用于检测雌激素化合物的重组酵母及其构建方法与流程

文档序号:12410920阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种重组菌,为在酵母中表达雌激素受体β基因和含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒,得到的重组菌;

所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒依次包括所述3个串联ERE基因、驱动报告基因表达的启动子和所述报告基因。

2.根据权利要求1所述的重组菌,其特征在于:

所述重组菌中还表达抗性基因表达盒;

或所述3个串联ERE基因的核苷酸为序列表中序列4第1815‐1853位;

或,所述驱动报告基因表达的启动子为部分ADH1;

所述部分ADH1的核苷酸序列为序列4第1860‐2269位。

3.根据权利要求1或2所述的重组菌,其特征在于:

所述在酵母中表达雌激素受体β基因为将所述雌激素受体β基因以重组载体的方式导入所述酵母中进行表达;

或,所述在酵母中表达雌激素受体β基因、抗性筛选基因表达盒和含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒为将同源重组片段整合到所述酵母基因组中进行表达;

所述同源重组片段包括所述抗性筛选基因表达盒和所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒的片段。

4.根据权利要求3所述的重组菌,其特征在于:

所述重组载体为将所述雌激素受体β基因插入表达载体中,且表达所述雌激素受体β基因的载体;

所述重组载体中,驱动所述雌激素受体β基因表达的启动子为序列表中序列2或序列4所示的DNA分子;

或所述整合均采用基因组定点编辑或同源重组的方式进行;

或所述基因组定点编辑具体为ZFN编辑、TALEN编辑或CRISPR/Cas9编辑;

或所述同源重组具体为λ-red同源重组或sacB基因介导筛选的同源重组或整合质粒介导的同源重组。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:

所述雌激素受体β基因的核苷酸序列为序列1第7-1599位;

或所述抗性筛选基因表达盒的抗性筛选基因为卡那霉素抗性基因;

或所述抗性筛选基因表达盒的核苷酸序列为序列4第540‐1853位;

或所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒的报告基因为GFP基因,所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒的核苷酸序列为序列4第1815‐3242位;

或所述表达载体为p426GDP载体或p416GDP载体;

或所述同源重组片段的核苷酸序列为序列4第33‐3748位;

或所述同源重组片段通过整合质粒介导的同源重组整合;

或所述整合质粒的核苷酸序列为序列4;

或所述酵母为酿酒酵母。

6.一种构建重组菌的方法,包括如下步骤:将雌激素受体β基因和含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒导入所述酵母,得到重组菌。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:

所述方法还包括将抗性筛选基因表达盒导入所述酵母;

或,所述雌激素受体β基因以重组载体的方式导入所述酵母中进行表达;

或,所述抗性筛选基因表达盒和所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒通过同源重组片段整合到所述酵母基因组中进行表达;

所述同源重组片段包括所述抗性筛选基因表达盒和所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于:

所述重组载体为将所述雌激素受体β基因插入表达载体中,且表达所述雌激素受体β基因的载体;

所述重组载体中,驱动所述雌激素受体β基因表达的启动子为序列表中序列2或序列4所示的DNA分子;

或所述整合均采用基因组定点编辑或同源重组的方式进行;

或所述基因组定点编辑具体为ZFN编辑、TALEN编辑或CRISPR/Cas9编辑;

或所述同源重组具体为λ-red同源重组或sacB基因介导筛选的同源重组或整合质粒介导的同源重组。

9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于:

所述雌激素受体β基因的核苷酸序列为序列1第7-1599位;

或所述抗性筛选基因表达盒的抗性筛选基因为卡那霉素抗性基因;

或所述抗性筛选基因表达盒的核苷酸序列为序列4第540‐1853位;

或所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒的报告基因为GFP基因,所述含有3个串联ERE基因的报告基因表达盒的核苷酸序列为序列4第1815‐3242位;

或所述表达载体为p426GDP载体或p416GDP载体;

或所述同源重组片段的核苷酸序列为序列4第33‐3748位;

或所述同源重组片段通过整合质粒介导的同源重组整合;

或所述整合质粒的核苷酸序列为序列4;

或所述酵母为酿酒酵母。

10.权利要求1-5中任一所述重组菌在检测雌激素化合物中的应用;

或权利要求1-5中任一所述重组菌在制备检测雌激素化合物产品中的应用。

或检测雌激素化合物产品,包括权利要求1-5中任一所述重组菌。

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