本发明涉及一种新型的肽合成方法，具体而言，涉及能够容易地进行正确的肽伸长反应的肽合成方法。
背景技术：
：一直以来，在化学工艺中，广泛使用将在液体中溶解的特定成分以固体的形式分离的方法。原因是通过仅将特定成分固体化(结晶化)，会使反应后的分离、精制变得容易。根据该方法，例如，在近年来的医药品的开发研究等所使用的化合物库合成等逐次多阶段合成中，通过每当各反应结束时使必要或不必要的化合物固体化(结晶化)，能够容易地实现已固体化(结晶化)的物质的分离、精制。因此，能够解决以往成为问题的工序的繁琐性。另外，也使用如下方法：随着液体的相分离，使已溶解的特定成分选择性地溶解(选择性分配)在特定相中，从而实现与其它成分的分离。根据该方法，能够不伴随固体化(结晶化)地分离特定成分，因此能够有助于工序的迅速化、简便化。这样的溶解在溶液中的特定成分的固体化(结晶化)或者特定成分在液体的特定相中的选择性溶解(选择性分配)通过在化合物的化学性质、物性和与溶剂的关系中满足一定条件而实现。然而，固体化(结晶化)或选择性溶解(选择性分配)的条件在许多情况下必须得进行试错，进行经验性探索。特别是，在逐次多阶段合成中，需要基于各个阶段中合成的化合物所特有的性质来研究各个阶段的条件，因此工艺开发耗费大量成本和时间。因此，提出来具有连接臂(linker)的载体分子，其敏感地感知溶剂组成的变化而使溶解状态和不溶解(结晶化)状态可逆地变化，或者随着液体的相分离使已溶解的特定成分选择性地以高浓度溶解(选择性分配)在特定相中。在这样的载体分子中，能够介由连接臂来键合各种化合物。因此，被键合的化合物能够随着载体分子从溶解状态到不溶解(结晶化)状态或者与其相反地容易地进行状态变化。或者，能够使已与载体分子键合的化合物选择性地以高浓度溶解(选择性分配)于分离成双相的液体的特定相中。另外，对于这样的载体分子，即便在因逐次化学反应而键合的化合物的化学结构变化的情况下，也能够通过几乎相同的条件而可逆地重复溶解状态和不溶解(结晶化)状态、或者选择性地以高浓度溶解(选择性分配)于分离成双相的液体的特定相中。如果使用这样的溶解状态和不溶解(结晶化)状态能够可逆地变化或者能够诱导选择性分配状态的载体分子，则能够直接利用有机化学的一般的液相反应的知识，从均匀的溶液状态选择性地分离作为分离对象的化合物。即，在液相反应之后，能够以在溶液中残留其它可溶性成分的状态分离特定的化合物。作为能够可逆地重复溶解状态和不溶解状态的载体，提出了各种化合物。例如有本发明人等所提出的导入了长链脂肪酸的苄醇化合物(专利文献1～4)、或导入了长链脂肪酸的芴化合物(专利文献5)、或导入了长链脂肪酸的二苯甲烷化合物(专利文献6)。肽合成技术中有固相肽合成法(spps法)和液相肽合成法(lpps法)。固相肽合成法在原理上无法在氨基酸伸长反应的各阶段进行精制。另外，合成成本高，因此，适用于少量生产。另一方面，液相肽合成法虽然通用于大量生产，但如果肽链变长，则肽伸长反应变得困难，在长链的肽合成中存在课题。因此，提出了使用能够可逆地重复溶解状态和不溶解状态的上述载体进行肽合成(专利文献1～6)。在肽合成中存在肽伸长反应中产生氨基酸残基的脱落的问题，即便在使用上述载体的情况下也成为问题。作为氨基酸残基的脱落的解决对策，增加氨基酸和缩合剂的当量。然而，作为其结果，产生如下新问题：如果在反应液中过量残留氨基酸活性种，则在n末端的脱保护时发生双重攻击(double-hit)。因此，存在目标氨基酸的收率降低的问题。这里，双重攻击表示在目标肽中进一步插入一个多余的氨基酸残基。作为其解决方法，在脱保护前，通过清洗从反应体系中除去氨基酸活性种。例如提出了如下方法。在使用苄氧羰基(cbz或z)或叔丁氧羰基(boc)作为保护基的液相肽合成法中，为了除去残留在反应体系中的氨基酸的活性酯，添加具有β-丙胺酸-obz等阴离子成分的胺作为俘获剂(scavenger)(专利文献7)。在该方法中，将保护基从n末端脱保护时，俘获体的阴离子成分保护基也同时脱离，变为水溶性。其后，用碱性水-有机溶剂进行液-液萃取，接着，用水除去缩合剂和氨基酸成分。然而，使用cbz作为保护基时，如果在肽序列中有met或cys，则脱保护催化剂会失活而无法应用。另外，在该方法中，因为二苯并富烯无法除去，所以无法使用芴甲氧羰基(fmoc)作为保护基。另外，在使用boc作为保护基的液相肽合成法中，为了除去残留在反应体系中的氨基酸的活性酯，提出了以下方法：用碱性水(例如，5％碳酸钠水溶液)将活性酯水解，并且利用液-液萃取除去氨基酸成分(专利文献8)。然而，在该方法中，有可能在ph＝11以上的碱性较强条件下引起差向异构化。另外，因为二苯并富烯无法除去，所以无法使用芴甲氧羰基(fmoc)作为保护基。即便在使用上述的能够可逆地重复溶解状态和不溶解状态的载体的肽合成中，为了解决因过量氨基酸活性种所致的双重攻击的问题，也可以在脱保护前进行通过清洗将氨基酸活性种从反应体系中除去的操作。然而，在使载体不溶解的析晶操作中有时氨基酸活性种无法利用清洗完全除去，而且，需要缩合反应后和脱保护后的2次清洗，存在需要大量的清洗溶剂的问题。另外，作为肽合成中的fmoc基的除去方法，报告了如下方法：将fmoc从n末端脱保护后，使其与硫醇基羧酸共存，生成二苯并富烯，其后，利用碱性水-有机溶剂进行液-液萃取，接着，用水除去缩合剂、氨基酸成分和二苯并富烯，由此除去氨基酸活性酯(专利文献8)。另外，公开了在将fmoc脱保护之前，可以将活性酯用硫醇基二氧化硅除去或用碱性水分解，暗示了将氨基酸的活性酯作为水溶性产物而除去。此外，作为肽合成中的fmoc基的除去方法，报告了如下方法：将fmoc从n末端脱保护后，使烷基硫醇或固相硫醇共存，生成二苯并富烯，接着，浓缩后，利用醚将肽成分析晶，进行固液分离，由此除去二苯并富烯加成物，但对于氨基酸活性酯的除去，没有记载(非专利文献1)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特开2003-183298号公报专利文献2：日本特开2004-059509号公报专利文献3：wo2007/034812号公报专利文献4：wo2007/122847号公报专利文献5：wo2010/104169号公报专利文献6：wo2010/113939号公报专利文献7：日本特开2003-55396号公报专利文献8：wo2007/099656号公报非专利文献非专利文献1：jamese.sheppeckii等,tetrahedornletters41(2000)技术实现要素：本发明的目的在于提供一种肽合成方法，其在使用能够可逆地重复溶解状态和不溶解状态的载体的肽合成反应中可容易地解决在脱保护反应时的反应体系中存在的氨基酸活性种的问题。本发明人等鉴于上述课题，进行了深入研究，结果发现通过在脱保护反应前利用特定的俘获剂使氨基酸活性种非活性化，从而即便在n末端的脱保护前不将它们从反应体系中除去，在脱保护时也会防止氨基酸的双重攻击，从而完成了本发明。本发明包含以下内容。(1)一种肽合成方法，包含以下的工序a～d：a.在缩合剂存在下，使n-fmoc保护氨基酸或n-fmoc保护肽与c-载体保护氨基酸、c-载体保护肽或c-载体保护氨基酸酰胺缩合而得到n-fmoc-c-载体保护肽，上述n-fmoc保护是利用芴甲氧羰基来保护n末端，上述c-载体保护是利用随着所溶解的溶剂的组成变化而析晶的载体来保护c末端；b.向反应体系中添加选自碳原子数为1～14的烷基胺、碳原子数为1～14的芳香族胺、羟基胺中的至少一种胺(其中，烷基胺或芳香族胺为伯胺或仲胺)；c.将n末端脱保护；以及d.通过使得到的c-载体保护肽所溶解的溶剂组成变化，从而使该c-载体保护肽析晶而进行分离。(2)根据上述(1)所述的肽合成方法，其中，上述载体为选自下述化合物中的化合物，具有下述结构的化合物(在本申请说明书中有时称为“ka”)：(式中，r1和r5为氢原子，r2、r3和r4为碳原子数8～30、优选12～22的烷氧基。另外，式中，rx是由下述式表示并与氨基酸或肽的c末端键合的基团，(这里r7表示氢原子、碳原子数1～6的烷基、苄基或烷氧基取代苄基，r6表示氢原子、苯基或烷氧基取代苯基)应予说明，上述式是以与氨基酸或肽的c末端键合前的状态来表示的)；具有下述结构的化合物(在本申请说明书中有时称为“kb”)：(式中，r2、r4和r5为氢原子，r1和r3为碳原子数12～30、优选18～22的烷氧基。另外，式中，ry是由下述式表示并与氨基酸或肽的c末端键合的基团，(这里r7表示氢原子、碳原子数1～6的烷基、苄基或烷氧基取代苄基，r6表示氢原子、苯基或烷氧基取代苯基)应予说明，上述式是以与氨基酸或肽的c末端键合前的状态来表示的)；以及具有下述结构的化合物(在本申请说明书中有时称为“kc”)：(式中，r1、r3和r5为氢原子，r2和r4为碳原子数12～30、优选18～22的烷氧基。另外，式中，rz是由下述式表示并与氨基酸或肽的c末端键合的基团，(这里r7表示氢原子、碳原子数1～6的烷基、苄基或烷氧基取代苄基，r6表示氢原子、苯基或烷氧基取代苯基)应予说明，上述式是以与氨基酸或肽的c末端键合前的状态来表示的)。(3)根据上述(1)所述的肽合成方法，其中，上述载体为选自下述化合物中的化合物，(式中，x为卤素，y为8～12的整数，z为17～29的整数)，(式中，x各自独立地为7～21的整数)，以及(式中，x各自独立为11～29的整数)，(应予说明，上述各式是以与氨基酸或肽的c末端键合前的状态来表示的)。(4)根据上述(1)所述的肽合成方法，其中，上述载体为选自下述化合物中的化合物，(3,4,5-三(十八烷基)苄醇)(2,4-二(二十二烷氧基)苄醇)、(3,5-二(二十二烷氧基)苄醇)、(式中，x为f或cl)、(2-(3,4,5-三(十八烷氧基)苄基)-4-甲氧基苄醇)、和，(双(4-二十二烷氧基苯基)-甲胺)，(应予说明，上述各式是以与氨基酸或肽的c末端键合前的状态来表示的)。(5)根据上述(1)～(4)中任一项所述的肽合成方法，其中，上述胺为碳原子数1～10的烷基胺或羟基胺。(6)根据上述(1)～(5)中任一项所述的肽合成方法，其中，上述胺为碳原子数3或4的烷基胺。(7)根据上述(1)～(6)中任一项所述的肽合成方法，其中，工序b中的胺当量相对于在工序a的缩合反应后理论上残留的氨基酸当量为1～30倍的量。(8)根据上述(1)～(7)中任一项所述的肽合成方法，其中，使上述得到的c-载体保护肽所溶解的溶剂组成变化的组成变化方法通过以下方式进行：将溶液的溶剂浓缩，其后，加入不良溶剂进行固化。(9)根据上述(8)所述的肽合成方法，其中，上述不良溶剂为选自乙腈、任意比例的含水乙腈、甲醇、任意比例的含水甲醇和水中的溶剂。(10)根据上述(1)～(9)中任一项所述的肽合成方法，其中，包括：使用在工序d中经析晶分离的c-载体保护肽，将工序a～工序d重复进行1次以上。(11)根据上述(1)～(10)所述的肽合成方法，其中，进一步包括以下工序：e.用有机溶剂清洗经析晶分离的c-载体保护肽的晶体。(12)根据上述(1)～(11)中任一项所述的肽合成方法，其中，利用一锅合成法进行上述a～c的工序。本发明的肽合成方法能够用简便的方法解决在脱保护反应时的反应体系中存在的氨基酸活性种的问题，通用性优异。由本发明合成的肽的氨基酸的脱落或双重攻击的问题少，根据本发明的方法，能够合成高收率、高品质的肽。具体实施方式以下，对于本发明，以例示的实施形态为例，与能够在本发明的实施中使用的优选的方法和材料一起进行说明。应予说明，只要在文中没有特别说明，则在本说明书中使用的全部的技术术语和科学术语具有与本发明所属的
技术领域：
的本领域技术人员通常的理解相同的含义。另外，与本说明书中记载等同或同样的任意材料和方法可以在本发明的实施中同样地使用。另外，与本说明书中记载的发明相关而引用在本说明书中的全部刊物和专利，例如作为表示能够在本发明中使用的方法或材料以及其它的内容来构成本说明书的一部分。以下对在本说明书中使用的术语进行说明。1.n-fmoc保护氨基酸和肽由芴甲氧羰基(fmoc)保护n末端的氨基酸(n-fmoc保护氨基酸)是指如下氨基酸：氨基酸的氨基由fmoc保护，另一方面，羰基未被保护而具有反应性。由芴甲氧羰基(fmoc)保护n末端的肽(n-fmoc保护肽)是指如下肽：肽链的n末端的氨基由fmoc保护，另一方面，c末端的羰基未被保护而具有反应性。应予说明，n-fmoc保护氨基酸或n-fmoc保护肽具有羟基、氨基、胍基、羧基、巯基等反应性强的官能团时，可以对这些官能团导入肽化学中使用的一般的保护基，在反应结束后，可以根据需要除去保护基而得到目标化合物。作为羟基的保护基，可举出tbu基(叔丁基)、trt基(三苯甲基)、bz基(苯甲酰基)、乙酰基、甲硅烷基等，作为氨基的保护基，可举出boc基(叔丁氧羰基)、fmoc基(芴甲氧羰基)、cbz基(苄氧羰基)、trt基、mmt基(对甲氧基三苯甲基)、ivdde基(1-(4,4-二甲基-2,6-二氧代环己基亚甲基)-3-甲基丁基)等，作为胍基的保护基，可举出pbf基(2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基)、pmc基(2,2,5,7,8-五甲基苯并二氢吡喃-6-磺酰基)、硝基等，作为羧基的保护基，可举出tbu基、甲基、乙基、bz基等，作为巯基的保护基，可以举出trt基、acm基(乙酰胺基甲基)、tbu基、s-tbu基等。2.c-载体保护氨基酸、肽和氨基酸酰胺由随着溶解的溶剂的组成变化而析晶的载体保护c末端的氨基酸(c-载体保护氨基酸)是指如下氨基酸：氨基酸的羧基由以下记载的载体保护，另一方面，氨基未被保护而具有反应性。由随着溶解的溶剂的组成变化而析晶的载体保护c末端的肽(c-载体保护肽)是指如下肽：肽链的c末端的羧基由以下记载的载体保护，另一方面，n末端的氨基未被保护而具有反应性。由随着溶解的溶剂的组成变化而析晶的载体保护c末端的氨基酸酰胺(c-载体保护氨基酸酰胺)是指如下氨基酸酰胺：氨基酸的羧基被以下记载的载体保护，另一方面，氨基未被保护而具有反应性。应予说明，c-载体保护氨基酸或c-载体保护肽或c-载体氨基酸酰胺具有羟基、氨基、胍基、羧基、巯基等反应性强的官能团时，可以对这些官能团导入肽化学中使用的一般的保护基，在反应结束后，可以根据需要除去保护基而得到目标化合物。作为羟基的保护基，可举出tbu基、trt基、bz基、乙酰基、甲硅烷基等，作为氨基的保护基，可举出boc基、fmoc基、cbz基、trt基、mmt基、ivdde基等，作为胍基的保护基，可举出pbf基、pmc基、硝基等，作为羧基的保护基，可举出tbu基、甲基、乙基、bz基等，作为巯基的保护基，可以举出trt基、acm基、tbu基、s-tbu基等。3.随着溶解的溶剂组成的变化而析晶的载体随着溶解的溶剂组成的变化而析晶的载体是指根据载体溶解的溶剂的组成变化而溶解状态和固体化(结晶化)状态可逆地变化的载体。具体而言，不限定于此，例如可以举出以下化合物，通过使这些化合物与氨基酸或肽的c末端键合，能够制成在本发明中使用的c末端被载体保护的c-载体保护氨基酸、c-载体保护肽或c-载体保护氨基酸酰胺。3-1.载体a具有下述结构的化合物(在本申请说明书中有时称为“ka”)：(式中，r1和r5为氢原子，r2、r3和r4为碳原子数8～30的烷氧基。另外，式中，rx是由下述式表示并与氨基酸或肽的c末端键合的基团，(这里r7表示氢原子、碳原子数1～6的烷基、苄基或烷氧基取代苄基，r6表示氢原子、苯基或烷氧基取代苯基))。上述式中，r2、r3和r4更优选碳原子数为8～22，进一步优选碳原子数为12～18。上述式中，rx更优选为羟甲基、氨甲基、巯基甲基，进一步优选为羟甲基。在上述式所包含的化合物中，优选的化合物是3,4,5-三(十八烷基)苄醇、3,4,5-三(十八烷基)苄胺、3,4,5-三(十八烷基)苄基硫醇，进一步优选的化合物是3,4,5-三(十八烷基)苄醇、3,4,5-三(十八烷基)苄胺，最优选的化合物是下述式表示的3,4,5-三(十八烷基)苄醇。对于上述化合物与氨基酸或肽的c末端的键合，在本发明中也可以没有限制地使用在肽合成中一般使用的方法，例如可以通过使用了dipci(二异丙基碳二亚胺)的酯化而进行。3-2.载体b具有下述结构的化合物(在本申请说明书中有时称为“kb”)：(式中，r2，r4和r5为氢原子，r1和r3为碳原子数12～30的烷氧基。另外，式中，ry是由下述式表示并与氨基酸或肽的c末端键合的基团，(这里r7表示氢原子、碳原子数1～6的烷基、苄基或烷氧基取代苄基，r6表示氢原子、苯基或烷氧基取代苯基))。上述式中，r1和r3更优选碳原子数为18～22。上述式中，rx更优选为羟甲基、氨甲基、巯基甲基，进一步优选为羟甲基。在上述式所包含的化合物中，优选的化合物是2,4-二(二十二烷氧基)苄醇、2,4-二(二十二烷氧基)苄胺、2,4-二(二十二烷氧基)苄基硫醇，进一步优选的化合物是2,4-二(二十二烷氧基)苄醇、2,4-二(二十二烷氧基)苄胺，最优选的化合物是下述式表示的2,4-二(二十二烷氧基)苄醇。对于上述化合物与氨基酸或肽的c末端的键合，在本发明中也可以没有限制地使用在肽合成中一般使用的方法，例如可以通过使用了dipci的酯化而进行。3-3.载体c具有下述结构的化合物(在本申请说明书中有时称为“kc”)：(式中，r1、r3和r5为氢原子，r2和r4为碳原子数12～30的烷氧基。另外，式中，rz是由下述式表示并与氨基酸或肽的c末端键合的基团，(这里r7表示氢原子、碳原子数1～6的烷基、苄基或烷氧基取代苄基，r6表示氢原子、苯基或烷氧基取代苯基))，上述式中，r2和r4更优选碳原子数为18～22。上述式中，rx更优选为羟甲基、氨甲基、巯基甲基，进一步优选为羟甲基。在上述式所包含的化合物中，优选的化合物是3,5-二(二十二烷氧基)苄醇、3,5-二(二十二烷氧基)苄胺、3,5-二(二十二烷氧基)苄基硫醇，进一步优选的化合物是3,5-二(二十二烷氧基)苄醇、3,5-二(二十二烷氧基)苄胺，最优选的化合物是下述式表示的3,5-二(二十二烷氧基)苄醇。对于上述化合物与氨基酸或肽的c末端的键合，在本发明中也可以没有限制地使用肽合成中一般使用的方法，例如可以通过利用了dipci的酯化而进行。3-4.载体d具有下述结构的化合物：(式中，x为卤素，y为8～12的整数，z为17～29的整数)。上述式中，x优选为f或cl，更优选为f。最优选的化合物是由下述式表示。(式中，x为f或cl。)对于上述化合物与氨基酸或肽的c末端的键合，在本发明中也可以没有限制地使用肽合成中一般使用的方法，例如可以通过利用了碱催化剂的酯化而进行。3-5.载体e具有下述结构的化合物：(式中，x各自独立地为7～21的整数。)最优选的化合物是由下述式表示的(2-(3,4,5-三(十八烷氧基)苄基)-4-甲氧基苄醇。对于上述化合物与氨基酸或肽的c末端的键合，在本发明中也可以没有限制地使用肽合成中一般使用的方法，例如可以通过利用了dipci的酯化而进行。3-6.载体f具有下述结构的化合物：(式中，x各自独立为11～29的整数。)最优选的化合物是由下述式表示的双(4-二十二烷氧基苯基)甲胺。对于上述化合物与氨基酸或肽的c末端的键合，在本发明中也可以没有限制地使用肽合成中一般使用的方法，例如可以通过利用了dicpi/hobt的酰胺化而进行。4.肽的制造方法本发明的肽合成方法能够适当地用于使用了能够可逆地重复溶解状态和不溶解状态的载体的肽制造方法。作为包含本发明的肽合成方法的肽制造方法，例如可以例示以下这样的工序。(i)偶联工序在缩合剂存在下，使n-fmoc保护氨基酸或肽与c-载体保护氨基酸或肽缩合而得到n-fmoc-c-载体保护肽；(ii)使用碳原子数为1～14的烷基伯胺或烷基仲胺、或者碳原子数为1～14的芳香族伯胺或芳香族仲胺、或者羟基胺(以下称为胺俘获剂)形成氨基酸活性酯的俘获体；(iii)从肽的n末端除去fmoc基将n末端脱保护；(iv)使用不良溶剂将键合了肽的载体(c-载体保护肽)析晶、分离；(v)将上述工序(i)～(v)重复所需次数；和(vi)从肽除去载体进行最终脱保护。也可以在上述工序(iv)之后进一步增加以下工序：(vii)用有机溶剂清洗经析晶·分离的c-载体保护肽，由此，更完全地除去含有氨基酸活性酯的俘获体的杂质。以下，对各个工序进行说明。4-1.偶联工序在本工序中，例如通过在溶剂中混合n-fmoc保护氨基酸、和c-载体保护肽、c-载体保护氨基酸或c-载体保护氨基酸酰胺、和缩合剂(优选缩合剂和活化剂)而得到延长了一个氨基酸残基的n-fmoc-c-载体保护肽。另外，如果使用n-fmoc保护肽来代替n-fmoc保护氨基酸，则得到延长了n-fmoc肽的氨基酸残基的数目左右的氨基酸残基的n-fmoc-c-载体保护肽。各成分的添加的方法或顺序可以没有特别限制地进行，可以使用在肽合成的偶联工序中通常使用的方法。n-fmoc保护氨基酸或n-fmoc保护肽相对于c-保护载体肽的使用量，相对于c-载体保护肽等，通常为1.03～8当量，优选为1.01～4当量，更优选为1.05～2当量，进一步优选为1.1～1.5当量。如果少于该范围，则容易残留未反应的c-保护肽等，变得容易引起氨基酸的脱落。在本发明的肽合成方法中，可以利用其后添加的胺俘获剂来俘获(捕获)未反应的氨基酸的活性酯，在n-fmoc-c-载体保护肽的n末端的脱保护后，使用有机溶剂将它们容易地除去。因此，即便使用更多的n-fmoc保护氨基酸或n-fmoc保护肽，与以往方法相比也不产生残留的问题。作为缩合剂，肽合成中一般使用的缩合剂在本发明中可以没有限制地使用，不限定于此，例如可以举出4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐(dmt-mm)、o-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(hbtu)、o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(hatu)、o-(6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(hbtu(6-cl))、o-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(tbtu)、o-(6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(tctu)、(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳六氟磷酸盐(comu)、二异丙基碳二亚胺(dipci)、二环己基碳二亚胺(dcc)和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(wsc)，优选为dmt-mm、hbtu、hatu或comu。缩合剂的使用量相对于n-fmoc保护氨基酸，通常为0.7～1.5当量，优选为0.85～1.0当量。在偶联工序中，为了促进反应并抑制外消旋等副反应，优选添加活化剂。这里，活化剂是指在与缩合剂的共存下将氨基酸衍生为对应的活性酯、对称酸酐等而易于形成肽键(酰胺键)的试剂。作为活化剂，肽合成中一般使用的活化剂可以在本发明中没有限制地使用，例如可以举出hobt、hoct、hoat、hoobt、hosu、hopht、honb、五氟苯酚等，优选为hobt、hoobt、hoct、hoat、honb、hosu。活化剂的使用量相对于n-fmoc氨基酸，通常为0～4.0当量，优选为0.1～1.5当量。对于偶联工序中使用的溶剂，肽合成中一般使用的溶剂可以在本发明中没有限制地使用，不限定于此，例如可举出dmf、nmp、乙酸乙酯、thf、乙腈、氯仿、二氯甲烷或它们的混合溶剂等，优选为thf、dmf或它们的混合物。溶剂的使用量为溶解c-载体保护肽等的浓度通常达到0.3m～0.1mm的量，优选为达到0.2m～1mm的量。对于反应温度，在本发明中也可使用肽合成中一般使用的温度，例如，通常为-20～40℃，优选为0～30℃的范围内。反应时间(1个循环)通常为0.5～30小时。4-2.利用胺俘获剂而形成氨基酸活性酯的俘获体的工序使用本发明的肽制造方法的特征在于，在氨基酸的偶联工序后，在反应体系中添加胺俘获剂来俘获(捕获)未反应的氨基酸活性酯。作为可以在本发明中使用的胺俘获剂，可以举出烷基伯胺或烷基仲胺、或者芳香族伯胺或芳香族仲胺、或者羟基胺。不限定于此，作为可以在本发明中使用的烷基胺，例如可以举出碳原子数1～14的烷基胺，优选为碳原子数2～10的烷基胺，更优选为碳原子数2～8的烷基胺，进一步优选为碳原子数3～4的烷基胺。另外作为可以在本发明中使用的芳香族胺，例如可以举出碳原子数1～14的芳香族胺，优选为碳原子数6～10的芳香族胺。作为具体的胺俘获剂，不限定于此，例如可以举出丙胺、甲胺、己胺、苯胺、甲苯胺、2,4,6-三甲基苯胺、甲氧苯胺、乙氧苯胺、羟基胺，特别优选为丙胺。胺俘获剂的添加量相对于理论上残留的氨基酸当量，通常为1～30当量，优选为1～15当量，更优选为2～6当量，进一步优选为3～4当量。如果胺俘获剂的添加量少于该范围，则氨基酸活性酯的俘获(捕获)变得不充分，在以后的工序中难以除去n-fmoc保护氨基酸或肽，另一方面，如果大于该范围，则难以除去未反应胺俘获剂。4-3.n末端脱保护工序在使用本发明方法的肽制造方法中，在利用胺俘获剂俘获(捕获)反应体系中的氨基酸活性酯而形成俘获体后进行从n-fmoc-c-载体保护肽中除去fmoc基。对于从n末端除去fmoc基，在本发明中可以使用肽合成中一般使用的除去方法。并不限定于此，例如可以使用dbu和哌啶进行。另外，其后也可以进行使用氯化铵水溶液、氯化钠水溶液或两者的水洗。4-4.载体保护肽的析晶·分离工序在使用本发明方法的肽制造方法中，能够使除去了fmoc基的c-载体保护肽不溶解(结晶)而分离。不溶解例如可以通过使c-载体保护肽所溶解的溶液的组成变化而进行。用于不溶解(析晶)的条件可以根据使用的载体的种类或合成的c-载体保护肽的种类或长度而适当地选择。例如，虽然没有对其进行限定，但可以举出如下的方法。(组成变化方法)作为使本发明方法中优选使用的溶液组成发生变化的方法，只要是能够使溶解有c-载体保护肽的溶液的组成变化的方法，就没有特别限制。作为改变溶液组成的优选的方法，例如可举出直接在溶解有c-载体保护肽的溶液中或在将溶液的溶剂浓缩后加入不良溶剂进行析晶的方法。这里，浓缩是指将溶剂的一部分或全部馏去。其后，例如可以通过过滤或离心分离来分离析出的晶体。分离的晶体优选可以通过用有机溶剂进行清洗而将与晶体一同分离出的杂质等从结晶化的c-载体保护肽中完全除去。本发明中的不良溶剂是指c-保护氨基酸酰胺溶解不良的溶剂，即，c-保护氨基酸酰胺难以溶解或不溶解的溶剂。c-保护氨基酸酰胺难以溶解或不溶解是指在25℃时c-保护氨基酸酰胺的溶解度小于1质量％的常温下为液态的溶剂即可，优选为乙腈、任意比例的含水乙腈、甲醇、任意比例的含水甲醇、水。由上所述，只要采用本发明的方法，就能够利用一锅合成法进行从缩合反应(偶联反应)到脱保护反应。4-5.最终脱保护工序在最终脱保护工序中，可以通过除去具有所希望的氨基酸残基数的c-载体保护肽的c末端的载体而得到作为最终目标物的肽。除去c末端的载体的方法没有特别限定，使用本身公知的脱保护法即可。例如可以利用使用了tfa的脱保护法，更具体而言，优选使用如下比例的三氟乙酸进行脱保护，在使用ka时采用50～100％三氟乙酸，在使用kb时采用1～100％三氟乙酸，在使用kc时采用95～100％三氟乙酸，在使用载体d和载体e时采用1～100％三氟乙酸，在使用载体f时采用95～100％三氟乙酸。作为得到的最终目标物的肽可以按照肽化学中常用的方法进行分离精制。例如可以通过将反应混合物进行萃取清洗、析晶、色谱分析等而对作为最终目标物的肽进行分离精制。由本发明的肽合成方法制造的肽的种类没有特别限定，但优选肽的氨基酸残基数例如为几十个以下左右。由本发明的肽合成方法得到的肽可以与现有的或未知的合成肽或天然肽同样地应用于各种领域，例如，医药品、食品、化妆品、电子材料等领域，但不限定于此。实施例以下，将下述所示的序列的肽作为例子来示出合成方法，但本发明不限定于此。(肽a)h-lys(boc)ala-okb(肽b)fmoc-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-oh(肽c)h-gln(trt)-ser(ψme,mepro)-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(肽d)h-d-arg-arg-pro-hyp-gly-thi-ser-d-tic-oic-arg-oh(肽e)h-ala-gln(trt)-ser(ψme,mepro)-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-leu-okb(肽f)fmoc-ser(tbu)-leu-arg(pbf)-arg(pbf)-ser(tbu)-ser(tbu)-cys(trt)-phe-gly-oh(肽g)hcl·h-ser(tbu)-leu-arg(pbf)-arg(pbf)-ser(tbu)-ser(tbu)-cys(trt)-phe-gly-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-ala-gln(trt)-ser(ψme,mepro)-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(肽h)h-ser-leu-arg-arg-ser-ser-ser-phe-gly-gly-arg-met-asp-arg-ile-gly-gln-ser-gly-leu-gly-cys-asn-ser-phe-arg-tyr-oh(7cys-23cys，ss键)(肽i)h-glu(otbu)-ile-pro-glu(otbu)-glu(otbu)-tyr(tbu)-leu-okb(肽j)fmoc-gly-gly-asn(trt)-gly-asp(otbu)-phe-glu(otbu)-oh(肽k)fmoc-d-phe-pro-arg(pbf)-pro-gly-gly-oh(肽l)h-d-phe-pro-arg(pbf)-pro-gly-gly-gly-gly-asn(trt)-gly-asp(otbu)-phe-glu(otbu)-glu(otbu)-ile-pro-glu(otbu)-glu(otbu)-tyr(tbu)-leu-okb(肽m)h-d-phe-pro-arg-pro-gly-gly-gly-gly-asn-gly-asp-phe-glu-glu-ile-pro-glu-glu-tyr-leu-oh(肽n)h-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-okb(肽o)fmoc-lys(boc)leu-gln(trt)-gln(trt)-arg(pbf)-lys(boc)-glu(otbu)-ser(tbu)-lys(boc)-oh(肽p)boc-gly-ser(tbu)-ser(正辛酰基)-phe-leu-ser(tbu)-pro-glu(otbu)-his(trt)-gln(trt)-oh(肽q)boc-gly-ser(tbu)-ser(正辛酰基)-phe-leu-ser(tbu)-pro-glu(otbu)-his(trt)-gln(trt)-lys(boc)-leu-gln(trt)-gln(trt)-arg(pbf)-lys(boc)-glu(otbu)-ser(tbu)-lys(boc)-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-okb(肽r)h-gly-ser-ser(正辛酰基)-phe-leu-ser-pro-glu-his-gln-lys-leu-gln-gln-arg-lys-glu-ser-lys-lys-pro-pro-ala-lys-leu-gln-pro-arg-oh在本说明书中和以下的实施例中，使用下述的缩写。aas：1个以上的任意的氨基酸残基aax：任意的氨基酸残基boc：叔丁氧羰基comu：(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲氨基-吗啉代-碳六氟磷酸盐cpme：环戊基甲基醚dbu：1,8-二氮杂双环[5.4.0]-7-十一烯dcm：二氯甲烷dipci：二异丙基碳二亚胺dmap：n,n-二甲基-4-氨基吡啶dmf：n,n-二甲基甲酰胺dmt-mm：4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐edt：1,2-乙二硫醇hatu：o-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐hbtu：o-(苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐hoat：1-羟基-7-氮杂苯并三唑hobt：1-羟基苯并三唑ka：3,4,5-三(十八烷氧基)苄基kb：2,4-二(二十二烷氧基)苄基kc：3,5-二(二十二烷氧基)苄基me：甲基oxyma：氰基(羟基亚氨基)乙酸乙酯pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基su：琥珀酰亚胺基tbu：叔丁基tfa：三氟乙酸tfe：2,2,2-三氟乙醇thf：四氢呋喃tis：三异丙基硅烷wsc·hcl：1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(一般合成法)以下示出在本实施例中使用的一般合成法。(1)脱-fmoc一般合成法将起始原料以成为0.05m的方式溶解在thf:dmf(9/1)的混合液中，加入哌啶(1.5当量)和dbu(1当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph为6左右并在减压下馏去溶剂。在残渣中加入乙腈:水＝9:1的混合液过滤析出的沉淀物，用乙腈:水＝9:1的混合液进行悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到脱fmoc体。(2)氨基酸缩合一般合成法将起始原料以成为0.05m的方式溶解在thf:dmf(9/1)的混合液中，加入fmoc-aax-oh(1.3当量)、dmt-mm(1.13当量)和dipea(1.2当量)在室温下搅拌30分钟。减压下馏去溶剂，向残渣中加入乙腈过滤析出的沉淀物，进行2次乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到氨基酸缩合物。以下示出在本发明的实施例中使用的作为本发明方法的特征的在胺俘获剂存在下的脱保护法。作为胺俘获剂的例子，示出使用丙胺的例子。(3)加入胺俘获剂的一锅(1pot)缩合脱保护法将起始原料以成为0.05m的方式溶解在thf:dmf(9/1)的混合液中，加入fmoc-aax-oh(1.3当量)、dmt-mm(1.13当量)和dipea(1.13当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(1当量)、哌啶(1.5当量)和dbu(8当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph为6左右并在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈:水＝1:1的混合液过滤析出的沉淀物，用乙腈:水＝9:1的混合液进行悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到氨基酸缩合物。(4)加入胺俘获剂，用氯化铵水溶液进行清洗的一锅缩合脱保护法将起始原料以成为0.05m的方式溶解在thf:dmf(9/1)的混合液中，加入fmoc-aax-oh(1.3当量)、dmt-mm(1.13当量)和dipea(1.13当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(1当量)、哌啶(1.5当量)和dbu(8当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和氯化铵水溶液:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈:水＝1:1的混合液过滤析出的沉淀物，用乙腈:水＝9:1的混合液进行悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到氨基酸缩合物。接下来，示出将本发明中使用的载体从肽中脱保护(切除)的方法。(5)kb保护基一般脱保护法将原料以成为0.01m的方式溶解在dcm中，加入该dcm的1/10量的tfe，进一步加入该dcm量的1/100量的tfa在室温下搅拌30分钟。过滤沉淀物，将滤液用dipea调整到ph＝9，减压下馏去溶剂。向残渣中加入水过滤析出的沉淀物，将得到的固体物质在thf和甲苯中溶解后，减压下馏去。将向得到的固体物质中加入二异丙基醚的悬浮洗涤进行3次，将得到的固体物质减压干燥，得到脱kb保护体。以下，示出使用本发明方法的肽合成。(实施例1)中间体(化合物2)的合成化合物1的合成将2,4-二(二十二烷氧基)苄醇(标记为“kb-oh”)(3.79g，5.00mmol)溶解于dcm(50ml)，加入fmoc-ala-oh(2.34g，7.50mmol，1.5当量)、dipci(1169μl，7.50mmol，1.5当量)和dmap(31mg，0.25mmol，0.05当量)在室温下搅拌30分钟。加入丙胺(411μl，5.00mmol，1.0当量)在室温下搅拌30分钟。过滤沉淀物，减压下馏去滤液。向残渣中加入meoh过滤析出的沉淀物，进行2次meoh悬浮洗涤，进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物1(5.02g，95.5％)。化合物2的合成将化合物1(5.00g，4.76mmol)溶解于thf(86ml)和dmf(10ml)的混合液，加入哌啶(707μl，7.14mmol，1.5当量)和dbu(712μl，4.76mmol，1当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右并在减压下馏去溶剂。在残渣中加入乙腈:水＝9:1的混合液过滤析出的沉淀物，用乙腈:水＝9:1的混合液进行悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物2(4.05g，98.3％)。(比较例1)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的2步合成化合物3的合成将在实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.2ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。减压下馏去溶剂，向残渣中加入乙腈过滤析出的沉淀物，进行2次乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物3(128.5mg，quant)。化合物4的合成将化合物3(119mg，0.093mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.2ml)的混合液，加入哌啶(14μl，0.14mmol，1.5当量)和dbu(28μl，0.28mmol，2当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右并在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈:水＝1:1的混合液过滤析出的沉淀物，用乙腈:水＝9:1的混合液进行悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物4(92.5mg，90.7％)。(实施例2)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(1)将在实施例1中得到的化合物2(173mg，0.2mmol)溶解于thf(4ml)和dmf(0.4ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(122mg，0.26mmol，1.3当量)、dmt-mm(65mg，0.226mmol，1.13当量)和dipea(42μl，0.24mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(19.7μl，0.24mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右并在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈:水＝1:1的混合液过滤析出的沉淀物，用乙腈:水＝9:1的混合液进行悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物4(92.5mg，90.7％)。(实施例3)h-lys(boc)lys(boc)ala-okb(化合物5)的加入胺俘获剂的合成将实施例2中得到的化合物4(109mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.2ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(9.9μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入哌啶(15μl，0.15mmol，1.5当量)和dbu(105μl，1.4mmol，7当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物5(115.2mg，87.2％)。(实施例4)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(2)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.2ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、hbtu(44mg，0.113mmol，1.13当量)、hobt(18mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(87μl，0.5mmol，5当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(9.9μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入哌啶(15μl，0.15mmol，1.5当量)和dbu(120μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(109.2mg，99.9％)。(实施例5)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(3)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.2ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、hatu(44mg，0.113mmol，1.13当量)、hoat(16mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(87μl，0.5mmol，5当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(9.9μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入哌啶(15μl，0.15mmol，1.5当量)和dbu(120μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(103.5mg，94.7％)。(实施例6)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(4)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.2ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、comu(50mg，0.113mmol，1.13当量)、oxyma(17mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(87μl，0.5mmol，5当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(9.9μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入哌啶(15μl，0.15mmol，1.5当量)和dbu(120μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(105.7mg，96.7％)。(实施例7)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(5)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(2.5μl，0.03mmol，0.3当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(105.3mg，96.3％)。(实施例8)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(6)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(4.9μl，0.06mmol，0.6当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(105.6mg，96.6％)。(实施例9)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(7)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(19.7μl，0.24mmol，2.4当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(105.6mg，96.6％)。(实施例10)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(8)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(37μl，0.45mmol，4.5当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(105.2mg，96.2％)。(实施例11)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(9)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的40％的甲胺水溶液(10.3μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(101.6mg，93.0％)。(实施例12)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(10)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的50％的羟基胺水溶液(7.1μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(104.1mg，95.2％)。(实施例13)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(11)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的己胺(15.9μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(104.6mg，95.7％)。(实施例14)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(12)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的癸胺(15.9μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(107.5mg，98.4％)。(比较例2)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入本发明以外的胺俘获剂的合成(13)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(61mg，0.13mmol，1.3当量)、dmt-mm(32mg，0.113mmol，1.13当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的2-氨基乙醇(7.2μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(103.6mg，94.8％)。(实施例15)h-lys(boc)ala-okb(化合物4)的加入胺俘获剂的合成(14)将实施例1中得到的化合物2(86mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.1ml)的混合液，加入fmoc-lys(boc)-oh(187mg，0.4mmol，4.0当量)、dmt-mm(100mg，0.36mmol，3.6当量)和dipea(21μl，0.12mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(99μl，1.2mmol，12当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(30.6mg，0.26mmol，1当量)、哌啶(30μl，0.3mmol，1.5当量)和dbu(239μl，1.6mmol，8当量)在室温下搅拌10分钟。以下，与实施例2同样地得到化合物4(104.2mg，95.3％)。(实施例16)h-ala-okb(化合物2)、h-lys(boc)ala-okb(化合物4)、h-lys(boc)lys(boc)ala-okb(化合物5)的利用hplc进行的纯度测定(1)样品制作(共用)量取上述各实施例和比较例中得到的化合物1mg，溶解在0.5ml的thf中，加入0.1mfmoc-osuthf溶液(20μl，0.02mmol，约2当量)和0.2mdipeathf溶液(10μl，0.02mmol，约2当量)在室温下搅拌1小时。风干后，用乙腈悬浮洗涤3次，进行减压干燥。在得到的固体物质中加入hplc用thf(不含稳定剂)1ml进行溶解，用0.2μm的膜过滤器进行过滤，将得到的滤液作为hplc用样品，供于hplc测定。(2)hplc测定按以下条件进行hplc测定。＜反相hplc＞柱:反相c4柱流动相a:thf:ch3cn＝8:2混合液流动相b:含0.1％tfa的水流速:0.2ml/分钟梯度:流动相a用30分钟从70％到100％检测波长:254nm＜正相hplc＞柱:正相硅胶柱流动相a:乙酸乙酯流动相b:正己烷流速:0.2ml/分钟梯度:流动相a用30分钟从0％到100％检测波长:280nm将结果示于以下的表1。[表1](实施例17)hcl·h-ile-gly-okb(化合物14)的合成化合物6的合成将2,4-二(二十二烷氧基)苄醇(标记为“kboh”)(1.51g，2.00mmol)溶解于dcm(50ml)，加入fmoc-gly-oh(892mg，3.0mmol，1.5当量)、dipci(467μl，3.0mmol，1.5当量)和dmap(12mg，0.1mmol，0.05当量)在室温下搅拌30分钟。过滤沉淀物，减压下馏去滤液。向残渣中加入meoh过滤析出的沉淀物，进行2次meoh悬浮洗涤，进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物6(2.01g，97.1％)。化合物7的合成按照脱-fmoc一般合成法对得到的化合物6(2.01g，0.1mmol)进行脱fmoc操作，得到化合物7(1.84g，quant)。化合物8的合成按照氨基酸一般缩合法将fmoc-ile-oh与得到的化合物7(1.84g，0.1mmol)缩合，得到化合物8(1.99g，88.9％)。化合物9的合成按照脱-fmoc一般合成法对得到的化合物8(662mg，0.58mmol)进行脱fmoc操作，得到化合物9(505mg，91％)。(比较例3)fmoc-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-okb(化合物10)的合成利用重复进行氨基酸一般缩合法和脱-fmoc一般合成法的方法对实施例17中得到的化合物9导入以下的氨基酸，得到化合物10。第3个残基:fmoc-arg(pbf)-oh第4个残基:fmoc-asp(otbu)-oh第5个残基:fmoc-met-oh第6个残基:fmoc-arg(pbf)-oh第7个残基:fmoc-gly-oh(比较例4)fmoc-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-oh(化合物11)的合成按照kb保护基一般脱保护法对比较例2中得到的化合物10进行脱kb操作，得到化合物11。利用lc-ms对得到的化合物进行测定，结果观测到1643.7[m+gly+h+]、1995.2[m+arg(pbf)+h+]、1758.1[m+asp(otbu)+h+]、1718.0[m+met+h+]。(实施例18)fmoc-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-okb(化合物10)的利用加入胺俘获剂的一锅缩合脱保护法进行的合成利用重复进行加入胺俘获剂的一锅缩合脱保护法的方法对实施例18中得到的化合物9导入以下的氨基酸，得到化合物10。以下氨基酸的导入按照氨基酸一般缩合法进行。第3个残基:fmoc-arg(pbf)-oh第4个残基:fmoc-asp(otbu)-oh第5个残基:fmoc-met-oh第6个残基:fmoc-arg(pbf)-oh第7个残基:fmoc-gly-oh(实施例19)fmoc-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-oh(化合物11)的合成按照kb保护基一般脱保护法对实施例18中得到的化合物10进行脱kb操作，得到化合物11。利用lc-ms对得到的化合物进行测定，结果未观测到1643.7[m+gly+h+]、1995.2[m+arg(pbf)+h+]、1758.1[m+asp(otbu)+h+]、1718.0[m+met+h+]。(实施例20)h-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(化合物14)的合成化合物12的合成将2,4-二(二十二烷氧基)苄醇(标记为“kb-oh”)(3.79g，5.00mmol)溶解于dcm(50ml)，加入fmoc-tyr(tbu)-oh(3.45g，7.50mmol，1.5当量)、dipci(1169μl，7.50mmol，1.5当量)和dmap(31mg，0.25mmol，0.05当量)在室温下搅拌30分钟。加入丙胺(811μl，10.0mmol，2.0当量)在室温下搅拌30分钟。过滤沉淀物，减压下馏去滤液。向残渣中加入meoh过滤析出的沉淀物，进行2次meoh悬浮洗涤，进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物12(6.06g，quant)。化合物13的合成将化合物12(6.06g，5.00mmol)溶解于thf(86ml)和dmf(10ml)的混合液，加入哌啶(743μl，7.5mmol，1.5当量)和dbu(748μl，5.00mmol，1当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝2:1的溶液进行清洗，分液后废弃水层，进一步用反应溶剂的两倍量的饱和食盐水进行清洗并在分液后废弃水层。对得到的有机层在减压下馏去溶剂。在残渣中加入乙腈:水＝9:1的混合液过滤析出的沉淀物，用乙腈:水＝9:1的混合液进行悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物13(4.70g，92.9％)。(实施例21)h-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(化合物14)的合成利用重复进行一锅缩合脱保护法的方法对化合物13导入以下的氨基酸，得到化合物14，上述一锅缩合脱保护法是加入胺俘获剂并用氯化铵水溶液进行清洗的。第1个残基:fmoc-arg(pbf)-oh第2个残基:fmoc-phe-oh第3个残基:fmoc-ser(tbu)-oh(实施例22)h-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(化合物15)的合成将得到的化合物14(7.58g，4.43mmol)以0.05m的方式溶解在thf中，加入dipea(1.93ml，11.1mmol，2.5当量)。将fmoc-asn(trt)-oh(3.44g，5.76mmol，1.3当量)、comu(2.28g，5.32mmol，1.3当量)、oxyma(0.76g，5.32mmol，1.3当量)溶解于dmf8.9ml，加入dipea(1.93ml，11.1mmol，2.5当量)在室温下搅拌2分钟。将得到的混合液加入到化合物14的thf溶液中在室温下搅拌10分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(728μl，8.86mmol，2当量)在室温下搅拌30分钟。加入哌啶(658μl，6.65mmol，1.5当量)和dbu(4.64ml，31.0mmol，7当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和氯化铵水溶液:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。在残渣中加入乙腈:水＝9:1的混合液过滤析出的沉淀物，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物15(8.74g，95.4％)。(实施例23)h-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(化合物16)的合成利用重复进行一锅缩合脱保护法的方法对得到的化合物15导入以下的氨基酸，得到化合物16，上述一锅缩合脱保护法是加入胺俘获剂并用氯化铵水溶液进行清洗的。第6个残基:fmoc-cys(trt)-oh第7个残基:fmoc-gly-oh第8个残基:fmoc-leu-oh第9个残基:fmoc-gly-oh(实施例24)h-gln(trt)-ser(ψme，mepro)-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(化合物17)的合成将实施例23中得到的化合物16(10.68g，4.06mmol)以成为0.05m的方式溶解在thf:dmf(9/1)的混合液中，加入fmoc-gln(trt)-ser(ψme，mepro)-oh(3.88g，5.28mmol，1.3当量)、dmt-mm(1.30g，4.59mmol，1.13当量)和dipea(845μl，4.87mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(665μl，8.12mmol，2当量)在室温下搅拌30分钟。加入哌啶(601μl，6.09mmol，1.5当量)和dbu(6.05ml，40.6mmol，10当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和氯化铵水溶液:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入水过滤析出的沉淀物，用正己烷进行悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物17(12.85g，100.0％)。利用tlc(正己烷:乙酸乙酯＝9:1)对得到的化合物17进行分析，结果未发现二苯并富烯的存在。(实施例25)h-d-arg-arg-pro-hyp-gly-thi-ser-d-tic-oic-arg-oh(化合物21)的合成化合物18的合成将3,4,5-三(十八烷氧基)苄醇(标记为“ka-oh”)(9.14g，10.00mmol)溶解于dcm(100ml)中，加入fmoc-arg(pbf)-oh(9.73g，15.00mmol，1.5当量)、dipci(2337μl，15.00mmol，1.5当量)和dmap(61mg，0.50mmol，0.05当量)在室温下搅拌30分钟。加入丙胺(1644μl，20.0mmol，2.0eqiv)在室温下搅拌30分钟。过滤沉淀物，减压下馏去滤液。向残渣中加入meoh过滤析出的沉淀物，进行meoh悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物18(15.40g，99.7％)。化合物19的合成将化合物18(15.40g，10.00mmol)溶解于thf(179ml)和dmf(20ml)的混合液中，加入哌啶(1480μl，14.9mmol，1.5当量)和dbu(1490μl，9.96mmol，1当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝2:1的溶液进行清洗，分液后废弃水层，进一步用反应溶剂的两倍量的饱和食盐水进行清洗并在分液后废弃水层。对得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈过滤析出的沉淀物，用乙腈进行悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物19(14.39g，quant)。化合物20(hcl·h-d-arg(pbf)-arg(pbf)-pro-hyp-gly-thi-ser(tbu)-d-tic-oic-arg(pbf)-oka)的合成通过对化合物19(13.52g，9.95mmol)重复使用以下方法而得到化合物20(24.31g，81.6％)。将起始原料以成为0.05m的方式溶解在thf:dmf(9/1)的混合液中，加入fmoc-aax-oh(将当量示于反应条件表的aa当量)、下表中示出的缩合剂(将当量示于反应条件表的缩合剂当量)、下表示出的缩合助剂(将当量示于反应条件表的缩合剂当量)和dipea(将当量示于反应条件表的碱当量)如反应条件表所示地进行缩合反应。接下来，加入作为胺俘获剂的丙胺(将当量示于反应条件表的俘获剂当量)在室温下搅拌30分钟。其后，加入hobt(将当量示于反应条件表的hobt当量)、哌啶(1.5当量)和dbu(将当量示于反应条件表的dbu当量)在室温下搅拌10分钟。接下来，加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。在反应液中加入反应溶剂的两倍量的清洗条件表中示出的第一次清洗液，进行清洗、分液，废弃水层。根据需要，加入反应溶剂的两倍量的清洗条件表中示出的第二次清洗液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入清洗条件表中示出的不良溶剂过滤析出的沉淀物，进一步加入清洗条件表中示出的悬浮洗涤溶剂进行悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到氨基酸缩合物。[表2][表3]清洗条件表化合物21的合成将化合物20(10.0g，3.1mmol)溶解于tfa:tis:水＝90:2.5:7.5的混合液155ml中，在室温下搅拌4小时。使用硅藻土过滤反应液，用30ml的tfa清洗过滤残渣，进行过滤，与得到的滤液合并，一边搅拌一边投入到1.85l的冷异丙醚中。过滤得到的固体物质，将过滤残渣进一步用冷异丙醚悬浮洗涤2次，进行过滤。干燥得到的固体物质，得到化合物21(5.17g，quant％，hplc纯度77.36％)。利用lc-ms对得到的化合物进行测定，结果观测到652.9[m+2h+]/2。(实施例26)h-ala-gln(trt)-ser(ψme，mepro)-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(化合物22)的合成利用一锅缩合脱保护法对实施例24中得到的化合物17导入fmoc-ala-oh，得到化合物22(12.42g，quant％)，上述一锅缩合脱保护法是加入胺俘获剂并用氯化铵水溶液进行清洗的。(实施例27)fmoc-ser(tbu)-leu-arg(pbf)-arg(pbf)-ser(tbu)-ser(tbu)-cys(trt)-phe-gly-oh(化合物26的合成)的合成化合物23(hcl·h-gly-okb)的合成对kb-oh(7.57g，10.0mmol)与实施例17同样地使用fmoc-gly-oh而得到化合物23(7.90g，93.1％)。化合物24(hcl·h-leu-arg(pbf)-arg(pbf)-ser(tbu)-ser(tbu)-cys(trt)-phe-gly-okb)的合成导入下述残基:第2个残基fmoc-phe-oh第3个残基fmoc-cys(trt)-oh第4个残基fmoc-ser(tbu)-oh第5个残基fmoc-ser(tbu)-oh第6个残基fmoc-arg(pbf)-oh第7个残基fmoc-arg(pbf)-oh第8个残基fmoc-leu-oh对化合物23(7.89g，9.25mmol)重复进行以下方法而逐次导入氨基酸，得到化合物24(20.27g，85.5％)。对起始原料使用加入胺俘获剂并用氯化铵水溶液进行清洗的一锅缩合脱保护法(其中，使用fmoc-氨基酸(1.3当量)、dmt-mm(1.13当量)，省去氯化铵水清洗的方法)，得到氨基酸缩合物。化合物25(fmoc-ser(tbu)-leu-arg(pbf)-arg(pbf)-ser(tbu)-ser(tbu)-cys(trt)-phe-gly-okb)的合成利用氨基酸缩合一般合成法对化合物24(20.26g，7.91mmol)导入fmoc-ser(tbu)-oh而得到化合物25(22.56g，quant)。化合物26(fmoc-ser(tbu)-leu-arg(pbf)-arg(pbf)-ser(tbu)-ser(tbu)-cys(trt)-phe-gly-oh)的合成通过对化合物25(22.56g，7.80mmol)使用kb保护基一般脱保护法而得到化合物26(22.56g，quant)。(实施例28)hcl·h-ser(tbu)-leu-arg(pbf)-arg(pbf)-ser(tbu)-ser(tbu)-cys(trt)-phe-gly-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-ala-gln(trt)-ser(ψme，mepro)-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb(化合物28)的合成化合物27(hcl·h-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-ala-gln(trt)-ser(ψme，mepro)-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb)的合成将实施例19中得到的化合物11(11.33g，5.8mmol，1.5当量)溶解于dmf(38.7ml)，加入thf(348ml)进行稀释，在实施例26得到的化合物22(12.42g，3.87mmol，1.0当量)中加入hatu(1.99g，5.22mmol，1.35当量)、hoat(711mg，5.22mmol，1.35当量)和dipea(3369μl，19.3mmol，5.0当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(318μl，3.87mmol，1当量)在室温下搅拌30分钟。此外，加入哌啶(575μl，5.80mmol，1.0当量)和dbu(5.79ml，38.7mmol，10当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和氯化铵水溶液:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。在残渣中加入乙腈:水＝9:1的混合液过滤析出的沉淀物，进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物27(15.29g，quant)。化合物28(hcl·h-ser(tbu)-leu-arg(pbf)-arg(pbf)-ser(tbu)-ser(tbu)-cys(trt)-phe-gly-gly-arg(pbf)-met-asp(otbu)-arg(pbf)-ile-gly-ala-gln(trt)-ser(ψme，mepro)-gly-leu-gly-cys(trt)-asn(trt)-ser(tbu)-phe-arg(pbf)-tyr(tbu)-okb)的合成对化合物27(17.63g，3.87mmol)使用实施例27中得到的化合物26(12.47g，5.80mmol，1.5当量)与化合物27的合成同样地进行反应，得到化合物28(26.83g，quant)。(实施例29)h-ser-leu-arg-arg-ser-ser-ser-phe-gly-gly-arg-met-asp-arg-ile-gly-gln-ser-gly-leu-gly-cys-asn-ser-phe-arg-tyr-oh(7cys-23cys，ss键)(化合物30)的合成化合物29的合成(h-ser-leu-arg-arg-ser-ser-ser-phe-gly-gly-arg-met-asp-arg-ile-gly-gln-ser-gly-leu-gly-cys-asn-ser-phe-arg-tyr-oh)的合成将化合物28(6.93g，1.0mmol)溶解于tfa:tis:水:edt＝80:5:10:5的混合液200ml中，在室温下搅拌4小时。使用硅藻土过滤反应液，用100ml的tfa清洗过滤残渣，进行过滤，与得到的滤液合并，一边搅拌一边投入到3.0l的冷异丙醚中。过滤得到的固体物质，将过滤残渣进一步用冷异丙醚悬浮洗涤2次，进行过滤。干燥得到的固体物质，得到化合物29(3.90g，quant，hplc纯度55.22％)。化合物30(h-ser-leu-arg-arg-ser-ser-ser-phe-gly-gly-arg-met-asp-arg-ile-gly-gln-ser-gly-leu-gly-cys-asn-ser-phe-arg-tyr-oh(7cys-23cys，ss键))的合成将化合物29(3.90g，1.0mmol)溶解于水3.77l中，用吡啶调节至ph7.1，搅拌一晚。对得到的反应液进行冷冻干燥，得到化合物30(3.47g，92.2％，hplc纯度65.07％)。利用lc-ms对得到的化合物进行测定，结果观测到1027.2[m+3h+]/3。(实施例30)h-glu(otbu)-ile-pro-glu(otbu)-glu(otbu)-tyr(tbu)-leu-okb(化合物33)的合成化合物31的合成对kb-oh(2.27g，3.00mmol)与实施例18同样地使用fmoc-leu-oh，得到化合物31(3.26g，99.6％)。化合物32的合成对化合物31(3.26g，2.98mmol)使用脱-fmoc一般合成法，得到化合物32(2.72g，quant)。化合物33(h-glu(otbu)-ile-pro-glu(otbu)-glu(otbu)-tyr(tbu)-leu-okb)的合成导入以下残基:第2个残基fmoc-tyr(tbu)-oh第3个残基fmoc-glu(otbu)-oh第4个残基fmoc-glu(otbu)-oh第5个残基fmoc-pro-oh第6个残基fmoc-ile-oh第7个残基fmoc-glu(otbu)-oh对化合物32(2.70g，2.98mmol)重复进行以下方法逐次导入氨基酸而得到化合物33(4.40g，77.7％)。将起始原料以成为0.05m的方式溶解在thf:dmf(9/1)的混合液中，加入fmoc-氨基酸(1.3当量)，dmt-mm(1.2当量)和dipea(1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(1当量)(仅导入第2个残基时)、哌啶(1.5当量)和dbu(7当量，仅导入第2个残基时为8当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈过滤析出的沉淀物，用乙腈进行悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到氨基酸缩合物。(实施例31)fmoc-gly-gly-asn(trt)-gly-asp(otbu)-phe-glu(otbu)-oh(化合物38)的合成化合物34的合成对kb-oh(3.41g，4.50mmol)与实施例18同样地使用fmoc-glu(otbu)-oh，得到化合物34(5.05g，96.3％)。化合物35的合成对化合物34(5.04g，4.33mmol)使用脱-fmoc一般合成法，得到化合物35(4.24g，quant)。化合物36(hcl·h-gly-asn(trt)-gly-asp(otbu)-phe-glu(otbu)-okb)的合成对化合物35(4.23g，4.33mmol)按照以下所示的反应条件表和清洗条件表，利用与化合物20的合成相同的方法得到化合物36(7.05g，90.8％)。[表4][表5]清洗条件表第1次清洗液第2次清洗液不良溶剂悬浮洗涤溶剂第2个残基饱和食盐水∶水＝1∶2混合液无乙腈乙腈第3个残基饱和食盐水∶水＝1∶2混合液无乙腈乙腈第4个残基饱和食盐水∶水＝1∶2混合液无乙腈乙腈第5个残基饱和食盐水∶水＝1∶2混合液无乙腈乙腈第6个残基饱和食盐水∶水＝1∶2混合液无乙腈乙腈化合物37的合成将化合物36(7.04g，3.90mmol)溶解于thf(65ml)和dmf(7.2ml)的混合液，加入fmoc-gly-oh(1.39g，4.68mmol，1.2当量)、dmt-mm(1.20g，4.32mmol，1.11当量)和dipea(753μl，4.32mmol，1.11当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(888μl，10.8mmol，2.77当量)在室温下搅拌30分钟。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈:水＝9:1的溶液进行冷却，过滤析出的沉淀物，进行乙腈悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤将得到的固体物质减压干燥，得到化合物37(7.16g，90.4％)。化合物38(fmoc-gly-gly-asn(trt)-gly-asp(otbu)-phe-glu(otbu)-oh)的合成对化合物37(2.20g，1.09mmol)使用kb保护基一般脱保护法而得到化合物38(1.21g，83.0％)。(实施例32)fmoc-d-phe-pro-arg(pbf)-pro-gly-gly-oh(化合物42的合成)的合成化合物39(hcl·h-gly-okb)的合成对kb-oh(3.41g，4.5mmol)与实施例17同样地使用fmoc-gly-oh，得到化合物39(3.58g，90.2％)。化合物40(hcl·h-pro-arg(pbf)-pro-gly-gly-okb)的合成导入下述残基:第2个残基fmoc-gly-oh第3个残基fmoc-pro-oh第4个残基fmoc-arg(pbf)-oh第5个残基fmoc-pro-oh对化合物39(3.33g，3.91mmol)反复进行以下方法逐次导入氨基酸而得到化合物40(5.11g，85.7％)。将起始原料以成为0.05m的方式溶解在thf:dmf(9/1)的混合液中，加入fmoc-氨基酸(1.3当量)、dmt-mm(1.2当量)和dipea(1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(2当量)在室温下搅拌30分钟。加入hobt(1当量)、哌啶(1.5当量)和dbu(7当量，仅导入第2个残基时为8当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈过滤析出的沉淀物，用乙腈进行悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到氨基酸缩合物。化合物41的合成将化合物40(5.10g，3.38mmol)溶解于thf(61ml)和dmf(6.7ml)的混合液，加入fmoc-d-phe-oh(1.70g，4.39mmol，1.3当量)、dmt-mm(1.12g，4.05mmol，1.2当量)和dipea(705μl，4.05mmol，1.2当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(555μl，6.75mmol，2当量)在室温下搅拌30分钟。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈:水＝9:1的溶液进行冷却，过滤析出的沉淀物，进行乙腈悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤将得到的固体物质减压干燥，得到化合物41(5.92g，95.2％)。化合物42(fmoc-d-phe-pro-arg(pbf)-pro-gly-gly-oh)的合成对化合物41(1.84g，1.0mmol)使用kb保护基一般脱保护法而得到化合物42(0.942g，85.3％)。(实施例33)h-d-phe-pro-arg(pbf)-pro-gly-gly-gly-gly-asn(trt)-gly-asp(otbu)-phe-glu(otbu)-glu(otbu)-ile-pro-glu(otbu)-glu(otbu)-tyr(tbu)-leu-okb(化合物44)的合成化合物43(hcl·h-gly-gly-asn(trt)-gly-asp(otbu)-phe-glu(otbu)-glu(otbu)-ile-pro-glu(otbu)-glu(otbu)-tyr(tbu)-leu-okb)的合成对实施例30中得到的化合物33(568mg，0.3mmol)使用实施例31中得到的化合物38(573mg，0.45mmol，1.5当量)与化合物27的合成同样地进行反应、进行液液清洗，在浓缩残渣中加入乙腈:水＝9:1的混合液对析出的沉淀物进行离心分离，用甲醇进行悬浮洗涤，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物43(725mg，82.6％)。化合物44(hcl·h-d-phe-pro-arg(pbf)-pro-gly-gly-gly-gly-asn(trt)-gly-asp(otbu)-phe-glu(otbu)-glu(otbu)-ile-pro-glu(otbu)-glu(otbu)-tyr(tbu)-leu-okb)的合成对化合物43(715mg，0.245mmol)使用实施例32中得到的化合物42(405mg，0.33mmol，1.5当量)进行与化合物32的合成同样的操作，得到化合物44(863mg，93.2％)。(实施例34)h-d-phe-pro-arg-pro-gly-gly-gly-gly-asn-gly-asp-phe-glu-glu-ile-pro-glu-glu-tyr-leu-oh(化合物45)的合成将化合物44(300mg，0.079mmol)溶解于tfa:tis:水＝95:2.5:2.5的混合液8ml中，在室温下搅拌3小时。使用硅藻土过滤反应液，用3ml的tfa清洗过滤残渣，进行过滤，与得到的滤液合并，一边搅拌一边投入到120ml的冷异丙醚中。对得到的固体物质进行离心分离，将过滤残渣进一步用冷异丙醚悬浮洗涤4次，进行离心分离。干燥得到的固体物质，得到化合物45(147.7mg，77.4％，hplc纯度74.49％)。(实施例35)h-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-okb(化合物50)的合成化合物46的合成对kb-oh(2.27g，3.0mmol)与实施例17同样地使用fmoc-arg(pbf)-oh(2.92g，4.5mmol，1.5当量)，得到化合物46(4.20g，quant)。化合物47的合成对化合物46(4.15g，2.99mmol)使用脱-fmoc一般合成法，得到化合物47(3.51g，97.6％)。化合物48的合成将化合物47(3.5g，2.91mmol)溶解于thf(52ml)和dmf(5.8ml)的混合液，加入fmoc-pro-oh(1.28g，3.78mmol，1.3当量)、dmt-mm(943mg，3.41mmol，1.17当量)和dipea(913μl，5.24mmol，1.8当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(479μl，5.82mmol，2当量)在室温下搅拌30分钟。将得到的反应液在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈过滤析出的沉淀物，进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物48(4.24g，98.0％)。化合物49的合成将化合物48(4.23g，2.85mmol)溶解于thf(51ml)和dmf(6ml)的混合液，加入hobt(388mg，2.85mmol，1.0当量)、哌啶(423μl，4.27mmol，1.5当量)和dbu(852μl，5.69mmol，2当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和氯化铵水溶液:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。并在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈过滤析出的沉淀物，进一步进行乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物49(3.75g，quant)。化合物50(h-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-okb)的合成对化合物49(3.69g，2.84mmol)按照以下示出的反应条件表和清洗条件表，利用与化合物20的合成相同的方法得到化合物50(6.02g，79.9％)。[表6][表7]清洗条件表第1次清洗液第2次清洗液不良溶剂悬浮洗涤溶剂第3个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液冷水冷乙腈第4个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液冷水冷乙腈第5个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液冷水冷乙腈第6个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第7个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第8个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第9个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈(实施例36)fmoc-lys(boc)-leu-gln(trt)-gln(trt)-arg(pbf)-lys(boc)-glu(otbu)-ser(tbu)-lys(boc)-oh(化合物55)的合成化合物51的合成对kb-oh(1.52g，2.0mmol)与实施例18同样地使用fmoc-lys(boc)-oh，得到化合物51(2.48g，quant)。化合物52的合成对化合物51(2.41g，1.99mmol)使用脱-fmoc一般合成法，得到化合物52(2.01g，98.9％)。化合物53(hcl·h-leu-gln(trt)-gln(trt)-arg(pbf)-lys(boc)-glu(otbu)-ser(tbu)-lys(boc)-okb)的合成对化合物52(2.01g，1.96mmol)按照以下示出的反应条件表和清洗条件表，利用与化合物20的合成相同的方法得到化合物53(4.38g，78.2％)。[表8][表9]清洗条件表第1次清洗液第2次清洗液不良溶剂悬浮洗涤溶剂第2个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第3个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第4个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第5个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第6个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第7个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈第8个残基饱和氯化铵水∶水＝1∶2混合液饱和食盐水∶水＝1∶2混合液乙腈乙腈化合物54的合成对化合物53(4.36g，1.53mmol)使用fmoc-lys(boc)-oh(934mg，1.99mmol，1.3当量)和dipea(481μl，2.76mmol，1.8当量)进行与化合物48同样的操作，得到化合物54(5.11g，quant)。化合物55(fmoc-lys(boc)-leu-gln(trt)-gln(trt)-arg(pbf)-lys(boc)-glu(otbu)-ser(tbu)-lys(boc)-oh)的合成对化合物54(2.55g，0.764mmol)使用kb保护基一般脱保护法而得到化合物55(2.26g，quant)。(实施例37)boc-gly-ser(tbu)-ser(正辛酰基)-phe-leu-ser(tbu)-pro-glu(otbu)-his(trt)-gln(trt)-oh(化合物61)的合成化合物56的合成对kb-oh(2.27g，3.0mmol)与实施例18同样地使用fmoc-gln(trt)-oh，得到化合物56(4.21g，quant)。化合物57的合成对化合物56(4.04g，2.99mmol)使用脱-fmoc一般合成法，得到化合物57(3.62g，quant)。化合物58(hcl·h-ser(tbu)-ser-phe-leu-ser(tbu)-pro-glu(otbu)-his(trt)-gln(trt)-okb)的合成对化合物57(3.48g，2.99mmol)按照以下示出的反应条件表和清洗条件表，利用与化合物20的合成同样的方法得到化合物58(4.60g，72.1％)。[表10][表11]清洗条件表化合物59的合成对化合物58(4.59g，1.87mmol)使用boc-gly-oh(425mg，2.43mmol，1.3当量)和dipea(1170μl，6.72mmol，3.6当量)，进行与化合物48同样的操作，得到化合物59(4.55g，94.5％)。化合物60的合成将化合物59(4.55g，1.76mmol)溶解于dcm(35ml)，加入辛酸(628mg，3.96mmol，2.25当量)、wsc·hcl(760mg，3.96mmol，2.2g当量)和dmap(11mg，0.088mmol，0.05当量)在室温下搅拌30分钟，在40℃下搅拌1小时。加入作为胺俘获剂的丙胺(1086μl，13.2mmol，7.5当量)在室温下搅拌30分钟。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和氯化铵水溶液:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水:水＝1:2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入乙腈，过滤析出的沉淀物，进行乙腈悬浮洗涤将得到的固体物质减压干燥，得到化合物60(4.48g，94.1％)。化合物61(boc-gly-ser(tbu)-ser(正辛酰基)-phe-leu-ser(tbu)-pro-glu(otbu)-his(trt)-gln(trt)-oh)的合成对化合物60(4.47g，1.65mmol)使用kb保护基一般脱保护法而得到化合物61(3.26g，quant)。(实施例38)boc-gly-ser(tbu)-ser(正辛酰基)-phe-leu-ser(tbu)-pro-glu(otbu)-his(trt)-gln(trt)-lys(boc)-leu-gln(trt)-gln(trt)-arg(pbf)-lys(boc)-glu(otbu)-ser(tbu)-lys(boc)-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-okb(化合物63)的合成化合物62(hcl·h-lys(boc)-leu-gln(trt)-gln(trt)-arg(pbf)-lys(boc)-glu(otbu)-ser(tbu)-lys(boc)-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-okb)的合成将实施例35中得到的化合物50(251mg，0.1mmol)溶解于thf(9ml)和dmf(1.0ml)的混合液，加入实施例36中得到的化合物61(443mg，0.15mmol，1.5当量)、dmt-mm(40.0mg，0.405mmol，1.45当量)和dipea(63μl，0.36mmol，3.6当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(25.0μl，0.3mmol，3当量)在室温下搅拌30分钟。加入哌啶(15μl，0.45mmol，1.5当量)和dbu(150μl，3.0mmol，10当量)在室温下搅拌10分钟。加入浓盐酸直到反应液的ph变为6左右。向反应液中加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水：水＝1∶2的溶液，进行清洗、分液，废弃水层。进一步加入反应溶剂的两倍量的饱和食盐水，进行清洗、分液，废弃水层。将得到的有机层在减压下馏去溶剂。向残渣中加入冷乙腈过滤析出的沉淀物，进一步进行冷乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物62(485mg，quant)。化合物63(boc-gly-ser(tbu)-ser(正辛酰基)-phe-leu-ser(tbu)-pro-glu(otbu)-his(trt)-gln(trt)-lys(boc)-leu-gln(trt)-gln(trt)-arg(pbf)-lys(boc)-glu(otbu)-ser(tbu)-lys(boc)-lys(boc)-pro-pro-ala-lys(boc)-leu-gln(trt)-pro-arg(pbf)-okb)的合成将化合物62(251mg，0.1mmol)溶解于thf(2ml)和dmf(0.2ml)的混合液，加入实施例37中得到的化合物61(295g，0.15mmol，1.5当量)、dmt-mm(40.0mg，0.405mmol，1.45当量)和dipea(62μl，0.36mmol，3.6当量)在室温下搅拌30分钟。加入作为胺俘获剂的丙胺(25.0μl，0.3mmol，3当量)在室温下搅拌30分钟。将反应液在减压下馏去溶剂。向残渣中加入冷乙腈过滤析出的沉淀物，进一步进行冷乙腈悬浮洗涤，将得到的固体物质减压干燥，得到化合物63(562mg，84.4％)。(实施例39)h-gly-ser-ser(正辛酰基)-ph-leu-ser-pro-glu-his-gln-lys-leu-gln-gln-arg-lys-glu-ser-lys-lys-pro-pro-ala-lys-leu-gln-pro-arg-oh(化合物64)的合成将实施例38中得到的化合物63(555mg，0.083mmol)溶解于tfa:tis:水:edt＝95:2.5:2.5的混合液8ml中，在室温下搅拌3小时。使用硅藻土过滤反应液，用3ml的tfa清洗过滤残渣，进行过滤，与得到的滤液合并，在室温下减压浓缩至变为4.5ml。对残渣一边搅拌一边投入到45ml的冷异丙醚中。对得到的固体物质进行离心分离，将过滤残渣进一步用冷异丙醚悬浮洗涤2次，进行离心分离。干燥得到的固体物质，得到化合物64(351mg，quant，hplc纯度68.92％)。利用lc-ms对得到的化合物进行测定，结果观测到1119.3[m+3h+]/3。上述的详细记载只是对本发明的目的和对象进行说明，并不限定所附的要求保护的范围。只要不脱离所附的要求保护的范围，根据本说明书中记载的教示，对记载的实施形态的各种变更和置换对于本领域技术人员而言是能够理解的。产业上的可利用性如果使用本发明的肽合成方法，则通过在n末端的脱保护前使用特定的俘获剂使氨基酸活性种非活性化，从而即便不将它们从反应体系中除去，也可以在脱保护时防止氨基酸的双重攻击。本发明的方法能够利用简便的方法来解决在脱保护反应时的反应体系中存在的氨基酸活性种的问题，通用性优异且有用。而且，对于由本发明合成的肽，氨基酸的脱落或双重攻击的问题少，因此根据本发明的方法，能够合成高收率、高品质的肽。当前第1页12