一种甘草烯酸衍生物及其制备方法与用途与流程

本发明涉及的是一种甘草烯酸衍生物及其制备方法与作为抗炎的用途，属于新化合物的提出、制备与应用技术领域。

背景技术：

炎症是免疫系统的基本防御机制，可以防止由有害刺激物(如病原体和毒药)引起的伤害。然而，炎症过程本身可能导致组织损伤并导致许多疾病甚至癌症(r.medzhitov，nature,2008,454,428-435)。炎症是具有血管系统的活体组织对损伤因子(创伤、感染、缺血、中毒或自身免疫损伤)所发生的复杂防御反应(hsucc,lienjc.等，biochemicalpharmacology,2013,85,385-395)，适度的炎症反应是宿主防御有害刺激和启动愈合的重要过程，但急性炎症可能导致组织损伤、脓毒症、癌症和休克等病变(heisse,herhausc.等，jbiolchem,2001,276,32008-32015)。当暴露于炎性因子或其他刺激时，单核细胞转移至血管外组织，分化为巨噬细胞。激活后，巨噬细胞会产生一氧化氮(no)、前列腺素e2(pge2)和细胞因子(如白细胞介素(il-1β，il-6)和肿瘤坏死因子(tnf-α)等因子)。这些因子大量表达会对内皮细胞、上皮细胞产生深刻影响，并在局部微环境的间充质细胞进行宿主防御、组织重建或修复等(yonas,jungs.等，curropinhematol,2010,17,53-59)。

非甾体抗炎药(nsaids)在治疗疼痛和炎症方面占重要地位，但nsaids的长期使用与胃肠道不良事件发生率高有关(t.narsinghani,r.sharma，chem.biol.drugdes,2014,84,1-23)。因此，仍然迫切需要寻找具有改善作用的药物和减少不良反应的新型抗炎药物。由于治疗功效和副作用较少，天然产物在许多研发早期新分子实体(nmes)的药物中占有重要地位，近一半nmes都是天然产物或其衍生物(e.patridge,p.gareiss.等，drugdiscov,2016,21,204-207)；寻找新型天然产物类抗炎药物更具有理论价值和实际意义。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一种甘草烯酸衍生物及其制备方法与用途；本发明的另一个目的是提供一种抗炎药物，并将其应用于治疗和预防急性肺损伤、慢阻肺、脓毒血症等有关疾病的药物或药物组合物中。

本发明是通过以下技术方案实现的：

提供一种甘草烯酸衍生物，其结构如下列通式(ⅰ)所示：

其中r为含有一个或多个取代基的氨基、醇/酚基、硫醇/硫酚基、肼基，所述取代基选自不同取代的烷基、芳香基、杂环基的一种或多种。

优选地，所述的r为c1～c6单取代/双取代氨基或肼基、含羟基或卤素的c1～c6单取代/双取代氨基、c1～c6取代醇/酚基、c1～c6取代硫醇/硫酚基、含芳基或杂环的c0～c3取代氨基、c0～c3取代的四氢吡咯基或哌嗪基或高哌嗪基。

本发明同时提供了上述甘草烯酸衍生物的制备方法，包括以下步骤：

步骤(1)：化合物(ⅰ)和磷酰基乙酸三乙酯按照摩尔比1︰1～2投料反应制得化合物(ⅱ)；

反应溶剂为非质子溶剂；反应温度为-10℃～40℃；

优选地，反应溶剂为四氢呋喃；反应温度为0℃～30℃。

步骤(2)：化合物(ⅱ)和苛性碱按照摩尔比1︰1～3投料反应制得化合物(ⅲ)；

反应溶剂为极性偶极溶剂与非质子溶剂混合；反应温度为-10℃～100℃；

优选地，反应溶剂为乙醇、三氯甲烷混合；反应催化剂为氢氧化钠；反应温度为0℃～30℃。

步骤(3)：化合物(ⅲ)和相应的胺类、醇类或硫醇类按照摩尔比1︰1～10投料反应制得甘草烯酸衍生物(ⅰ)；

反应溶剂为非质子溶剂；反应试剂为缩合剂；反应温度为-20℃～100℃；

优选地，反应溶剂为二氯甲烷；反应试剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(edc·hcl)/1-羟基苯并三唑等缩合剂(hobt)、二环己基碳二亚胺(dcc)；反应温度为-5℃～30℃。

步骤(4)：化合物(ⅲ)和醇类、硫醇类等反应制得甘草酸衍生物按照摩尔比1︰1～10投料反应制得甘草烯酸衍生物(ⅰ)；

反应溶剂为非质子溶剂；反应催化剂为脱水催化剂；反应温度为-20℃～100℃；

优选地，反应溶剂为二氯甲烷；反应试剂为浓硫酸、五氯化磷、氯化亚砜、三氟化硼等催化剂；反应温度为-5℃～30℃。

更优选地，所述甘草烯酸衍生物的制备方法，包括以下步骤：

步骤(1)：将氢化钠加入无水四氢呋喃中，0℃～5℃条件下搅拌，氮气保护，缓慢滴加磷酰基乙酸三乙酯，加完后，继续搅拌1小时；将化合物(ⅰ)溶解于thf中，冰浴条件下缓慢滴加到上述混合反应液中，室温搅拌2～3小时，tlc监测，待化合物(ⅰ)反应完全后，停止反应；将反应液过滤，乙酸乙酯洗涤两次，合并滤液，萃取，有机相用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，乙醇重结晶得化合物(ⅱ)。

步骤(2)：将化合物(ⅱ)加到反应溶剂中，缓慢加入氢氧化钠水溶液，40℃搅拌2～3小时；tlc监测，反应完全后，滴加稀盐酸调节ph值至4～5，三氯甲烷萃取两次，有机相依次用水和饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，得化合物(ⅲ)。

步骤(3)：将化合物(ⅲ)加到反应溶剂中，依次加入edc·hcl、hobt和相应的胺类，搅拌溶解后，加入三乙胺；室温搅拌过夜，tlc监测，待化合物(ⅲ)反应完全后，停止反应，将反应混合液倒入冰水中，搅拌待冰融化，分层，萃取，有机相用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥；过滤减压浓缩，乙醇重结晶，得甘草烯酸衍生物。

步骤(4)：将化合物(ⅲ)加到反应溶剂中，加入相应醇类或硫醇类，搅拌溶解后，加入氯化亚砜或三氟化硼乙醚溶液；室温搅拌过夜，室温搅拌过夜，tlc监测，待化合物(ⅲ)反应完全后，停止反应，将反应混合液倒入冰水中，搅拌待冰融化，分层，萃取，有机相用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥；过滤减压浓缩，乙醇重结晶，得甘草烯酸衍生物。

本发明还公开了所述甘草烯酸衍生物在制备抗炎类药物或药物组合物中的应用；具体地，是在制备治疗和预防急性肺损伤、慢阻肺、脓毒血症等有关的疾病的药物或药物组合物中的应用。

本发明相比现有技术具有以下优点：

本发明所提供的甘草烯酸衍生物具有可逆、选择性的抗炎活性，具有良好的抑制炎症信号分子no的产生；其中部分优选的甘草烯酸衍生物在40μm的浓度下对no产生的抑制率超过70％，显示出很强的抑制活性。

附图说明

图1为甘草烯酸衍生物的合成路线图。

图2为甘草烯酸衍生物的结构式。

图3为化合物衍生物2～18对raw264.7细胞中脂多糖(lps)诱导的no释放的抑制作用。

具体实施方式

下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。

本发明具体实施方式中涉及的甘草烯酸衍生物如表1所示：

表1甘草烯酸衍生物的不同基团

实施例1～实施例16

衍生物1～衍生物16的制备(合成路线如图1所示)

参考文献(besedai等,bioorg.med.chem.,2010,18(1),433-54)，合成甘草醛。

将80％氢化钠(6.0mmol)加入无水四氢呋喃(100ml)中，0℃～5℃条件下搅拌，氮气保护，经30分钟缓慢滴加磷酰基乙酸三乙酯(6.0mmol)，加完后，相同条件下搅拌1小时；将所得甘草醛(5.0mmol)溶解于无水四氢呋喃(30ml)中，冰浴条件下经30分钟滴加到上述混合反应液中，室温搅拌2～3小时，tlc监测，待甘草醛反应完全，停止反应；将反应液过滤，乙酸乙酯洗涤两次，合并滤液，萃取，有机相用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，乙醇重结晶得甘草烯酸衍生物1；

将所得甘草烯酯(3.2mmol)溶解于乙醇/三氯甲烷(5/1)混合溶剂中，缓慢加入氢氧化钠溶液(50ml，5％)，室温搅拌2～3小时；tlc监测，待甘草烯酯反应完全后，停止反应，滴加稀盐酸调节ph值至4～5，三氯甲烷萃取两次，有机相依次用水和饱和氯化钠各洗两次，无水硫酸钠干燥，过滤减压浓缩，得甘草烯酸衍生物2；

将甘草烯酸(0.50mmol)加到二氯甲烷(20ml)中，搅拌溶解，依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.2mmol)、1-羟基苯并三唑(1.2mmol)和相应的胺类(1.0mmol，2当量)，搅拌溶解后，加入三乙胺(2.0mmol)；室温搅拌过夜，tlc监测，待甘草烯酸反应完全后，将反应混合液倒入冰水(50ml)，搅拌待冰融化，分层，萃取，有机相用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥；过滤减压浓缩，乙醇重结晶，得甘草烯酸衍生物3～16。

所述甘草烯酸衍生物1～16的波谱分析如下所示：

实施例1

衍生物1：白色粉末，产率为64％，m.p.254-257℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.89(d,1h,j＝16.2hz,h-30),5.79(d,1h,j＝16.2hz,h-31),5.63(s,1h,h-12),4.52(dd,1h,j＝11.4,5.0hz,h-1),4.20(q,2h,j＝7.1hz,och2ch3),2.80(dt,1h,j＝13.5,3.3hz,h-5),2.36(s,1h,h-9),2.05(s,3h,oac),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).

实施例2

衍生物2：白色粉末，产率为91％；m.p.259-262℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):7.00(d,1h,j＝16.2hz,h-30),5.82(d,1h,j＝16.2hz,h-31),5.66(s,1h,h-12),3.73(q,2h,j＝7.0hz),3.24(dd,1h,j＝9.8,6.5hz,h-3),2.79(d,1h,j＝13.5,h-18),2.36(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),2.34(s,1h,h-9),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28)；13c-nmr(75mhz,cdcl3),δ(ppm):200.3(c-11),170.43(c-13),169.5(c-32),157.9(c-30),128.3(c-12),119.4(c-31),78.8(c-3),61.8(c-9),58.4(c-22),54.9(c-5),47.4(c-18),45.4(c-8),43.3(c-14),42.8(c-20),39.1(c-4),39.1(c-1),38.0(c-10),37.1(c-19),36.7(c-21),32.7(c-2),32.2(c-7),30.7(c-17),28.4(c-28),28.0(c-23),26.4(c-16),26.3(c-15),23.5(c-20),18.6(c-26),18.4(c-27),17.4(c-6),16.3(c-25),15.5(c-24).

实施例3

衍生物3：白色粉末，产率为67％；m.p.269-271℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),5.68(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.55(s,1h,h-12),3.23(dd,1h,j＝10.0,60hz,h-3),2.90(d,3h,j＝4.9hz,nch3),2.79(m,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc33h52no3:512.7910；found:512.7908.

实施例4

衍生物4：白色粉末，产率为70％；m.p.265-268℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),5.68(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.55(s,1h,h-12),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.90(s,2×3h,nch3),2.79(m,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc34h52no3:524.8180；found:524.8181.

实施例5

衍生物5：白色粉末，产率为60％；m.p.265-269℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.92(d,1h,j＝15.6hz,h-30),6.07(d,1h,j＝15.6hz,h-31),5.55(s,1h,h-12),4.62(d,2h,j＝24.9hz),3.14(m,2h,ch2ch3),2.77(d,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc34h54no3:524.8049；found:524.8050.

实施例6

衍生物6：白色粉末，产率为50％；m.p.278-281℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.82(d,1h,j＝15.7hz,h-30),5.77(d,1h,j＝15.5hz,h-31),5.59(s,1h,h-12),3.78(m,2h,ch2o),3.52(m,2h,nch2),3.23(m,1h,h-3),2.79(d,1h,j＝13.0hz,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc34h54no4:539.8048；found:539.8045.

实施例7

衍生物7：白色粉末，产率为60％；m.p.280-284℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),6.57(d,1h,nh),5.80(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.62(s,1h,h-17),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc35h56no4:553.8311；found:553.8315.

实施例8

衍生物8：白色粉末，产率为86％；m.p.254-257℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),5.68(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.61(s,1h,h-12),5.58(d,1h,nh),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.90(d,6h,j＝4.9hz,i-pr-ch),2.79(m,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc35h56no3:537.8321；found:537.8320.

实施例9

衍生物9：白色粉末，产率为76％；m.p.264-268℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),5.68(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.55(s,1h,h-12),3.94(s,1h,nh),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.90(d,6h,j＝4.9hz,h-33),2.9(d,3h,j＝4.9hz,h-34),2.79(m,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc35h56no3:537.8321；found:537.8325.

实施例10

衍生物10：白色粉末，产率为67％；m.p.243-246℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),5.68(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.55(s,1h,h-12),3.62(t,2h,ch2cl),3.50(m,2h,nch2),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.79(m,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc35h55clno3:573.2770；found:573.2773.

实施例11

衍生物11：白色粉末，产率为50％；m.p.287-291℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):7.33(m,2h,h-ar),7.23(m,3h,h-ar),6.80(d,1h,j＝15.8hz,h-30),5.65(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.57(s,1h,h-12),3.61(m,2h,h-n),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.88(t,2h,j＝7.1hz,nch2),2.80(d,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc40h58no3:600.4490；found:600.4495.

实施例12

衍生物12：白色粉末，产率为70％；m.p.281-285℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):8.26(s,1h,h-n),7.21-6,87(m,6h,h-ar,nh),6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),5.80(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.67(s,1h,h-12),4.13(dt,1h,j＝14.4,5.6hz,h-n),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.77(d,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc38h55n2o3:587.8624；found:587.8620.

实施例13

衍生物13：白色粉末，产率为78％；m.p.254-258℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.84(d,1h,j＝15.7hz,h-30),6.19(d,1h,j＝15.7hz,h-31),5.55(s,1h,h-12),3.64(m,4h,nch2),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.77(d,1h,h-18),2.43(m,4h,nch2),2.33(s,1h,h-9),2.33(s,3h,nch3),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28)；13c-nmr(75mhz,cdcl3),δ(ppm):200.2(c-11),169.8(c-13),165.5(c-32),152.9(c-30),128.3(c-12),118.3(c-31),78.7(c-3),61.8(c-9),54.9(c-5),47.4(c-18),45.9(2×nch2),45.4(c-8),43.3(c-14),43.0(c-20),39.1(c-4),39.1(c-1),37.7(c-10),37.1(c-19),36.7(c-21),33.8(c-22),33.5(nch3),32.7(c-7),32.3(2×nch2),31.1(c-17),28.5(c-28),28.1(c-23),27.3(c-2),26.4(c-16),26.3(c-15),26.3(c-29),23.5(c-27),18.7(c-26),17.4(c-6),16.3(c-25),15.5(c-24).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc37h59n2o3:579.8839；found:579.8836.

实施例14

衍生物14：白色粉末，产率为74％；m.p.257-262℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.84(d,1h,j＝15.7hz,h-30),6.19(d,1h,j＝15.7hz,h-31),5.55(s,1h,h-12),3.64(m,4h,nch2),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.77(d,1h,h-18),2.45(m,6h,ch2ch3,nch2),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28)；13c-nmr(75mhz,cdcl3),δ(ppm):200.2(c-11),169.8(c-13),165.5(c-32),152.9(c-30),128.3(c-12),118.3(c-31),78.7(c-3),61.8(c-9),54.9(c-5),47.4(c-18),45.9(2×nch2),45.4(c-8),43.3(c-14),43.0(c-20),39.1(c-4),39.1(c-1),37.7(c-10),37.1(c-19),36.7(c-21),33.8(c-22),33.5(ch2ch3),32.7(c-7),32.3(2×nch2),31.1(c-17),28.5(c-28),28.1(c-23),27.3(c-2),26.4(c-16),26.3(c-15),26.3(c-29),23.5(c-27),18.7(c-26),17.4(c-6),16.3(c-25),15.5(c-24),11.8(ch2ch3).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc38h61n2o3:593.9105；found:593.9103.

实施例15

衍生物15：白色粉末，产率为76％；m.p.265-268℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),6.57(d,1h,j＝7.4hz),5.80(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.62(s,1h,h-12),4.13-3.57(m,4h,2×ch2o),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.77(d,1h,h-18),2.34(s,1h,h-9),2.34(s,3h),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28).tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc36h56no4:566.8421；found:566.8423.

实施例16

衍生物16：白色粉末，产率为56％；m.p.272-276℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):6.89(d,1h,j＝4.9hz,nh),6.78(d,1h,j＝15.8hz,h-30),5.68(d,1h,j＝15.8hz,h-31),5.55(s,1h,h-12),3.73(m,4h,och2),3.43(m,4h,nch2),3.23(dd,1h,j＝10.0,6.0hz,h-3),2.78(d,1h,h-18),2.49(m,6h,nch2),2.34(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),1.13(s,3h,h-25),1.12(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.81(s,3h,h-24),0.80(s,3h,h-28)tof-hrms:m/z[m+h]+calcdforc39h63n2o4:623.9220；found:623.9223.

实施例17～18

衍生物17的制备(合成路线如图1所示)

将甘草烯酸(1.0mmol)加到二氯甲烷(20ml)中，加入相应的醇类(10当量)，搅拌十分钟，加入三氟化硼乙醚溶液(2.0mmol)，室温反应24小时；点板检测，待甘草烯酸反应结束后，停止反应；将反应液倒入冰水(50ml)中，待冰融化，分层，萃取，有机相用水洗涤两次，无水硫酸钠干燥；过滤减压浓缩，乙醇重结晶，得甘草烯酸衍生物17～18。

所述甘草烯酸的衍生物17～18的波谱分析如下所示：

实施例17

衍生物17：白色粉末，产率为50％；m.p.273-275℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):7.00(d,1h,j＝16.2hz,h-30),5.82(d,1h,j＝16.2hz,h-31),5.66(s,1h,h-12),4.25(m,2h,och2ch3),3.73(q,2h,j＝7.0hz),3.24(dd,1h,j＝9.8,6.5hz,h-3),2.80(d,1h,j＝13.5,h-18),2.36(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),2.38(s,1h,h-9),1.13(s,3h,h-25),1.11(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.80(s,3h,h-24),0.79(s,3h,h-28).

实施例17

衍生物18：白色粉末，产率为48％；m.p.279-281℃；1h-nmr(300mhz,cdcl3),δ(ppm):7.32-7.25(m,5h,ar),6.98(d,1h,j＝16.2hz,h-30),5.80(d,1h,j＝16.2hz,h-31),5.64(s,1h,h-12),4.76(s,2h,och2ph),3.73(q,2h,j＝7.0hz),3.24(dd,1h,j＝9.8,6.5hz,h-3),2.80(d,1h,j＝13.5,h-18),2.36(s,1h,h-9),1.38(s,3h,h-27),2.38(s,1h,h-9),1.13(s,3h,h-25),1.11(s,3h,h-26),1.00(s,3h,h-23),1.01(s,3h,h-29),0.80(s,3h,h-24),0.79(s,3h,h-28).

试验例1

甘草烯酸的衍生物2～18对no产生抑制活性检测：

no是一种重要的促炎介质。体内产生过多的no与炎症相关疾病有关。令大家广为接受的是，no抑制剂有潜在的可能和机会去寻找新的治疗炎症相关疾病的方法。为了评价甘草烯酸衍生物的抗炎作用，使用griess试剂检测raw264.7细胞中脂多糖(lps)诱导的no释放水平。将raw264.7细胞以1×105个细胞/孔接种在24孔板中并培养20小时；然后用50μm浓度的化合物预处理细胞，其在用lps(1μg/ml)刺激之前在无血清培养基中制备2小时；经lps刺激24小时后，通过说明书使用griess试剂(beyotime，china)检测亚硝酸盐水平来确定no产生的量；然后在微孔板读数器(mqx200，bio-tek，usa)中测量样品在540nm处的吸光度(od540)；no抑制率＝[对照(od540)-化合物(od540)]/[对照(od540)-空白(od540)]×100％；

本发明所述甘草烯酸的衍生物2～18的mao生物活性检测的结果如图3所示。

图例说明如下：

(1)^a每个数值从三实验平均±sem(n＝3)；

(2)与空白组相比，#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001；

(3)与lps刺激组相比*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。

本发明的试验例1的结果表明：

本发明提供的甘草烯酸的衍生物具有良好的抗炎活性；

甘草烯酸衍生物可抑制raw264.7细胞中脂多糖(lps)诱导的no释放水平；

本发明涉及的甘草烯酸衍生物2，3～7，13，14和16显著抑制了lps诱导的no释放增加；尤其是具有哌嗪取代基的化合物13和14显示出最强的抑制活性，并且在40μm的浓度下其对no释放的抑制率超过70％。

应用例1

以常规方式制备下列组成的制剂：

将实施例1～18中制备的甘草烯酸衍生物过120目筛，可压性淀粉过100目筛；称取处方量的可压性淀粉与原料按等量递增法混匀；羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮溶解在75％乙醇中配成溶液，取上述混粉，用羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液作润湿剂制软材，30目筛制粒，60℃干燥2～3小时，26目筛整粒；

取以上颗粒，加入处方量的硬脂酸镁，混匀，测定中间体含量，压片或灌装于胶囊，即可。

甘草烯酸衍生物还可以制成缓释片、滴丸、冲剂、注射剂等。其临床推荐剂量：30～100mg/天，口服，一日两次。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。