肉桂挥发油水蒸气蒸馏法提取工艺的制作方法

本发明属于肉桂挥发油提取技术领域，尤其涉及一种肉桂挥发油水蒸气蒸馏法提取工艺。

背景技术：

肉桂，为樟科植物肉桂(cinnamomumcassia Presl)的干燥树皮，多用于秋季剥取，阴干。国内肉桂主要分布于广西、广东、福建、云南、海南等地。进口肉桂主要产于越南、柬埔寨等地。肉桂主要成分有挥发油、二萜及其糖苷、黄烷醇及其多聚体，此外还含有黄酮类、多酚类等多种类型的化合物。为充分利用肉桂的医药用价值，有必要对其进一步提取分离加工，对其提取物或单体深入研究，以便于发掘其中天然药用成分给新药研发提供新的资源。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供一种工艺简单、提取率高的肉桂挥发油水蒸气蒸馏法提取工艺。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

肉桂挥发油水蒸气蒸馏法提取工艺，取肉桂药材粉碎至4-65目成肉桂粉末，按体积质量比加4-12倍水于圆底烧瓶中浸泡0-120min，然后加热蒸馏4-8h回流提取，获得肉桂挥发油。

肉桂挥发油中桂皮醛含量为1.5-3.5％。

肉桂粉末的粉碎度为10目。

加水量为10倍。

浸泡时间为60min。

蒸馏时间为5h。

上述肉桂挥发油水蒸气蒸馏法提取工艺，取肉桂药材粉碎至10目成肉桂粉末，按体积质量比加10倍水于圆底烧瓶中浸泡60min，然后加热蒸馏5h回流提取。

针对肉桂挥发油缺乏有效提取分离加工方法的问题，发明人建立了一种肉桂挥发油水蒸气蒸馏法提取工艺，取肉桂药材粉碎至4-65目成肉桂粉末，按体积质量比加4-12倍水于圆底烧瓶中浸泡0-120min，然后加热蒸馏4-8h回流提取，获得肉桂挥发油。研究中，发明人以桂皮醛含量为指标，对影响提取肉桂中桂皮醛含量的药材粉碎度、浸泡时间、加水倍数、蒸馏时间等进行单因素考察，采用正交实验优选获得了肉桂挥发油的最佳提取工艺并进行方法学考察。结果表明，应用本发明提取肉桂中的挥发油，具有操作简单，挥发油出油量多，桂皮醛含量高等特点，充深入研究肉桂的医药用价值提供了技术支持。

附图说明

图1是药材粉碎度对桂皮醛含量的影响结果图。

图2是药材浸泡时间对桂皮醛含量的影响结果图。

图3是药材加水倍数对桂皮醛含量的影响结果图。

图4是药材蒸馏时间对桂皮醛含量的影响结果图。

图5是桂皮醛标准曲线图。

具体实施方式

1仪器与材料

1.1试验仪器

高效液相色谱仪(Agilent 1260型)，超声波清洗器，98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)，电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)、tTGL-16G型离心机(上海安亭科学仪器厂)，挥发油提取器、移液枪、药典筛网。

1.2试验材料

肉桂(批号20150901)购于北京同仁堂健康药业(福州)有限公司，桂皮醛对照品(批号110710-201619)购于中国食品药品检定研究院。甲醇(分析纯)，乙腈(色谱纯)，水为超纯水。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3(4.6×250mm，5μm)，流动相：乙腈-水(35：65)，检测波长：290nm，流速：1ml/min，进样体积10μl，柱温35℃。

2.2标准溶液的配置

精密量取桂皮醛对照品8.2mg，置25ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀即得对照品储备液。取桂皮醛储备液1ml至25ml容量瓶，加甲醇稀释至刻度即得每1ml含桂皮醛13.12μg的对照品溶液。

2.3单因素考察

2.3.1药材粉碎度的考察

取肉桂药材饮片，分别粉碎过4目，10目，24目，50目，65目得肉桂粉末，各取60g，分别加10倍水于1000ml圆底烧瓶中浸泡30分钟，回流5h，于挥发油提取器下端收集黄色挥发油，5000r/min离心10min，吸去上层清水后置50ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，稀释100倍后取0.5ml定容到10ml，比较桂皮醛含量选出最优粉碎度。

结果如图1所述，随着肉桂粉碎目数的增加，桂皮醛含量相应下降，其中10目至50目之间曲线变化平缓，桂皮醛含量升降变化不大，65目时桂皮醛含量下降，故选择10目、24目、50目作为粉碎度考察范围。

2.3.2浸泡时间的考察

取粉碎过24目肉桂粉末5份各60g，加10倍水于1000ml圆底烧瓶中分别浸泡Omin，30min，60min，90min，120min，其他条件均同2.3.1，测定桂皮醛含量。

结果如图2所述，随着肉桂浸泡时间的增加，桂皮醛含量随之增加，浸泡90min后，桂皮醛含量变化不大，故选择30min、60min、90min作为浸泡时间考察范围。

2.3.3加水倍数的考察

取粉碎过24目肉桂粉末5份各60g，分别加4倍，6倍，8倍，10倍，12倍水浸泡30min，其他条件均同2.3.1，测定桂皮醛含量。

结果如图3所述，加水倍数为6倍时，桂皮醛含量最大，再增加加水倍数，含量反而下降，故选择6倍、8倍、10倍作为加水倍数考察范围。

2.3.4蒸馏时间的影响

取粉碎过24目肉桂粉末5份各60g，加10倍水浸泡30min，分别加热回流3h，4h，5h，6h，7h，其他条件均同2.3.1，测定桂皮醛含量。

结果如图4所述，桂皮醛含量随提取时间的增加而上升，提取时间为5h时，含量曲线趋于平衡，故选择4h、5h、6h作为蒸馏时间考察范围。

2.4正交实验优选挥发油最佳提取工艺

根据以上单因素提取结果，以桂皮醛含量为指标设计正交实验，选择粉碎度(A)、浸泡时间(B)、加水倍数(C)、蒸馏时间(D)4个因素，每个因素3个水平的试验方案，因素水平设计如表1。

表1正交实验因素水平设计

分别称取10目、24目、50目肉桂粉末60g各三份，按上述因素水平采用L₉(3⁴)正交表进行试验，收集挥发油，结果如表2所示。

表2 L₉(3⁴)正交试验结果

表3方差分析表

根据以上结果，对肉桂挥发油提取结果进行直观分析，比较四个因素的极差，Rc＞Ra＞Rd＞Rb，因此因素影响的大小顺序为C＞A＞D＞B。由上述方差分析结果可知，因素C(加水倍数)各水平间有显著性差异(F＞9)，再结合各水平含量及实际生产，蒸馏6小时与蒸馏5小时挥发油含量差异不大，为节省成本，优选最佳肉桂挥发油提取工艺为A₁B₂C₃D₂，即：粉碎度10目，浸泡60min，加10倍水，蒸馏5小时。

2.5方法学考察

2.5.1线性关系考察

精密量取桂皮醛对照品0.0082g，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度即得0.328mg/ml桂皮醛母液，精密吸取母液1ml，稀释到25ml，得浓度为每1ml含桂皮醛0.013mg的溶液。分别进样4μL，6μL，8μL，10μL，12μL，14μL。按2.1色谱条件测定峰面积，结果如下表4所示，以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归，计算回归方程，并以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线，见图5。

表4桂皮醛对照品测定结果

回归方程：Y＝11381.5237*X+0.0194414 r＝1.00000。结果表明：桂皮醛在0.052～0.182μg范围内线性良好。

2.5.2精密度试验

根据2.1色谱条件，精密吸取对照品溶液10μL注入高效液相色谱仪，重复进样6次，分别测定峰面积，测得平均峰面积为1516.7，RSD值为0.04％，实验结果表明该仪器精密度良好。

2.5.3重复性试验

取六份同一批次的肉桂6份，每份60g，按上述正交实验所得的最优提取方案及2.1色谱条件进行桂皮醛含量测定，测得桂皮醛平均含量为2.4257％，RSD值为1.89％，结果表明该方法重复性良好。

2.5.4稳定性试验

精密量取供试品10μL，分别于0h，4h，8h，12h，16h，24h，按2.1色谱条件进样，计算所得RSD值为0.6％，结果表明供试品溶液中桂皮醛在24h内稳定。

2.5.5加样回收试验

精密称取6份已知含量(2.4257％)的10目肉桂粉末30g精密称定后，分别精密加入与样品中桂皮醛含量相近的桂皮醛对照品，按上述提取方法操作。按2.1色谱条件进样分析，测桂皮醛含量，计算回收率，得平均回收率为100.91％，RSD为2.61％，结果见表5。

表5桂皮醛回收率试验结果

2.5.6样品含量测定

以粉碎度10目，浸泡60min，加10倍水，蒸馏5小时，测样品中桂皮醛含量。结果见表6。

表6样品中桂皮醛的含量测定

3讨论

3.1桂皮醛是易挥发成分，粉碎度越细，时间越长，样品中含量越小，因此应尽量减少粉碎度，缩短粉碎时间。

3.2浸泡可以使肉桂组织细胞膨胀，细胞间隙变大，加速挥发油从药材渗出从而利于挥发油的提取。