一种从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法与流程

文档序号:11899164阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)血浆冷沉淀的去除:以新鲜冷冻人血浆为原料,经融浆,混浆,连续离心等工序去除血浆中的冷沉淀,得到无冷沉淀的血浆离心上清液;

(2)凝胶批吸附:血浆温度控制在10-15℃,按照1.0-1.5g干凝胶/L血浆,向去冷沉淀血浆中加入平衡后的DEAE-sephadex A-50凝胶,搅拌吸附45min后关闭搅拌,静置沉降45min。凝胶吸附后的血浆使用带有压差控制器和固形物自动剥离系统的自冲洗型连续过滤器进行过滤,收集吸附后的A-50凝胶,血浆滤过液并入血浆罐;

(3)装柱洗脱:将吸附后的A-50凝胶装填在固定床层析柱内,装填好的层析柱使用蠕动泵泵入洗涤液进行在线冲洗,洗涤液流速为30-40cm/h,冲洗时间约60-90min。洗涤后的A-50凝胶使用蠕动泵泵入洗脱液进行在线洗脱,洗脱液流速为30-40cm/h,待在线紫外检测器中的紫外吸收值低于500Au后停止洗脱,收集洗脱液并使用0.45um滤芯过滤;

(4)S/D灭活并稀释:温和搅拌下将配置好的S/D灭活液缓慢加入过滤后的洗脱液中,添加完毕后搅拌30min。调整液温为24-26℃,灭活6h。灭活后采取添加稀释液稀释的方法将电导值降至800-1000us;

(5)固定床柱层析:将capto DEAE阴离子交换凝胶装填在固定床层析柱内,装填好的层析柱使用平衡液平衡2-5个柱体积,S/D灭活后的稀释液使用蠕动泵层析柱,上样流速为30-40cm/h。上样完成后使用蠕动泵泵入洗涤液进行在线冲洗,洗涤液流速为30-40cm/h,冲洗时间约60-90min。洗涤后的层析柱使用蠕动泵泵入洗脱液进行洗脱,洗脱液流速为30-40cm/h,待在线紫外检测器中的紫外吸收值低于500Au后停止洗脱,收集洗脱液并使用0.45um滤芯过滤;

(6)超滤透析:使用透析液进行超滤透析,使透析出液端口的电导值低于1000us后进行超滤浓缩,控制浓缩液效价>35IU/ml;

(7)配液:超滤浓缩液使用透析液进行稀释,调节活力为30-40IU/ml,pH7-7.5,使用0.45um滤芯过滤;

(8)分装;

(9)冻干。

2.根据权利要求1所述的从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法,其特征在于所述的步骤(2)中的凝胶吸附后的血浆使用自冲洗型过滤器进行过滤,所述自冲洗型过滤器为带有压差控制器和固形物自动剥离系统的的自冲洗型连续过滤器。

3.根据权利要求1所述的从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法,其特征在于所述的步骤(3)中的洗涤液由20-30mmol/L的柠檬酸钠,0.1-0.5mol/L的氯化钠,200-500IU/ml的肝素钠组成,pH为6.8-7.0。所述洗脱液由20-30mmol/L的柠檬酸钠,0.5-1.0mol/L的氯化钠,200-500IU/ml的肝素钠组成,pH为6.8-7.0。

4.根据权利要求1所述的从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法,其特征在于所述的步骤(3)中的洗脱方式为将吸附后的A-50凝胶装填在固定床层析柱内,装填好的层析柱使用蠕动泵泵入洗脱液进行在线洗涤和洗脱。

5.根据权利要求1所述的从血浆中制备人凝血酶原复合物的方法,其特征在于所述的步骤(4)中的灭活后将电导值降至800-1000us的方式为按1:2的比例添加稀释液稀释。

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