【技术领域】
本发明属于农业畜牧业技术领域。更具体地，本发明涉及一种青贮用包埋菌剂，还涉及所述青贮用包埋菌剂的生产方法。
背景技术：
我国秸秆资源十分丰富。每年秸秆产量达6千万吨左右，占世界秸秆总产量的20％～30％。目前，我国约70％各类农作物秸秆作为生活能源燃料消耗掉，不仅浪费资源，而且还给环境带来负面影响，所以采用科学的方法对玉米秸秆等秸秆进行高效处理，既可以减少浪费，保护环境，又可以解决能源不足的问题。因此，有关玉米秸秆处理成本低、操作简单并能广泛推广应用的饲料青贮技术受到人们的重视。青贮饲料技术的研究与利用有着上百年的历史，经过青贮的玉米秸秆质地蓬松、具有酸香的口感且秸秆的纤维素含量下降，营养成分大幅上升，是家畜喜食的饲料。现有青贮技术关键在于优良青贮微生物选育、秸秆青贮前处理、复合菌种复配以及发酵工艺条件优化，国内外许多学者在这些方面投入了大量研究工作，但是针对可以解决如何抑制发酵过程中杂菌生长、降低发酵成本、降解纤维素、提高蛋白质含量等方面仍然存在许多问题。
cn105331564a公开了一种固定化复合菌剂直接发酵甜高粱秸秆制作饲料的方法，该技术制作甜高粱秸秆饲料的关键是利用固定化技术对菌剂进行处理，从而达到菌剂可以缓释作用，但其菌剂需与纤维素酶混合使用，成本过高，不利于大规模推广。cn105379971a公开了一种青贮玉米的制作方法，该技术制作青贮玉米的关键是利用白地霉菌、产脘假丝酵母菌与植物乳杆菌三种菌同时处理玉米，从而达到降低玉米秸秆纤维素、提高饲料营养的作用，但由于三种菌同时作用，其降解纤维素，提高饲料蛋白质等方面的效果不明显。
针对现有技术存在的这些技术缺陷，本发明人在总结现有技术的基础之上，通过大量实验研究与分析，终于完成了本发明。
技术实现要素：
[要解决的技术问题]
本发明的目的是提供一种青贮用包埋菌剂。
本发明的另一个目的是提供所述青贮用包埋菌剂的生产方法。
[技术方案]
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明涉及一种青贮用包埋菌剂。该包埋菌剂由含有产酯酵母和植物乳杆菌的菌剂a与枯草芽孢杆菌菌剂b按照重量比2.5～3.5：1组成，该包埋菌剂含有2.5～3.5×108个/g枯草芽孢杆菌、6.0～7.0×108个/g产酯酵母与2.0～2.6×109个/g植物乳杆菌。
根据本发明的一种优选实施方式，该包埋菌剂由含有产酯酵母和植物乳杆菌的菌剂a与枯草芽孢杆菌菌剂b按照重量比2.8～3.2:1组成，该包埋菌剂含有2.8～3.2×108个/g枯草芽孢杆菌、6.4～6.8×108个/g产酯酵母与2.2～2.4×109个/g植物乳杆菌。
根据本发明的另一种优选实施方式，所述的枯草芽孢杆菌选自bacillussubtilisstrainb48(保藏单位：中国工业微生物菌种保藏管理中心cicc；保藏号cicc10089)、bacillussubtilisstrainb49(保藏单位：中国工业微生物菌种保藏管理中心cicc；保藏号cicc10090)或bacillussubtilisstrainwl1021(保藏单位：中国工业微生物菌种保藏管理中心cicc；保藏号cicc10063)菌株；所述的产酯酵母选自pichiaanomala(保藏单位中国典型培养物保藏中心cctcc；保藏号cicimy0297)、candidasp.(保藏单位：中国工业微生物菌种保藏管理中心cicc；保藏号cicc1257)或brettanomycessp.(保藏单位：中国典型培养物保藏中心cctcc；保藏号cctccay93142)菌株；所述的植物乳杆菌选自lactobacillusplantarumstrainf1(保藏单位：中国典型培养物保藏中心cctcc；保藏号ccremsdmcc050029)、lactobacillusplantaruma15(保藏单位：中国工业微生物菌种保藏管理中心cicc；保藏号cicc21814)或lactobacillusplantarumy15118(保藏单位：中国工业微生物菌种保藏管理中心cicc；保藏号cicc20768)菌株。
本发明涉及上述青贮用包埋菌剂的生产方法。
该青贮用包埋菌剂生产方法的步骤如下：
i、产酯酵母培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：20g/l蛋白胨、20g/l葡萄糖与10g/l酵母浸膏；
将选自pichiaanomala、candidasp.或brettanomycessp.的产酯酵母菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养24～36h，得到含有2.0～2.5×108个/g产酯酵母的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：10g/l蛋白胨、10g/l葡萄糖与5g/l氯化钠；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养36～48h，得到含有6.4～6.8×108个/g产酯酵母的发酵培养液；
ii、植物乳杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：10g/l牛肉膏、10g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、20g/l醋酸钠、5g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、2g/l吐温80、1g/l硫酸镁与0.58g/l硫酸锰；
将选自lactobacillusplantarumstrainf1、lactobacillusplantaruma15或lactobacillusplantarumy15118的植物乳杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养48～72h，得到含有5.0～5.5×108植物乳杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：20g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、0.008g/l氯化钠、0.008g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、0.008g/l硫酸镁与0.008g/l硫酸锰；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养60～72h，得到含有2.2～2.4×109个/g植物乳杆菌的发酵培养液；
iii、枯草芽孢杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
将选自bacillussubtilisstrainb48、bacillussubtilisstrainb49或bacillussubtilisstrainwl1021的枯草芽孢杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养24～36h，得到含有7.5～8.0×107个/g枯草芽孢杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养36～48h，得到含有2.5～3.5×108个/g枯草芽孢杆菌的发酵培养液；
iv、植物秸秆预处理
将植物秸秆粉碎，筛分，收集植物秸秆粉，再使用饱和水蒸汽处理1.0～1.5h，接着冷却至室温，得到灭菌植物秸秆粉；
v、菌剂制备
菌剂a的制备：
将步骤i得到的产酯酵母发酵培养液与步骤ii得到的植物乳杆菌发酵培养液按照体积比1：1.0～1.5混合均匀，按照灭菌植物秸秆粉干重计1.0～5.0％接种量，把混合均匀的发酵培养液加到灭菌植物秸秆粉中，在摇床中震荡8h，离心清洗，得到吸附产酯酵母与植物乳杆菌的载体；
将以混合溶液重量计6％聚乙烯醇、0.3％海藻酸钠与0.3％羧甲基纤维素钠在去离子水中浸泡一夜，在温度121℃的条件下灭菌20min，接着冷却至温度40℃，得到一种混合溶液；
将所述载体与所述混合溶液按照重量比10：1混合，再滴入ph6.0～6.8的含有以重量计4％cacl2的饱和硼酸溶液中，静置24h，得到菌剂a；
菌剂b的制备：
将步骤iii得到的枯草芽孢杆菌发酵培养液、按照枯草芽孢杆菌发酵培养液重量计6％海藻糖与15％脱脂乳混合均匀，再置于冷冻干燥设备中处理得到所述的菌剂b；
将菌剂a与菌剂b按照重量比2.5～3.5：1混合均匀，得到所述的包埋菌剂。
根据本发明的一种优选实施方式，所述的植物秸秆是玉米秸秆、高粱秸秆、小麦秸秆或水稻秸秆。
根据本发明的另一种优选实施方式，所述植物秸秆粉的粒度是80目以上。
根据本发明的另一种优选实施方式，所述的包埋菌剂在温度4℃下保存。
根据本发明的另一种优选实施方式，所述的包埋菌剂含有2.5～3.5×108个/g枯草芽孢杆菌、6.0～7.0×108个/g产酯酵母与2.0～2.6×109个/g植物乳杆菌。
下面将更详细地描述本发明。
本发明涉及一种青贮用包埋菌剂。
我国市面销售的秸秆青贮菌剂大多为以乳酸菌为主的快速发酵产酸菌剂，秸秆纤维素基本不会降解，蛋白质提升也不大，而且也不适合内蒙地区寒冷环境施用。本发明通过从内蒙古地区各地采得样品中筛选到的枯草芽孢杆菌、产酯酵母与植物乳杆菌，将其接种于玉米秸秆等秸秆时，利用菌剂b快速溶解，微生物迅速繁殖，将降解秸秆中的纤维素转化为糖，而利用吸附-包埋-交联技术制得的菌剂a在菌剂b加入后12h内缓慢释放出来，利用秸秆自身的糖分以及被菌剂b降解的糖分，可以大幅度提高饲料的蛋白含量。
该包埋菌剂由含有产酯酵母和植物乳杆菌的菌剂a与枯草芽孢杆菌菌剂b按照重量比2.5～3.5：1组成，该包埋菌剂含有2.5～3.5×108个/g枯草芽孢杆菌、6.0～7.0×108个/g产酯酵母与2.0～2.6×109个/g植物乳杆菌。
优选地，该包埋菌剂由含有产酯酵母和植物乳杆菌的菌剂a与枯草芽孢杆菌菌剂b按照重量比2.8～3.2:1组成，该包埋菌剂含有2.8～3.2×108个/g枯草芽孢杆菌、6.4～6.8×108个/g产酯酵母与2.2～2.4×109个/g植物乳杆菌。
本发明使用的枯草芽孢杆菌自身产生一种能够分解纤维素的酶，因此可以充分利用秸秆中的纤维素并将其降解为其它细菌可以利用的低聚糖，具有牛羊采食后可以使肠道内其他厌氧益生菌大量繁殖、促进消化、提高免疫力等优点，是秸秆青贮菌种的优良品种。
根据本发明，所述的枯草芽孢杆菌选自bacillussubtilisstrainb48、bacillussubtilisstrainb49或bacillussubtilisstrainwl1021菌株；这些菌株都是可以从相关微生物保藏机构获得的菌株。
本发明使用的产酯酵母可以有效提升青贮饲料的风味，能够利用枯草芽孢杆菌分解纤维素产生的低聚糖进行繁殖。产酯酵母蛋白含量很高，可以有效提升饲料蛋白含量，成为牛羊都可以食用的单细胞蛋白。
根据本发明，所述的产酯酵母选自pichiaanomala、candidasp.或brettanomycessp.菌株；这些菌株都是可以从相关微生物保藏机构获得的菌株。
本发明使用的植物乳杆菌为兼性厌氧微生物，随着枯草芽孢杆菌和产酯酵母将原料间隙的氧气利用完毕后迅速占据优势并且大量生长，本菌剂利用吸附-包埋-交联方式可以使植物乳杆菌缓慢释放出来，不至于因为植物乳杆菌过快生长而导致青贮饲料中营养不足，可以使得酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌分段成为饲料微环境中的优势菌群，发酵的秸秆可成为低纤维素、高蛋白、质地蓬松、气味酸香的优质牛羊青贮饲料。
根据本发明，所述的植物乳杆菌选自lactobacillusplantarumstrainf1、lactobacillusplantaruma15或lactobacillusplantarumy15118菌株；这些菌株都是可以从相关微生物保藏机构获得的菌株。
本发明涉及所述青贮用包埋菌剂的生产方法。
该青贮用包埋菌剂生产方法的步骤如下：
i、产酯酵母培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：20g/l蛋白胨、20g/l葡萄糖与10g/l酵母浸膏；
蛋白胨、葡萄糖与酵母浸膏都是目前市场上销售的产品。
将选自pichiaanomala、candidasp.或brettanomycessp.的产酯酵母菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养24～36h，得到含有2.0～2.5×108个/g产酯酵母的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：10g/l蛋白胨、10g/l葡萄糖与5g/l氯化钠；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养36～48h，得到含有6.4～6.8×108个/g产酯酵母的发酵培养液；
这个步骤使用的蛋白胨、葡萄糖、酵母浸膏以及后续制备步骤使用的其它原料都是目前市场上销售的产品，也是目前市场上销售的产品；这个步骤以及后续步骤使用的摇瓶与发酵罐是本技术领域里通常使用的设备，也是目前市场上销售的产品，因此，下面将不再赘述这些技术内容。
ii、植物乳杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：10g/l牛肉膏、10g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、20g/l醋酸钠、5g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、2g/l吐温80、1g/l硫酸镁与0.58g/l硫酸锰；
将选自lactobacillusplantarumstrainf1、lactobacillusplantaruma15或lactobacillusplantarumy15118的植物乳杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养48～72h，得到含有5.0～5.5×108植物乳杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：20g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、0.008g/l氯化钠、0.008g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、0.008g/l硫酸镁与0.008g/l硫酸锰；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养60～72h，得到含有2.2～2.4×109个/g植物乳杆菌的发酵培养液；
iii、枯草芽孢杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
将选自bacillussubtilisstrainb48、bacillussubtilisstrainb49或bacillussubtilisstrainwl1021的枯草芽孢杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养24～36h，得到含有7.5～8.0×107个/g枯草芽孢杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110～120℃下灭菌8～12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30～32℃条件下培养36～48h，得到含有2.5～3.5×108个/g枯草芽孢杆菌的发酵培养液；
iv、植物秸秆预处理
将植物秸秆粉碎，筛分，收集植物秸秆粉，再使用饱和水蒸汽处理1.0～1.5h，接着冷却至室温，得到灭菌植物秸秆粉；
本发明使用的植物秸秆是玉米秸秆、高粱秸秆、小麦秸秆或水稻秸秆。当然，凡是能够被本发明菌剂分解并不会对其菌剂产生不良影响的其它植物秸秆，也可以用于本发明，也都在本发明保护范围之内。
根据本发明，所述植物秸秆粉的粒度是80目以上。
粉碎、筛分、水蒸汽处理所使用的设备都是本技术领域里通常使用的设备。
v、菌剂制备
菌剂a的制备：
将步骤i得到的产酯酵母发酵培养液与步骤ii得到的植物乳杆菌发酵培养液按照体积比1：1.0～1.5混合均匀，按照灭菌植物秸秆粉干重计1.0～5.0％接种量，把混合均匀的发酵培养液加到灭菌植物秸秆粉中，在摇床中震荡8h，离心清洗，得到吸附产酯酵母与植物乳杆菌的载体；
将以混合溶液重量计6％聚乙烯醇、0.3％海藻酸钠与0.3％羧甲基纤维素钠在去离子水中浸泡一夜，在温度121℃的条件下灭菌20min，接着冷却至温度40℃，得到一种混合溶液；
将所述载体与所述混合溶液按照重量比10：1混合，再滴入ph6.0～6.8的含有以重量计4％cacl2的饱和硼酸溶液中，静置24h，得到菌剂a；
菌剂b的制备：
将步骤iii得到的枯草芽孢杆菌发酵培养液、按照枯草芽孢杆菌发酵培养液重量计6％海藻糖与15％脱脂乳混合均匀，再置于冷冻干燥设备中处理得到所述的菌剂b；
将菌剂a与菌剂b按照重量比2.5～3.5：1混合均匀，得到所述的包埋菌剂。所述的包埋菌剂在温度4℃下保存。
根据本发明方法制备得到的包埋菌剂含有2.5～3.5×108个/g枯草芽孢杆菌、6.0～7.0×108个/g产酯酵母与2.0～2.6×109个/g植物乳杆菌。
接种时将菌剂溶于25～35℃的水中，加入少许糖，然后把粉碎后的玉米秸秆经饱和蒸汽处理1h，冷却至25℃备用，按干料总量1％接入液体菌剂，然后将原料与菌液拌好后分层填入池中，添加20～30cm后将原料踩实后继续添加下一层原料，将原料加完毕后覆盖塑料薄膜，再埋10cm左右土壤后踩实，接着进行自然发酵，得到所述的青贮饲料。
[有益效果]
本发明的有益效果是：我国市售秸秆青贮菌剂大多为以乳酸菌为主的快速发酵产酸菌剂，它们对秸秆本身含有的纤维素基本不会降解，蛋白质提升也不大，对内蒙地区寒冷环境适应性也不高。本发明通过从内蒙各地采得样品中筛到的枯草芽孢杆菌、产酯酵母、植物乳杆菌，将其接种于玉米秸秆时，菌剂b可快速溶解繁殖，将秸秆的纤维素降解转化为糖，而菌剂a在菌剂b后才缓慢释放出来，利用秸秆自身糖分以及被菌剂b降解得到的糖分，能够大幅度提高饲料蛋白含量，例如提高50％以上。
本发明枯草芽孢杆菌自产分解纤维素酶，可以充分利用秸秆中的纤维素并将其降解为其它细菌可以利用的低聚糖，在牛羊采食后可以使肠道内其它厌氧益生菌大量繁殖、促进消化、提高免疫力，因此本发明的是秸秆青贮菌种的优良品种。
本发明所采用的产酯酵母可以有效提升青贮饲料的风味，其可以利用枯草芽孢杆菌分解纤维素产生的低聚糖进行繁殖。产酯酵母的蛋白含量很高，可以有效提升饲料的蛋白含量，成为牛羊都可以食用的单细胞蛋白。
本发明所采用的植物乳杆菌为兼性厌氧微生物，随着枯草芽孢杆菌和产酯酵母将原料间隙的氧气利用完毕后迅速占据优势并且大量生长，本菌剂利用吸附-包埋-交联的方式可以使植物乳杆菌缓慢释放出来，不至于因为植物乳杆菌的过快生长而导致青贮饲料中的营养不足，可以使得酵母菌、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌分段成为饲料微环境中的优势菌群，发酵过后的秸秆即可成为低纤维素、高蛋白、质地蓬松、气味酸香的优质牛羊青贮饲料。
本发明青贮用包埋菌剂中的菌种均为内蒙古各地玉米秸秆中筛选得到的菌株，它们非常适于针对本地玉米秸秆青贮饲料，可以有效提高秸秆的利用率，同时本菌剂可以对秸秆进行快速青贮，缩短饲料成熟时间。
【具体实施方式】
通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
实施例1：生产本发明青贮用包埋菌剂
该实施例的实施步骤如下：
i、产酯酵母培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：20g/l蛋白胨、20g/l葡萄糖与10g/l酵母浸膏；
将pichiaanomala产酯酵母菌株按照1％接种量接种于在温度110℃下灭菌12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养24h，得到含有2.0×108个/g产酯酵母的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：10g/l蛋白胨、10g/l葡萄糖与5g/l氯化钠；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110℃下灭菌12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30℃条件下培养44h，得到含有6.4×108个/g产酯酵母的发酵培养液；
ii、植物乳杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：10g/l牛肉膏、10g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、20g/l醋酸钠、5g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、2g/l吐温80、1g/l硫酸镁与0.58g/l硫酸锰；
将lactobacillusplantarumstrainf1植物乳杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度110℃下灭菌12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养48h，得到含有5.2×108植物乳杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：20g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、0.008g/l氯化钠、0.008g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、0.008g/l硫酸镁与0.008g/l硫酸锰；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110℃下灭菌12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度32℃条件下培养64h，得到含有2.2×109个/g植物乳杆菌的发酵培养液；
iii、枯草芽孢杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
将bacillussubtilisstrainb48枯草芽孢杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度110℃下灭菌12min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养28h，得到含有7.6×107个/g枯草芽孢杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度110℃下灭菌12min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30℃条件下培养36h，得到含有2.8×108个/g枯草芽孢杆菌的发酵培养液；
iv、植物秸秆预处理
将玉米秸秆粉碎，筛分，收集80目玉米秸秆粉，再使用饱和水蒸汽处理1.0h，接着冷却至室温，得到灭菌玉米秸秆粉；
v、菌剂制备
菌剂a的制备：
将步骤i得到的产酯酵母发酵培养液与步骤ii得到的植物乳杆菌发酵培养液按照体积比1：1.0混合均匀，按照灭菌植物秸秆粉干重计3.01.05.04.0％接种量，把混合均匀的发酵培养液加到灭菌玉米秸秆粉中，在摇床中震荡8h，离心清洗，得到吸附产酯酵母与植物乳杆菌的载体；
将以混合溶液重量计6％聚乙烯醇、0.3％海藻酸钠与0.3％羧甲基纤维素钠在去离子水中浸泡一夜，在温度121℃的条件下灭菌20min，接着冷却至温度40℃，得到一种混合溶液；
将所述载体与所述混合溶液按照重量比10：1混合，再滴入ph6.0的含有以重量计4％cacl2的饱和硼酸溶液中，静置24h，得到菌剂a；
菌剂b的制备：
将步骤iii得到的枯草芽孢杆菌发酵培养液、按照枯草芽孢杆菌发酵培养液重量计6％海藻糖与15％脱脂乳混合均匀，再置于冷冻干燥设备中处理得到所述的菌剂b；
将菌剂a与菌剂b按照重量比2.5：1混合均匀，得到所述的包埋菌剂，它含有2.5×108个/g枯草芽孢杆菌、6.2×108个/g产酯酵母与2.0×109个/g植物乳杆菌。所述的包埋菌剂在温度4℃下保存。
实施例2：生产本发明青贮用包埋菌剂
该实施例的实施步骤如下：
i、产酯酵母培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：20g/l蛋白胨、20g/l葡萄糖与10g/l酵母浸膏；
将candidasp.产酯酵母菌株按照1％接种量接种于在温度120℃下灭菌8min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养28h，得到含有2.2×108个/g产酯酵母的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：10g/l蛋白胨、10g/l葡萄糖与5g/l氯化钠；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度120℃下灭菌8min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度32℃条件下培养36h，得到含有6.8×108个/g产酯酵母的发酵培养液；
ii、植物乳杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：10g/l牛肉膏、10g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、20g/l醋酸钠、5g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、2g/l吐温80、1g/l硫酸镁与0.58g/l硫酸锰；
将lactobacillusplantaruma15植物乳杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度120℃下灭菌8min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养72h，得到含有5.0×108植物乳杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：20g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、0.008g/l氯化钠、0.008g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、0.008g/l硫酸镁与0.008g/l硫酸锰；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度120℃下灭菌8min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30℃条件下培养60h，得到含有2.4×109个/g植物乳杆菌的发酵培养液；
iii、枯草芽孢杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
将bacillussubtilisstrainb49枯草芽孢杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度120℃下灭菌8min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养24h，得到含有7.5×107个/g枯草芽孢杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度120℃下灭菌8min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度32℃条件下培养48h，得到含有2.5×108个/g枯草芽孢杆菌的发酵培养液；
iv、植物秸秆预处理
将高粱秸秆粉碎，筛分，收集100目高粱秸秆粉，再使用饱和水蒸汽处理1.2h，接着冷却至室温，得到灭菌高粱秸秆粉；
v、菌剂制备
菌剂a的制备：
将步骤i得到的产酯酵母发酵培养液与步骤ii得到的植物乳杆菌发酵培养液按照体积比1：1.5混合均匀，按照灭菌高粱秸秆粉干重计1.0％接种量，把混合均匀的发酵培养液加到灭菌植物秸秆粉中，在摇床中震荡8h，离心清洗，得到吸附产酯酵母与植物乳杆菌的载体；
将以混合溶液重量计6％聚乙烯醇、0.3％海藻酸钠与0.3％羧甲基纤维素钠在去离子水中浸泡一夜，在温度121℃的条件下灭菌20min，接着冷却至温度40℃，得到一种混合溶液；
将所述载体与所述混合溶液按照重量比10：1混合，再滴入ph6.4的含有以重量计4％cacl2的饱和硼酸溶液中，静置24h，得到菌剂a；
菌剂b的制备：
将步骤iii得到的枯草芽孢杆菌发酵培养液、按照枯草芽孢杆菌发酵培养液重量计6％海藻糖与15％脱脂乳混合均匀，再置于冷冻干燥设备中处理得到所述的菌剂b；
将菌剂a与菌剂b按照重量比3.5：1混合均匀，得到所述的包埋菌剂，它含有3.5×108个/g枯草芽孢杆菌、6.0×108个/g产酯酵母与2.2×109个/g植物乳杆菌。所述的包埋菌剂在温度4℃下保存。
实施例3：生产本发明青贮用包埋菌剂
该实施例的实施步骤如下：
i、产酯酵母培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：20g/l蛋白胨、20g/l葡萄糖与10g/l酵母浸膏；
将brettanomycessp.产酯酵母菌株按照1％接种量接种于在温度114℃下灭菌9min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养36h，得到含有2.5×108个/g产酯酵母的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：10g/l蛋白胨、10g/l葡萄糖与5g/l氯化钠；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度114℃下灭菌9min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30℃条件下培养48h，得到含有6.4×108个/g产酯酵母的发酵培养液；
ii、植物乳杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：10g/l牛肉膏、10g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、20g/l醋酸钠、5g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、2g/l吐温80、1g/l硫酸镁与0.58g/l硫酸锰；
将lactobacillusplantarumy15118植物乳杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度114℃下灭菌9min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养56h，得到含有5.5×108植物乳杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：20g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、0.008g/l氯化钠、0.008g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、0.008g/l硫酸镁与0.008g/l硫酸锰；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度114℃下灭菌9min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度32℃条件下培养72h，得到含有2.3×109个/g植物乳杆菌的发酵培养液；
iii、枯草芽孢杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
将bacillussubtilisstrainwl1021枯草芽孢杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度114℃下灭菌9min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养36h，得到含有7.8×107个/g枯草芽孢杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度114℃下灭菌9min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30℃条件下培养40h，得到含有3.2×108个/g枯草芽孢杆菌的发酵培养液；
iv、植物秸秆预处理
将小麦秸秆粉碎，筛分，收集120目小麦秸秆粉，再使用饱和水蒸汽处理1.01.21.51.4h，接着冷却至室温，得到灭菌小麦秸秆粉；
v、菌剂制备
菌剂a的制备：
将步骤i得到的产酯酵母发酵培养液与步骤ii得到的植物乳杆菌发酵培养液按照体积比1：1.4混合均匀，按照灭菌小麦秸秆粉干重计5.0％接种量，把混合均匀的发酵培养液加到灭菌植物秸秆粉中，在摇床中震荡8h，离心清洗，得到吸附产酯酵母与植物乳杆菌的载体；
将以混合溶液重量计6％聚乙烯醇、0.3％海藻酸钠与0.3％羧甲基纤维素钠在去离子水中浸泡一夜，在温度121℃的条件下灭菌20min，接着冷却至温度40℃，得到一种混合溶液；
将所述载体与所述混合溶液按照重量比10：1混合，再滴入ph6.6的含有以重量计4％cacl2的饱和硼酸溶液中，静置24h，得到菌剂a；
菌剂b的制备：
将步骤iii得到的枯草芽孢杆菌发酵培养液、按照枯草芽孢杆菌发酵培养液重量计6％海藻糖与15％脱脂乳混合均匀，再置于冷冻干燥设备中处理得到所述的菌剂b；
将菌剂a与菌剂b按照重量比2.8：1混合均匀，得到所述的包埋菌剂，它含有3.2×108个/g枯草芽孢杆菌、7.0×108个/g产酯酵母与2.4×109个/g植物乳杆菌。所述的包埋菌剂在温度4℃下保存。
实施例4：生产本发明青贮用包埋菌剂
该实施例的实施步骤如下：
i、产酯酵母培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：20g/l蛋白胨、20g/l葡萄糖与10g/l酵母浸膏；
将brettanomycessp.产酯酵母菌株按照1％接种量接种于在温度118℃下灭菌10min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养32h，得到含有2.4×108个/g产酯酵母的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：10g/l蛋白胨、10g/l葡萄糖与5g/l氯化钠；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度118℃下灭菌10min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度32℃条件下培养40h，得到含有6.6×108个/g产酯酵母的发酵培养液；
ii、植物乳杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：10g/l牛肉膏、10g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、20g/l醋酸钠、5g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、2g/l吐温80、1g/l硫酸镁与0.58g/l硫酸锰；
将lactobacillusplantarumy15118植物乳杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度118℃下灭菌10min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养64h，得到含有5.4×108植物乳杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：20g/l蛋白胨、10g/l酵母膏、5g/l葡萄糖、0.008g/l氯化钠、0.008g/l磷酸氢二钾、2g/l柠檬酸二铵、0.008g/l硫酸镁与0.008g/l硫酸锰；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度118℃下灭菌10min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度30℃条件下培养68h，得到含有2.2×109个/g植物乳杆菌的发酵培养液；
iii、枯草芽孢杆菌培养液制备：
制备具有下述组成的摇瓶培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
将bacillussubtilisstrainwl1021枯草芽孢杆菌菌株按照1％接种量接种于在温度118℃下灭菌10min的摇瓶培养基中，在摇瓶中在温度30℃条件下培养32h，得到含有8.0×107个/g枯草芽孢杆菌的摇瓶培养液；
制备具有下述组成的发酵培养基：5g/l羧甲基纤维素钠、2g/l硫酸铵、1g/l磷酸氢二钾、0.5g/l氯化钠与0.5g/l硫酸镁；
按照3％接种量将上述摇瓶培养液接种于在温度118℃下灭菌10min的发酵培养基中，在发酵罐中在温度32℃条件下培养44h，得到含有3.5×108个/g枯草芽孢杆菌的发酵培养液；
iv、植物秸秆预处理
将玉米秸秆、高粱秸秆、小麦秸秆或水稻秸秆粉碎，筛分，收集80100120100目玉米秸秆、高粱秸秆、小麦秸秆或水稻秸秆粉，再使用饱和水蒸汽处理1.01.21.51.4h，接着冷却至室温，得到灭菌植物秸秆粉；
v、菌剂制备
菌剂a的制备：
将步骤i得到的产酯酵母发酵培养液与步骤ii得到的植物乳杆菌发酵培养液按照体积比1：1.2混合均匀，按照灭菌植物秸秆粉干重计4.0％接种量，把混合均匀的发酵培养液加到灭菌植物秸秆粉中，在摇床中震荡8h，离心清洗，得到吸附产酯酵母与植物乳杆菌的载体；
将以混合溶液重量计6％聚乙烯醇、0.3％海藻酸钠与0.3％羧甲基纤维素钠在去离子水中浸泡一夜，在温度121℃的条件下灭菌20min，接着冷却至温度40℃，得到一种混合溶液；
将所述载体与所述混合溶液按照重量比10：1混合，再滴入ph6.8的含有以重量计4％cacl2的饱和硼酸溶液中，静置24h，得到菌剂a；
菌剂b的制备：
将步骤iii得到的枯草芽孢杆菌发酵培养液、按照枯草芽孢杆菌发酵培养液重量计6％海藻糖与15％脱脂乳混合均匀，再置于冷冻干燥设备中处理得到所述的菌剂b；
将菌剂a与菌剂b按照重量比3.2：1混合均匀，得到所述的包埋菌剂，它含有2.8×108个/g枯草芽孢杆菌、6.8×108个/g产酯酵母与2.6×109个/g植物乳杆菌。所述的包埋菌剂在温度4℃下保存。
试验实施例1：制备青贮饲料
该试验实施例的实施步骤如下：
i、发酵池与原料
选择长2m×宽1.5m×深1.8m长方形发酵池进行试验。该发酵池四周铺设塑料薄膜，选择新鲜青绿玉米秸秆，粉碎，备用。
ii、菌种活化
往实施例1制备包埋菌剂中添加少许糖，再置于温度25℃～35℃的水中搅拌溶解1h，备用。
iii、接种装料
将粉碎玉米秸秆经饱和蒸汽处理1h，冷却至25℃备用，按照粉碎玉米秸秆干重计1％接入步骤ii得到的菌液，然后混匀，得到的原料填入发酵池中，填充厚度达到20～30cm时踩实，接着继续添加原料，以同样方式进行，直到原料加完，接着覆盖塑料薄膜，再填埋约10cm土壤，踩实，每池装约7t原料。
iv、青贮饲料制备
让原料在青贮池中在自然条件下发酵15d，得到所述的青贮饲料。
根据gb/t6434-2006标准分析方法，对得到的青贮饲料进行粗纤维分析；根据gb/t6432-1994标准分析方法，对得到的青贮饲料进行粗蛋白分析，这些分析结果列于下表1中。在4℃的条件下，对得到的青贮饲料进行有效保存时间检测。
试验实施例2：制备青贮饲料
该试验实施例的实施步骤与试验实施例1相同，只是该试验实施例2使用实施例2制备的包埋菌剂、发酵时间20天。该试验实施例得到的青贮饲料进行粗纤维分析、粗蛋白分析与有效保存时间检测，这些分析结果也列于下表1中。
试验实施例3：制备青贮饲料
该试验实施例的实施步骤与试验实施例1相同，只是该试验实施例3使用实施例3制备的包埋菌剂。该实施例得到的青贮饲料进行粗纤维分析、粗蛋白分析与有效保存时间检测，这些分析结果也列于下表1中。
试验实施例4：制备青贮饲料
该试验实施例的实施步骤与试验实施例1相同，只是该试验实施例3使用实施例4制备的包埋菌剂。该试验实施例得到的青贮饲料进行粗纤维分析、粗蛋白分析与有效保存时间检测，这些分析结果也列于下表1中。
试验实施例5：制备青贮饲料
该试验实施例的实施步骤与试验实施例1相同，只是该试验实施例5没有添加本发明的包埋菌剂。该试验实施例得到的青贮饲料进行粗纤维分析、粗蛋白分析与有效保存时间检测，这些分析结果也列于下表1中。
试验实施例6：制备青贮饲料
该试验实施例的实施步骤与试验实施例1相同，只是该试验实施例6添加目前市售的“农富康”牌秸秆发酵菌剂。该试验实施例得到的青贮饲料进行粗纤维分析、粗蛋白分析与有效保存时间检测，这些分析结果也列于下表1中。
表1：本发明制备青贮饲料的分析结果
由表1列出的结果清楚地看出，由本发明所得到的青贮饲料无论在饲料本身的营养上，还是在有效保质期上，均超过市售菌剂，所以，本发明提高了玉米秸秆的利用率，改善了青贮饲料的营养价值，具有良好的应用前景。