一种同时检测鲇形目鱼类四种致病菌的多重PCR引物组及检测方法与流程

技术特征：

1.一种同时检测鲇形目鱼类四种致病菌的多重PCR引物组，其特征在于，所述多重PCR引物组包括鲇爱德华氏菌引物对、柱状黄杆菌引物对、嗜水气单孢菌引物对和点状气单胞菌引物对，

所述鲇爱德华氏菌引物对的核酸序列为：

EI-F1：5’-CGGCAGGTCATATCAAAGAG-3’，或者该序列的核酸互补序列；

EI-R1：5’-CGATAATGTGGTAATGCGGT-3’，或者该序列的核酸互补序列；

所述柱状黄杆菌引物对的核酸序列为：

FC-F2：5’-ATCCAGAACGTGTGATAGGT-3’，或者该序列的核酸互补序列；

FC-R2：5’-AAGTTCCAGCTACGATACCA-3’，或者该序列的核酸互补序列；

所述嗜水气单孢菌引物对的核酸序列为：

AH-F3：5’-AGTTTGTCGCCAATATCCGC-3’，或者该序列的核酸互补序列；

AH-R3：5’-CTCGTACGCTCATGAGGACT-3’，或者该序列的核酸互补序列；

所述点状气单胞菌引物对的核酸序列为：

AP-F4：5’-CAGCTACCCCTCGACTATGG-3’，或者该序列的核酸互补序列；

AP-R4：5’-TGCGGATCTTGTGACTGACT-3’，或者该序列的核酸互补序列。

2.一种同时检测鲇形目鱼类四种致病菌的PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)、制备DNA模板：利用DNA试剂盒抽提基因组DNA作为模板；

2)、多重PCR扩增：利用多重PCR引物组对步骤1)中的DNA模板进行多重PCR扩增；

3)、检测：对步骤2)中得到的扩增产物作为样品进行凝胶电泳检测，利用TAE缓冲液配置1.2％的琼脂糖凝胶，点样后，电压设置为100～140伏，电泳20～40分钟；

若有1170bp的条带说明样品中有鲇爱德华氏菌，若有895bp的条带说明样品中柱状黄杆菌，若有554bp的条带说明样品中有嗜水气单孢菌，若有418bp的条带说明样品中有点状气单胞菌。

3.根据权利要求2所述的一种同时检测鲇形目鱼类四种致病菌的PCR检测方法，其特征在于，所述步骤2)中的多重PCR扩增的反应体系为：

所述的2×mix包含Phusion DNA Polymerase、2×Phusion PCR Buffer、3mM MgC1₂和400uM dNTP。

4.根据权利要求2所述的一种同时检测鲇形目鱼类四种致病菌的PCR检测方法，其特征在于，所述步骤2)中的多重PCR扩增的扩增条件为：98℃预变性3～5min，98℃变性30～45s，57～60℃退火25～35s，72℃延伸50～60s，进行28-32个循环后，然后再72℃温度延伸7～10min，完成PCR扩增，扩增产物4℃保存。