液，直接用自来水补足到5L，同上连续接种培养30批，检测每两批的活菌总数及杂菌率，同时用富集培养基做比较，与第O批相比计算第30批的活菌保持率。
6.根据权利要求5所述的复合微生物制剂生产工艺，其特征在于，所述步骤(2)制备多菌剂是用20L发酵罐连续发酵30批，每批发酵液作为下批的菌种液，发酵温度30°C，摇床转数为200rpm，通气比为1: 0.5，接种量8%，发酵25h，每两批发酵液检测一次其活菌总数和杂菌率。
7.根据权利要求6所述的复合微生物制剂生产工艺，其特征在于，所述的复合B族维生素包括:维生素BJOOmg，维生素B260mg，维生素B690mg，烟酰胺300mg，泛酸钙30mg，蒸馏水1000mL
【文档编号】C12N1/16GK103834597SQ201410088226
【公开日】2014年6月4日 申请日期:2012年11月6日 优先权日:2012年11月6日
【发明者】苏兴 申请人:防城港市金沙海洋科技有限责任公司