本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗肿瘤的多肽。
背景技术：
p53蛋白是一种转录因子。在细胞处于应激状态时，可被诱导表达，从而促进细胞进入细胞周期的停滞阶段，继而凋亡或者衰老。现在的研究认为，p53蛋白具有强有力肿瘤抑制功能。p53蛋白被p53基因编码。p53基因是一种抑癌基因，p53基因是细胞生长周期中的负调节因子，与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化、细胞凋亡等重要的生物学功能有关。p53基因分为野生型和突变型两种，其产物也有野生型和突变型。野生型p53蛋白极不稳定，半衰期仅数分钟，并具有反式激活功能和广谱的肿瘤抑制作用。p53基因的突变(缺失)是人类肿瘤的常见事件，与肿瘤的发生、发展有关。一般认为p53突变与肿瘤的转移、复发及不良预后相关。在此基础上，进一步的研究认为p53蛋白是介导细胞凋亡的一个重要因子，通过介导细胞凋亡来发挥抑癌作用的。p53蛋白也可以诱导细胞老化，这已经成为它发挥抑癌作用的一大主要机制。
从p53蛋白作用的分子机制研究中发现，p53蛋白具有上百个的靶基因。p53蛋白通过与这些基因内部或上游的p53反应元件相结合的方式反式激活这些基因的转录。这些靶基因中有很多都与细胞凋亡或细胞周期调控过程有关，比如编码细胞周期依赖性蛋白激酶抑制蛋白的p21基因和凋亡前体蛋白BAX的编码基因等，促进细胞死亡或生长停滞。最近，人们又发现microRNA也是受到p53调控的底物之一，其中最重要的就是miR-34家族成员。与此同时，研究还发现p53蛋白也能起到抑制转录的作用。p53蛋白不仅对转录因子起作用，还对非转录因子起作用；不仅有胞内的作用，也有胞质中的作用。这些非转录因子作用中最值得一提的就是p53蛋白能够与胞质中的Bcl2家族蛋白发生相互作用，从而介导凋亡途径，使得线粒体外膜通透性增高，释放出细胞色素C，使细胞发生凋亡。由此可见，p53蛋白可以通过多种不同的作用方式来达到抑制基因转录的目的。由于p53蛋白在人体肿瘤当中所具有的重要作用，它成为了癌症治疗的新靶点。
技术实现要素：
：
本发明目的是针对现有肿瘤患者治疗的药物特点，设计一种p53蛋白激动多肽，能有效治疗肿瘤。
技术方案
一种p53蛋白激动多肽，其序列为SEQ ID NO1。所述多肽的治疗肿瘤的应用。其用途可通过多种给药方式治疗肿瘤，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注等实现。所述P53蛋白激动多肽用于促进p53蛋白活性。
有益结果：
本发明中的p53蛋白激动多肽序列SEQ ID NO1，可以靶向促进p53蛋白活性，促进p53蛋白产生的效应，从而抑制肿瘤的生长，达到治疗肿瘤的效果。试验结果表明：本发明能够抑制体外的多种肿瘤细胞活性，以及肿瘤模型裸鼠的肿瘤的生长。同时，本发明能够抑制微管蛋白聚合，促进肿瘤细胞中p53蛋白表达。达到治疗肿瘤的效果。
具体实施方式
p53蛋白激动多肽由上海生工吉尔合成。
实施例1
p53蛋白激动多肽的体外细胞增殖活性测定
采用MTT比色法。将对数生长的U937细胞，以1.0×105加入96孔培养板中，培养24h，实验孔、阳性药物对照孔分别加入不同浓度的实验药物p53蛋白激动多肽；空白组加入相同体积的溶剂。每孔设五个复孔，培养48h，每孔加入MTT，作用4h后，加入DMSO，孵育30min，在酶标仪570nm处测定吸光度A值，按公式细胞生长增殖抑制率＝(实验组吸光值/对照组吸光值-1)×100％。计算出实验药物的IC50为54.20nmol/L。
实施例2
P53蛋白激动多肽对肝瘤细胞HePG2细胞中P53蛋白表达的影响：将HEPG2细胞用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基，在37℃、5％CO2的培养箱中培养至90％以上的汇合度时，用0.25％胰蛋白酶消化细胞，计数，3000rpm离心5min收集细胞；加入10％小牛血清的RPMI 1640培养液(5ml)悬浮细胞，细胞计数，调整细胞浓度为5*106个/ml，于6孔培养板中培养。实验设空白对照组、P53蛋白激动多肽各剂量(5、10、20mg/ml)组。各组分别加入HEPG2细胞悬液600μl/孔后，空白对照组加入1640培养液600μl，P53蛋白激动多肽各剂量组在加入不同浓度的多肽。按20μl/1×105个细胞加入蛋白质提取液，吹吸打散细胞，4℃放置30min使细胞裂解，用于检测细胞裂解液中P53蛋白表达量。
结果显示，P53蛋白激动多肽处理的HEPG2细胞中P53蛋白表达明显升高。HEPG2细胞细胞裂解液中中P53蛋白表达(29.71±16.87pg/(mg总蛋白)(p<0.05)，175.29±25.41pg/(mg总蛋白)(p<0.05)，45.62±20.32pg/(mg总蛋白)(p<0.05))，与HEPG2细胞对照组相比有显著性差异。由此可见，P53蛋白激动多肽能促进HEPG2细胞中P53蛋白表达。
实施例3
用肿瘤模型检测P53蛋白激动多肽的体内效应。
建立乳腺癌瘤肿瘤模型，将处于对数生长期的OVCAR-3T细胞用胰蛋白酶于37℃消化后，收集培养液，生理盐水清洗2～3次。用生理盐水将细胞浓度调整为2×107个/mL，接种于C57BL/6裸鼠右前肢腋部皮下，每只0.1mL。1w～2w后裸鼠肿瘤体积长到100～200mm3，剖取其瘤组织在无菌条件下碾磨，制备成1×107个/mL细胞悬液，接种于C57BL/6裸鼠右前肢腋部皮下，每只0.1mL。1w～2w后裸鼠肿瘤体积长到70～100mm3后，裸鼠随机分成4组，每组10只。(1)空白组；(2)P53蛋白激动多肽低剂量组；(3)P53蛋白激动多肽中剂量组；(4)P53蛋白激动多肽高剂量组。建立卵巢癌肿瘤模型，方案为：空白组加入相同体积的溶剂，实验组P53蛋白激动多肽(上海生工吉尔合成)设3个剂量：20、40、80mg/Kg，在肿瘤周围多点注射。连续给药21天后，观察裸鼠存活数量，计算存活率。结果显示，P53蛋白激动多肽可有效地保护小白鼠，提高荷瘤裸鼠的生存率，生存率达到69.3％。建立乳腺癌瘤肿瘤模型，阳性对照药物紫杉醇；空白组加入相同体积的溶剂，实验组多肽(上海生工合成)设3个剂量：2、4、8mg/Kg。21天后，观察裸鼠存活数量，计算存活率。结果显示，P53蛋白激动多肽可有效地保护裸鼠，提高荷瘤裸鼠的生存率，80mg/Kg时的生存率达到49.3％。
实施例4
p53蛋白激动多肽对体外微管蛋白聚合与解聚的作用。
取新鲜牛脑组织，剥去脑膜和大的血管，剪碎，用冷MES缓冲液洗涤1-2次，以每克脑组织0.5-1ml的比例加入MES缓冲液，在4℃下，用电动匀浆器匀浆；4℃，105000g离心1h，取上清，加入等体积的微管聚合缓冲液，37℃水浴保温30min。26℃，105000g离心1h，取沉淀，加入约1/10匀浆体积的冷MES缓冲液，轻轻搅拌或用匀浆器将沉淀碾碎；将悬液放冰浴30min，使沉淀完全溶解。用Lowry’s法测定蛋白含量(SDS聚酰胺凝胶电泳法)。微管蛋白用MES缓冲液稀释至4-5mg/ml，置液氮中保存。取冷冻的微管蛋白溶液，快速用常温水冲其壁，使之融化，放入冰浴，用MES缓冲液稀释至所需浓度(2-3mg/ml)，加入ATP至1mmol/l。以从冰浴中马上取出的微管蛋白溶液在分光光度计350nm处调定为“0”点。然后将比色杯在37℃温度下测定微管蛋白溶液的OD值，连续20-30min，记录温度-吸光值曲线(T-OD曲线)，重复三次。抑制率计算：抑制率(％)＝(对照管OD值－加药管OD值)/对照管OD值。
实验组设3个剂量：0.75μM、3μM、24μM，阳性对照组长春新碱剂量3μM，空白组加入等体积的溶剂DMSO；按上述操作测定吸光值。结果，随p53蛋白激动多肽浓度增加，聚合抑制率逐渐下降，说明有聚合能力的微管蛋白随药物浓度的增加而不断减少。
SEQUENCE LISTING
<110> 罗瑞雪
<120> p53蛋白激动多肽及其应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 49
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Cys Pro Val Gln Leu Trp Val Asp Ser Thr Pro Pro Pro Gly Thr Arg
1 5 10 15
Val Arg Ala Met Ala Ile Tyr Lys Gln Ser Gln His Met Thr Glu Val
20 25 30
Val Arg Arg Cys Pro His His Glu Arg Cys Ser Asp Ser Asp Gly Leu
35 40 45
Ala