本发明涉及一种超氧化物歧化酶的制备方法，更具体地说，本发明涉及一种超氧化物歧化酶的层析纯化制备方法，属于超氧化物歧化酶技术领域。
背景技术：
超氧化物歧化酶(SOD)是一种广泛存在于生物体内，能催化超氧负离子发生歧化反应的金属酶类。根据其中心离子的不同分为CU／Zn-SOD，Mn-SOD，Fe-SOD三种。在体内可以清除超氧阴离子自由基，从而起到抗氧化、抗衰老、防辐射等作用。由于该类酶能有效清除机体内的超氧自由基，从而有效地预防活性氧对生物品的毒害作用，因而具有抗辐射、抗肿瘤及延缓机体内的超氧自由基，从而有效地预防活性氧对生物体的毒害作用，因而具有抗辐射、抗肿瘤及延缓机体衰老等功能，在保健品、医药和化妆品行业中有重要的应用价值。目前我国传统工业大多从动物的血液和内脏器官中提取，但这类原料来源有限，成分复杂，且在储存、运输等方面存在诸多不便，因此容易导致生产工艺复杂化，使生产成本大幅度上升。所以，寻找廉价、易得的原料，通过比较简便的方法生产高纯度的SOD成了生产企业和研究人员关注的热点。近来的研究发现，大蒜细胞中含有丰富Zn-SOD、Cu-SOD，其分子量约为32000，与从牛血等动物血红蛋白中所提取的十分接近，而且其它各项性能也来源丰富、易于处理而使生产成本大大降低，而且生产工艺也能得到很大的简化，这对于扩大生产规模，实现的广泛应用将是十分有益的。
现有制备方法制得的产品生物活性较低，工艺复杂，不易于实现工业化生产。
技术实现要素：
本发明旨在解决现有技术中制备方法的问题，提供一种超氧化物歧化酶的层析纯化制备方法，能够制得生物活性较高的产品，并实现工业化生产。
为了实现上述发明目的，其具体的技术方案如下：
一种超氧化物歧化酶的层析纯化制备方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：
A、准确量取BS-Ⅱ型大孔弱碱离子交换树脂，转移至层析柱内；用酒精洗至柱内流出液于水中不产生白色浑浊；用去离子水洗净层析柱内树脂的酒精；
B、用1N HCl对大孔弱碱离子交换树脂进行转型处理，再用去离子水洗至中性，备用；
C、准确称取SOD提取物粗品，溶解于含有酒精的去离子水中，备用；
D、以50ml/h的流速使配制好的SOD提取物粗品溶液通过层析柱；用去离子水洗去层析柱内残留的SOD溶液；
E、用酒精、NaCl水溶液洗脱树脂吸附的SOD提取物，收集流出液，浓缩即得纯化产品。
本发明在步骤A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱碱离子交换树脂为100ml。
本发明在步骤C中，所述SOD提取物粗品为20g。
本发明在步骤C中，所述酒精浓度为20%，去离子水为200ml。
本发明在步骤E中，所述酒精浓度为40-50%，所述NaCl水溶液的浓度为20%。
本发明带来的有益技术效果：
1、本发明采用BS-Ⅱ型大孔弱碱离子交换树脂层析法使SOD粗品提取物得到有效纯化，产品生物活性由50-100U/mg提高到了3000U/mg。该工艺简单、易于操作、产品纯化成本低、易于实现工业化生产。
2、本发明根据SOD的分子量大小及物理化学性质，尤其是SOD的分子极性，采用大孔树脂层析技术对大蒜SOD提取物粗品进一步分离纯化，以期获得含量较高的SOD产品。其生物活性约为3000U/mg左右。
具体实施方式
实施例1
一种超氧化物歧化酶的层析纯化制备方法，包括以下工艺步骤：
A、准确量取BS-Ⅱ型大孔弱碱离子交换树脂，转移至层析柱内；用酒精洗至柱内流出液于水中不产生白色浑浊；用去离子水洗净层析柱内树脂的酒精；
B、用1N HCl对大孔弱碱离子交换树脂进行转型处理，再用去离子水洗至中性，备用；
C、准确称取SOD提取物粗品，溶解于含有酒精的去离子水中，备用；
D、以50ml/h的流速使配制好的SOD提取物粗品溶液通过层析柱；用去离子水洗去层析柱内残留的SOD溶液；
E、用酒精、NaCl水溶液洗脱树脂吸附的SOD提取物，收集流出液，浓缩即得纯化产品。
实施例2
在实施例1的基础上，优选的：
在步骤A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱碱离子交换树脂为100ml。
在步骤C中，所述SOD提取物粗品为20g。
在步骤C中，所述酒精浓度为20%，去离子水为200ml。
在步骤E中，所述酒精浓度为40%，所述NaCl水溶液的浓度为20%。
实施例3
在实施例1-3的基础上，优选的：
在步骤A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱碱离子交换树脂为100ml。
在步骤C中，所述SOD提取物粗品为20g。
在步骤C中，所述酒精浓度为20%，去离子水为200ml。
在步骤E中，所述酒精浓度为50%，所述NaCl水溶液的浓度为20%。
实施例4
在实施例1-3的基础上，优选的：
在步骤A中，所述BS-Ⅱ型大孔弱碱离子交换树脂为100ml。
在步骤C中，所述SOD提取物粗品为20g。
在步骤C中，所述酒精浓度为20%，去离子水为200ml。
在步骤E中，所述酒精浓度为45%，所述NaCl水溶液的浓度为20%。