用酵母制备三聚体埃博拉病毒糖蛋白突变体的方法与流程

文档序号:12697246阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种制备埃博拉病毒糖蛋白突变体的方法,包括如下步骤:

(1)将编码埃博拉病毒糖蛋白突变体的基因导入受体酵母细胞中,得到表达所述基因的重组酵母细胞;

(2)对所述重组酵母细胞依次进行培养、破碎,从破碎产物中获得所述博拉病毒糖蛋白突变体;

所述博拉病毒糖蛋白突变体为缺失了黏蛋白样区域和C-端穿膜区的博拉病毒糖蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述酵母为毕赤酵母、酿酒酵母、汉逊酵母或乳酸克鲁维酵母;和/或

所述博拉病毒为苏丹型埃博拉病毒、扎伊尔型埃博拉病毒、科特迪瓦型埃博拉病毒、本迪布焦埃博拉病毒或雷斯顿型埃博拉病毒。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:

步骤(2)中,进行所述培养的过程中,包括向培养体系中加入体积百分比为0.5%的甲醇的步骤;

和/或

步骤(2)中,进行所述破碎的方法为物理方法、生物方法或化学方法;

所述物理方法具体为高压匀浆法、玻璃珠震荡法或球磨法;

所述生物方法具体为酶消化裂解法;

所述化学方法具体为碱裂解法;

和/或

步骤(2)中,进行所述破碎后还包括加入去污剂,获得含有所述埃博拉病毒糖蛋白突变体的粗提液的步骤;

所述去污剂为离液剂、非离子型去污剂、弱离子型去污剂或两性离子去污剂;

所述离液剂具体为尿素或硫脲;

所述非离子型去污剂具体为曲拉通、吐温或乙基苯基聚乙二醇;

所述弱离子型去污剂具体为脱氧胆酸盐;

所述两性离子去污剂具体为3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐或3-1-烷磺酸;

和/或

步骤(2)中,还包括对所述粗提液进行纯化的步骤;

所述纯化为对所述粗提液依次进行亲和层析、凝胶排阻层析和离子交换层析;

所述亲和层析介质具体为Chelating Fast Flow或Ni-NTA;

所述凝胶排阻层析介质具体为Sephadex G25、Superdex 200或Superose6凝胶预装柱;

所述离子交换层析具体为阳离子交换层析或阴离子交换层析;

所述阳离子交换层析介质具体为SOURCE 30S、Sepharose Fast Flow SP或CM Fast Flow;

所述阴离子交换层析介质具体为SOURCE 30Q Fast Flow。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,编码所述埃博拉病毒糖蛋白突变体的基因为如下(b1)-(b6)中任一所示DNA分子:

(b1)序列表中序列2的第29-1468位所示DNA分子;

(b2)序列表中序列2的第1-1468位所示DNA分子;

(b3)序列表中序列2的第29-1507位所示DNA分子;

(b4)序列表中序列2的第1-1507位所示DNA分子;

(b5)在严格条件下与(b1)-(b4)任一限定的DNA分子杂交且编码所述埃博拉病毒糖蛋白突变体的DNA分子;

(b6)与(b1)-(b5)任一限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码所述埃博拉病毒糖蛋白突变体的DNA分子。

5.利用权利要求1-4中任一所述方法制备得到的埃博拉病毒糖蛋白突变体。

6.如下(A)或(B)所述的应用:

(A)权利要求7中所述的“编码所述埃博拉病毒糖蛋白突变体的基因”和酵母在制备权利要求5所述埃博拉病毒糖蛋白突变体中的应用;

(B)权利要求5所述埃博拉病毒糖蛋白突变体在制备埃博拉出血热预防用疫苗中的应用。

7.一种埃博拉出血热预防用疫苗,其活性成分为权利要求5所述埃博拉病毒糖蛋白突变体。

8.下述任一生物材料:

A)蛋白质,其氨基酸序列为如下(a1)-(a5)中任一:

(a1)序列表中序列3的第33-480位;

(a2)序列表中序列3的第33-493位;

(a3)序列表中序列3的第1-480位;

(a4)序列表中序列3的第1-493位;

(a5)将(a1)-(a4)任一限定的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的序列;

B)编码A)中所述蛋白质的基因;

C)含有B)中所述基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

9.根据权利要求8所述的生物材料,其特征在于:所述基因为如下(b1)-(b6)中任一所示DNA分子:

(b1)序列表中序列2的第29-1468位所示DNA分子;

(b2)序列表中序列2的第1-1468位所示DNA分子;

(b3)序列表中序列2的第29-1507位所示DNA分子;

(b4)序列表中序列2的第1-1507位所示DNA分子;

(b5)在严格条件下与(b1)-(b4)任一限定的DNA分子杂交且编码所述埃博拉病毒糖蛋白突变体的DNA分子;

(b6)与(b1)-(b5)任一限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码所述埃博拉病毒糖蛋白突变体的DNA分子。

10.权利要求8或9所述生物材料在制备埃博拉出血热预防用疫苗中的应用。

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