具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液、其制备方法及应用与流程

本发明涉及细胞清洗液技术领域，具体涉及一种具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液，同时本发明还涉及该细胞清洗液的制备方法及应用。

背景技术：

在目前的疾病诊断过程中，细胞样本作为诊断信息的重要来源，具有重要意义。而且出现了直接在人体血管内捕获靶细胞样本的方法和相关器械产品，例如循环上皮细胞采集器。针对这一类产品，当靶细胞捕获完成，其有效区域(功能区)从人体血管取出后，表面除结合靶细胞外，会非特异结合很多其他的血液细胞或血液中的蛋白成分，如果不能对这些非靶细胞的血液细胞或蛋白成分进行有效清洗的话，将会对后续的靶细胞的分析鉴定产生一定的影响，也可能会由于获得的靶细胞纯度不够而无法获得真实有效的疾病诊断结果。因此，当有效区域(功能区)从人体血管取出后必须立即对其进行清洗，以除去从血液中带出的杂质细胞成分。而目前在此过程中所使用的清洗液主要以各种盐类缓冲液为主，起到简单的清洗作用，但是会导致清洗不彻底且对靶细胞造成损伤，从而影响后续检测。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液。

一种具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液，1L清洗液中：

葡萄糖0.1-1g，甘氨酸0.5-2.0g、L-丙氨酸0.5-2.0g、L-天冬氨酸0.5-2.0g、L-天冬酰胺0.5-2.0g、L-谷氨酸0.5-2.0g、L-脯氨酸0.5-2.0g、L-丝氨酸0.5-2.0g、缓冲液调节PH为8.0-9.5、其余为水。

进一步的，具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液，所述缓冲液为PBS缓冲液、PB缓冲液、HEPES缓冲液中的一种。

进一步的，具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液，1L PBS缓冲液中：

氯化钠80g，氯化钾22g，磷酸氢二钠29g，磷酸二氢钾22g，其余为水。

进一步的，具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液，1L PB缓冲液中：

磷酸氢二钠29g，磷酸二氢钾22g，其余为水。

进一步的，具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液，1L HEPES缓冲液中：

4-羟乙基哌嗪乙磺酸23.8g，其余为水。

本发明所述的具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液具有以下有益效果：

1、葡萄糖、甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸成分及其含量不仅能够有效地清洗掉细胞捕获仪器上非特异吸附的杂质，且能够对特异性吸附的靶细胞样本起到保护作用，保证靶细胞样本完整的细胞结构及良好的细胞形态，从而有利于后续靶细胞检测的有效顺利进行。

2、缓冲液的成分在特定含量范围内能够维持细胞清洗液pH在8.0-9.5范围内，使得清洗过程中的靶细胞样本不会由于环境pH的变化遭到破坏。

一种具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液的制备方法，包括以下步骤：

准确称取葡萄糖、甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-脯氨酸及L-丝氨酸，加入缓冲液调节PH为8.0-9.5，加入余量的水，用磁力搅拌至充分溶解，过滤，得清洗液。

进一步的，过滤过程如下：选用孔径0.22μm滤膜过滤。

采用上述制备方法制备得到的具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液，能够更加有效的清除掉细胞捕获仪器上非特异吸附的杂质，且对特异性吸附的靶细胞样本有保护作用。

具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液室温密封保存，保质期为1年。

具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液应用于捕获靶细胞样本的仪器产品上。

进一步的，具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液应用于循环上皮细胞采集器。

附图说明

图1为采用实施例1细胞清洗剂得到的靶细胞荧光显微镜照片。

图2为采用实施例2细胞清洗剂得到的靶细胞荧光显微镜照片。

图3为采用实施例3细胞清洗剂得到的靶细胞荧光显微镜照片。

图4为采用对比例1细胞清洗剂得到的靶细胞荧光显微镜照片。

图5为采用对比例2细胞清洗剂得到的靶细胞荧光显微镜照片。

图6为采用对比例3细胞清洗剂得到的靶细胞荧光显微镜照片。

具体实施方式

实施例1-3：

本发明公开了具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液，原料成分含量如下表1所示：

表1原料含量表

上述实施例1-3制备的具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液的制备方法，包括以下步骤：

准确称取葡萄糖、甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-脯氨酸及L-丝氨酸，加入缓冲液调节PH为8.0-9.5，加入余量的水，用磁力搅拌至充分溶解，选用孔径0.22μm滤膜过滤，得清洗液。

将捕获靶细胞样本的循环上皮细胞采集器功能区没入实施例1-3制备的具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液中，左右及上下旋转3-5s，重复三次，用荧光显微镜观察样品，结果如图1-图3所示。从图1-图3可见，采用实施例1-3制备的具有靶细胞样本保护功能的细胞清洗液清洗的采集器杂质少，所得荧光染色图片清晰，且样本中细胞形态好，完整性好。

对比例1-3

根据上述实施例设置对比例1-3，原料成分含量如下表2所示：

表2原料含量表

上述对比例1-3所述的细胞清洗液的制备方法，包括以下步骤：

准确称取葡萄糖、甘氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、L-脯氨酸及L-丝氨酸，加入缓冲液调节PH为8.0-9.5，加入余量的水，用磁力搅拌至充分溶解，选用孔径0.22μm滤膜过滤，得清洗液。

将捕获靶细胞样本的循环上皮细胞采集器功能区没入对比例1-3制备的细胞清洗液中，左右及上下旋转3-5s，重复三次，用荧光显微镜观察样品，结果如图4-图6所示。从图4-图6可见，采用对比例1-3制备的细胞清洗液清洗的采集器杂质多，且样本中细胞形态及完整性较实施例1-3变差。