一种从富SOD植物(黑小麦、米油糠粉)中生物发酵后提取SOD精酶的方法与流程

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法。

背景技术：

sod是superoxidedismutase缩写，中文名称超氧化物歧化酶，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。sod具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。sod在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中sod的地位更引起了人们的重视。

然而现有技术中sod酶广泛的存在于动植物界，都不耐高温(40℃以上)，且易被人体胃肠的酸碱破坏，再则sod含量也低，而且人的用量不可控制，无法量化。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法，包括以下步骤：

1)选择富含sod酶的原料，按比例混合，并在10-40℃发酵3天；

2)加水后，使用湿法研磨或干法粉碎；

3)收集湿法研磨的浆液过滤或干法粉碎的微粒，滤液用分子筛过滤后，得到sod粗酶液；

4)加热后放置一段时间后，再用分子筛过滤，滤液用低温喷雾冷冻干燥法处理；

5)收集干燥粉即得sod精制酶。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述步骤1)中的原料包括油松针、黑小麦麸皮、稻花香米糠、黑大蒜、沙棘、刺梨。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述油松针、黑小麦麸皮、稻花香米油糠粉、黑大蒜、沙棘、刺梨的比例分别为以重量计30％、30％、30％、5％、2％、3％。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述发酵的菌株为蜡质芽孢杆菌(bacilluscereus)mep-01(cgmcco188-01)、短芽孢杆菌(bacillusbrevis)mep-02(cgmcco188-02)、坚强芽孢杆菌(bacillusfirmus)mep-03(cgmcco188-03)、枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)mep-04(cgmcco188-04)、球形芽孢杆菌(bacillussphaericus)mep-05(cgmcco188-05)、地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)mep-06(cgmcco188-06)六种芽孢杆菌(记载于专利cn1091590a)，vib蜡质芽孢杆菌(bacilluscereus)(cgmcc0137)，该菌株记载于专利cn1035319。

所述发酵方法为使用以上7种菌株的任意一种单独发酵10-40℃发酵3天；或使用如下组合10-40℃发酵3天：

1、蜡质芽孢杆菌yib和蜡质芽孢杆菌mep-01的混合菌剂

2、蜡质芽孢杆菌yib和短芽孢杆菌mep-02的混合菌剂

3、蜡质芽孢杆菌yib和坚强芽孢杆菌mep-03的混合菌剂

4、蜡质芽孢杆菌yib和枯草芽孢杆菌mep-04的混合菌剂

5、蜡质芽孢杆菌yib和球形芽孢杆菌mep-05的混合菌剂

6、蜡质芽孢杆菌yib和地衣芽孢杆菌mep-06的混合菌剂

7、蜡质芽孢杆菌mep-01和短芽孢杆菌mep-02的混合菌剂

8、坚强芽孢杆菌mep-03和枯草芽孢杆菌mep-04的混合菌剂

生产上述混合菌剂按下列含菌比将两种菌种配成混合菌液：其配比(菌株数)分别为：

蜡质芽孢杆菌yib与蜡质芽孢杆菌mep-01为1∶0.5-2

蜡质芽孢杆菌yib与短芽孢杆菌mep-02为1∶0.5-1.5

蜡质芽孢杆菌yib与坚强芽孢杆菌mep-03为1∶0.5-1.5

蜡质芽孢杆菌yib与枯草芽孢杆菌mep-04为1∶0.5-2

蜡质芽孢杆菌yib与球形芽孢杆菌mep-05为1∶0.5-2

蜡质芽孢杆菌yib与地衣芽孢杆菌mep-06为1∶0.5-1.5

蜡质芽孢杆菌mep-01与短芽孢杆菌mep-02为1∶0.5-1.5

坚强芽孢杆菌mep-03与枯草芽孢杆菌mep-04为1∶0.5-2

将上述混合菌液分别接种到种子罐和发酵罐的培养料中发酵，发酵过程参考cn1091590a，10℃～40℃发酵时间3天。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述步骤2)中的加水的比例与所述原料的总重量为1:3。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述步骤2)中湿法研磨为石磨湿法研磨。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述步骤2)中浆液过滤的方法为使用100目滤网、500目滤网、800目滤网先后过滤。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述分子筛的孔径大小为25-75微米。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述步骤4)中加热温度为10℃～40℃。

优选地，本发明所述的从富sod植物(黑小麦、米油糠粉等植物)中生物发酵后提取sod精酶的方法中，所述步骤4)中加热温度的时间为72小时。

本发明还提供了上述从富sod植物(黑小麦、米油糠粉、黑大蒜、沙棘、刺梨、油松针)中生物发酵后提取sod精酶方法制备的sod精制酶。

由上可见，本发明的优点至少在于：

1.原先的耐高温，酶活性因植入芽孢杆菌，区别于原sod酶。

2.全程用物理法处理，未用化学添加剂，突出特色是低温石磨研磨，分子筛筛选sod，把6个原料的sod热变转化成，新sod可耐高温的活性酶。

3.是使用和保持sod活性酶，不被破坏的添加；是把得到的活性酶单独存放，在使用时添加，使得sod酶活性最大化，人吸收最大化。

具体实施方式

在本发明的一个实施例中，提供了一种提取新sod活性酶的方法，包括以下步骤：

1)选择富含sod酶的原料，按比例混合；

2)加水后，使用湿法研磨或干法粉碎；

3)收集湿法研磨的浆液过滤或干法粉碎的微粒，滤液用分子筛过滤后，得到sod粗酶液；

4)加热后放置一段时间后，再用分子筛过滤，滤液用低温喷雾冷冻干燥法处理；

5)收集干燥粉即得sod精制酶。

优选地，在本发明的一个实施例中，所述步骤1)中的原料包括油松针、黑小麦麸皮和稻花香米糠。

优选地，在本发明的一个实施例中，所述油松针、黑小麦麸皮和稻花香米油糠粉、黑大蒜、沙棘、刺梨的比例为分别以重量计30％、30％、30％、5％、2％、3％。

优选地，在本发明的一个实施例中，所述步骤2)中的加水的比例与所述原料的总重量为1:3。

优选地，在本发明的一个实施例中，所述步骤2)中湿法研磨为石磨湿法研磨。

优选地，在本发明的一个实施例中，所述步骤2)中浆液过滤的方法为使用100目滤网、500目滤网、800目滤网先后过滤。

优选地，在本发明的一个实施例中，所述分子筛的孔径大小为25-75微米。

优选地，在本发明的一个实施例中，所述步骤4)中加热温度为10℃～40℃。

优选地，在本发明的一个实施例中，所述步骤4)中加热温度的时间为72小时。

优选地，在本发明的再一个实施例中，还提供了上述新sod活性酶方法制备的sod精制酶。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

1、选油松针(pinustabuliformiscarrire)30公斤切寸段

按上述比例的混合均匀，共计100公斤。

2、加入300公斤的水，使用石磨湿法研磨；

3、收集到的桨液先过100目滤网，500目滤网，800目滤网，收集滤液。

4、用分子筛(美国ge(瑞典amersham)17-0612-10sephacryls-100hr,150ml(凝胶过滤填料sephacryl)，条件ph7.8,50mmol/lpbs进行洗脱控制流速为42ml/h)进行sod分子筛选后，得到sod粗酶。

5、加温10℃～40℃，放置72小时，再过上述sod分子筛与条件，得新sod滤液。

6、低温(-18至-198℃)喷雾冷冻干燥，收集干燥粉即为新产品sod精酶，命名老兵益微sod精酶，共计500克～1000克，收率为约1％。

对sod精酶进行检测，发现与原sod酶区别为

1)最适温度没有变化，但可耐100℃高温5分钟以上(原sod酶在60℃失活)；

2)单位酶活(500000u/克以上)

实施例2(干法)

1、选油松针(pinustabuliformiscarrire)30公斤切寸段

按上述比例的混合均匀，共计100公斤。

2、进行40-58度烘干，再用低温气流超微粉碎法粉碎(1500目)；

3、收集到的原料微粉。加水65％后在10-40度发酵3天，加水300公斤得液过滤

4、用分子筛进行sod分子筛(美国ge(瑞典amersham)17-0612-10sephacryls-100hr,150ml(凝胶过滤填料sephacryl)，条件ph7.8,50mmol/lpbs进行洗脱控制流速为42ml/h)筛选后，得到sod粗酶。

5、加温10℃～40℃，放置72小时，再过实施例1所述sod分子筛与条件，得新sod滤液。

6、低温(-18至-198度)喷雾冷冻干燥，收集干燥粉即为新产品sod精酶，命名老兵益微sod精酶，共计1000-2000克，收率为约2％。

实施例3(醇提法)

1、选油松针(pinustabuliformiscarrire)30公斤切寸段

按上述比例的混合均匀，共计100公斤。

2、进行40-58度烘干，再用低温气流超微粉碎法粉碎(500目)；

3、收集到的原料微粉。加52度食用白酒300公斤10-40度浸泡3天，搅拌过滤，得上清液，用高速离心机分离。

4、用分子筛进行sod分子筛(美国ge(瑞典amersham)17-0612-10sephacryls-100hr,150ml(凝胶过滤填料sephacryl)，条件ph7.8,50mmol/lpbs进行洗脱控制流速为42ml/h)筛选后，得到sod粗酶。

5、加温10℃～40℃，放置72小时，再过上述sod分子筛与条件，得新sod滤液。

6、低温(-18至-198度)喷雾冷冻干燥，收集干燥粉即为新产品sod精酶，命名老兵益微sod精酶，共计1000-2000克，收率为约2％。

对sod精酶进行检测，发现与原sod酶区别为

1)最适温度没有变化，但可耐100℃高温5分钟以上(原sod酶在60℃失活)；

2)单位酶活(500000u/克以上)

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。