相关申请的交叉引用
本申请要求2016年12月9日在韩国知识产权局提交的韩国专利申请号10-2016-0117368的优先权，其所公开的全部内容通过引用并入本申请。
背景技术：
1.发明领域
本申请涉及具有增强的纤维素生产能力的葡糖醋杆菌属微生物，使用其生产纤维素的方法以及生产该微生物的方法。
2.相关技术说明
可以从微生物的培养物中获得纤维素。所生产的纤维素主要由β-1,4葡聚糖单元形式的葡萄糖组成。在更大规模上，纤维素分子形成原纤维束的网状结构。这种纤维素也被称为“生物纤维素或微生物纤维素”。
与植物纤维素不同，微生物纤维素是完全不含木质素或半纤维素的纯纤维素。微生物纤维素通常具有100nm或更低的宽度，其具有纤维素纳米纤维束的网状结构，并且与植物纤维素相比具有诸如吸水性和保留能力高、拉伸强度高、弹性高以及耐热性高的特征性性质。这使得其适用于包括化妆品、医疗产品、膳食纤维、音频扬声器隔膜、功能膜等在内的多个领域。
已报道醋杆菌属、农杆菌属、根瘤菌属和八叠球菌属是生产微生物纤维素的菌株。在需氧条件下进行静态培养时，在这些微生物的培养物表面上形成具有三维网状结构的纤维素薄膜。
尽管如此，存在对具有增强的纤维素生产能力的葡糖醋杆菌属重组微生物的需求。
发明概述
本发明的一个方面提供了一种具有增强的纤维素生产能力的葡糖醋杆菌属微生物。该重组微生物包含增加果糖-二磷酸醛缩酶(fba)活性的基因修饰。
本发明的另一个方面提供了一种使用该微生物生产纤维素的方法。该方法包括在培养基中培养具有增强的纤维素生产能力的葡糖醋杆菌属重组微生物和从该培养基中收集纤维素，其中该微生物包含增加果糖-二磷酸醛缩酶活性的基因修饰。
本发明还提供了一种生产具有增强的纤维素生产能力的重组微生物的方法，该方法包括将增加果糖-二磷酸醛缩酶(fba)活性的基因修饰引入葡糖醋杆菌属微生物。
发明详述
术语“亲本细胞”指在特定遗传修饰之前的状态下的细胞，例如作为生产具有增加或减少一种或多种蛋白活性的基因修饰的细胞初始材料的细胞。因此，亲本细胞是不具有特定所涉及的遗传修饰但是具有基因修饰细胞的其他基因型和表型性状的细胞。尽管“亲本细胞”不具有特定所涉及的遗传修饰，但是可以在其他方面对亲本细胞进行工程化改造，因此其可能不是“野生型”细胞(但是如果不存在其他修饰其也可能是野生型细胞)。因此，亲本细胞可以是作为生产具有无活性或活性降低的给定蛋白(例如与相对于果糖-二磷酸醛缩酶或其他蛋白具有约95％或更高的序列同一性的蛋白具有约95％或更高的序列同一性的蛋白)的经工程改造的微生物或具有活性增加的给定蛋白(例如与该蛋白具有约95％或更高的序列同一性的蛋白)的经工程改造的微生物的初始原料的细胞。作为进一步说明，针对其编码蛋白的基因已被修饰以降低基因活性的细胞，亲本细胞可以是包含未改变的“野生型”基因的微生物。同样的比较也适用于其他基因修饰。
如在本申请中所使用，术语“活性增加”或“增加的活性”指细胞、蛋白或酶活性可检测的增加，其包括经修饰(例如经基因工程改造)的细胞、蛋白或酶的活性高于相同类型的比较(例如亲本、野生型或对照)细胞、蛋白或酶，如不具有给定基因修饰的细胞、蛋白或酶(例如原始或“野生型”的细胞、蛋白或酶)。“细胞活性”指细胞的特定蛋白或酶的活性。例如，经修饰或工程改造的细胞、蛋白或酶的活性与相同类型的未经工程改造的细胞、蛋白或酶(即野生型细胞、蛋白或酶)的活性相比可能增加约5％或更高、约10％或更高、约15％或更高、约20％或更高、约30％或更高、约50％或更高、约60％或更高、约70％或更高或者约100％或更高。可以采用本领域公知的任何方法对具有增加的蛋白或酶活性的细胞进行鉴定。
可以通过增加其表达或特定活性增加酶或多肽的活性。可以通过将编码酶或多肽的外源性基因引入细胞，通过增加细胞中编码酶或多肽的基因的拷贝数或者通过在内源性多核苷酸的调控区中的突变(包括点突变和启动子交换)实现表达增加。接受外源性基因的微生物可能内源性地含有该基因的拷贝，或者在将其引入前可能不包含该基因。该基因可能与能够使其表达的调控序列可操作地连接，例如启动子、增强子、多聚腺苷酸化区或其组合(例如通过包含在适宜载体的表达盒中)。外源性基因指从外部引入细胞中的基因。所引入的外源性基因相对于宿主细胞可能是内源性的或异源性的。内源性基因指已经存在于微生物遗传物质中的基因(例如天然基因)。异源性基因是正常不存在于给定微生物的遗传物质中的基因(例如外源性或非天然的)。
通过引入外源性基因或通过扩增内源性基因，以及包括对细胞进行基因工程改造以使得该细胞具有在非基因工程改造的细胞中不存在的基因能够导致拷贝数增加(即引入外源性异源性基因，从而使拷贝数从0增加至1)。可以由媒介如载体介导基因的引入。引入可以导致基因未整合至基因组(例如瞬时或稳定的游离基因如质粒或人工染色体)或基因整合至基因组(例如通过同源从组)。例如可以通过将载体引入细胞，该载体包含编码目标多肽的多核苷酸，然后在细胞中复制载体或通过将多核苷酸整合至基因组进行引入。
基因的引入可以通过公知的方法进行，如转化、转染和电穿孔。基因可以通过媒介或通过自身引入。如在本申请中使用的，术语“媒介”指能够递送与其连接的其他核酸的核酸分子(例如载体、核酸构建体或表达盒)。载体的实例包括质粒载体、来源于病毒的载体等。质粒(例如质粒表达载体)是能够与其他dna连接的环形双链dna分子。病毒表达载体的实例包括复制缺陷逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒等。
如在本申请中所使用的，术语“基因”指表达特定蛋白的核酸片段，并且该片段可以包括或不包括一个或多个调控序列(例如5’-非编码序列和/或3’-非编码序列)。
如在本申请中所使用的，核酸或多肽的“序列同一性”指在进行序列比对后获得的序列的核苷酸或氨基酸残基之间的同一性程度以使得在某些可比较区域中为最佳匹配。序列同一性是通过对两条序列进行最佳比对对在某些可以比较区域中的两条序列进行比较获得的值，其中在某些可比较区域中的序列的部分与参照序列相比可以增加或缺失。可以通过例如在整个可比较区域中对两条最佳比对序列进行比较，确定相同氨基酸或核酸出现的位置数以获得匹配位置数，使用可比较区域中的匹配位置数除以位置总数(例如范围的尺寸)并将除得的结果乘以100以获得序列同一性百分率计算序列同一性百分率。可以使用公知的序列比较程序例如blastn(ncbi)、blastp(ncbi)、clc主要工作台(clcbio)、或megaligntm(dnastarinc)或者needleman-wunsch全局比对法(例如emboss针)确定序列同一性百分率。除非另有规定，选择用于操作该程序的参数如下：ktuple＝2、空位罚分＝4和空位长度罚分＝12。还可以人工进行序列同一性比较，其中明确确定最佳比对。
可以使用不同水平的序列同一性以鉴别具有相同或相似的功能或活性的不同类型的多肽或多核苷酸。例如，序列同一性可以包括约50％或更高、约55％或更高、约60％或更高、约65％或更高、约70％或更高、约75％或更高、约80％或更高、约85％或更高、约90％或更高、约95％或更高、约96％或更高、约97％或更高、约98％或更高、约99％或更高或者100％的序列同一性。
当多核苷酸序列编码给定蛋白时，由于遗传密码的简并性，其可以被其他多核苷酸取代。
如在本申请中所使用的，术语“基因修饰”包括在细胞遗传物质的构成或结构中的人工改变，其可以使用任意适宜的技术完成。
在本发明中，除非另有说明，％表示w/w％。
本发明的一个方面提供了一种具有增强的纤维素生产能力的葡糖醋杆菌属的重组微生物，该微生物包含增加果糖-二磷酸醛缩酶(fba)活性的基因修饰。
果糖-二磷酸醛缩酶(fba)催化反应：
果糖-二磷酸醛缩酶可以是与seqidno:1所示的氨基酸序列具有约
95％或更高的序列同一性的多肽。
在微生物中，基因修饰能够增加编码果糖-二磷酸醛缩酶的基因的表达。例如，基因修饰能够增加果糖-二磷酸醛缩酶基因(例如编码与seqidno:1所示的氨基酸序列具有约95％或更高的序列同一性的多肽的基因)的拷贝数。例如，该基因可以具有seqidno:2所示的核苷酸序列，或者与seqidno:2所示的序列具有至少85％、90％或95％的序列同一性的序列。
在一个方面，基因修饰可以通过例如媒介如载体引入编码果糖-二磷酸醛缩酶的基因。引入微生物中的果糖-二磷酸醛缩酶以及编码其的基因可以是内源性的或外源性的。编码果糖-二磷酸醛缩酶的基因一旦引入，其可以整合至宿主基因组内或仍独立于染色体(在其外部)。而且，基因修饰可以包括引入多个编码果糖-二磷酸醛缩酶的基因，例如2个或更多、5个或更多、10个或更多、50个或更多、100个或更多或者1000个或更多的基因，其可以是相同的(例如一个基因的多个拷贝)或不同的，只要其编码果糖二磷酸醛缩酶即可。
微生物可以是葡糖醋杆菌属,例如g.aggeris、g.asukensis、g.azotocaptans、g.diazotrophicus、g.entanii、g.europaeus、g.hansenii、g.intermedius、g.johannae、g.kakiaceti、g.kombuchae、g.liquefaciens、g.maltaceti、g.medellinensis、g.nataicola、g.oboediens、g.rhaeticus、g.sacchari、g.saccharivorans、g.sucrofermentans、g.swingsii、g.takamatsuzukensisg.tumulicola、g.tumulisoli或g.xylinus(也称为“komagataeibacterxylinus”)。
微生物还可以包括一种或多种选自下组的基因修饰：增加磷酸葡萄糖变位酶(pgm)活性的基因修饰，该酶催化葡萄糖-6-磷酸转化为葡萄糖-1-磷酸，增加utp-葡萄糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(upg)活性的基因修饰，该酶催化葡萄糖-1-磷酸转化为udp-葡萄糖以及增加纤维素合酶(cs)活性的基因修饰，该酶催化udp-葡萄糖转化为纤维素。基因修饰可以增加上述一种或多种基因的拷贝数。pgm可能属于ec2.7.7.9，以及ugp可能属于ec5.4.2.2或ec5.4.2.5。
具有pgm活性的多肽可以是例如与seqidno:4所示的氨基酸序列具有约95％或更高的序列同一性的多肽。类似地，具有upg活性的多肽可以是与seqidno:6所示的氨基酸序列具有约95％或更高的序列同一性的多肽，以及具有cs活性的多肽可以是与seqidno:19所示的氨基酸序列具有约95％或更高的序列同一性的多肽。
在一个实施方式中，微生物可以具有一种或多种选自下组的基因拷贝数增加：具有seqidno:3所示的核苷酸序列(或具有与seqidno:3所示的核苷酸序列具有至少85％、90％或95％的序列同一性的序列)的基因，具有seqidno:5所示的核苷酸序列(或具有与seqidno:5所示的核苷酸序列具有至少85％、90％或95％的序列同一性的序列)的基因以及具有seqidno:18所示的核苷酸序列(或具有与seqidno:18所示的核苷酸序列具有至少85％、90％或95％的序列同一性的序列)的基因。
本发明的另一个方面提供了一种生产纤维素的方法。该方法包括培养具有增强的纤维素生产能力的葡糖醋杆菌属的重组微生物。该微生物含有增加果糖-二磷酸醛缩酶活性的基因修饰。在培养基中培养该微生物以生产纤维素，以及从培养基中获得(分离或以其他方式收集)纤维素。
可以在含有适宜碳源(例如葡萄糖)的培养基中进行培养。用于培养微生物的培养基可以是适于宿主细胞生长的任意通用培养基，如含有适宜补充剂的最低或复合培养基。适宜的培养基可以是市售的或采用公知的制备方法制备的。
培养基可以是可以满足使用其的特定微生物的需求的培养基。培养基可以是包含选自下组的组分的培养基：碳源、氮源、盐、微量元素及其组合。培养基可以包括约0.5％至约3％(v/v)的乙醇，例如约0.5％至约2.5％(v/v)、约0.75％至约2.25％(v/v)或者约1/0％至约2.0％(v/v)。
可以对培养条件进行适当控制以生产纤维素。可以在有氧条件下进行培养以使得细胞增殖。可以通过静态培养而不是振荡进行培养。可以以较低的微生物密度进行培养。微生物的密度可以是提供足以不干扰纤维素分泌的细胞间隙的密度。
如在本申请中所使用的，术语“培养条件”指用于培养微生物的条件。此类培养条件可以包括例如被微生物所利用的碳源、氮源或氧气条件。可以被微生物利用的碳源可以包括单糖、二糖或多糖。碳源可以包括作为可同化糖的葡萄糖、果糖、甘露糖或半乳糖。氮源可以是有机氮化合物或无机氮化合物。氮源的例示可以为氨基酸、酰胺、胺、硝酸盐或铵盐。用于培养微生物的氧气条件可以是正常氧分压的有氧条件或者在大气中包含约0.1％至约10％氧气的低氧条件。可以根据微生物实际使用的碳源或氮源改进代谢途径。
该方法可以包括从培养物中分离和收集纤维素。可以通过例如收集在培养基表面上形成的纤维素膜实现分离。可以通过物理剥离纤维素膜或通过除去培养基收集纤维素膜。分离可以涉及收集纤维素膜，同时保持其形状不损坏。
本发明的又一个方面提供了一种生产具有增强的纤维素生产能力的微生物的方法。该方法包括将增加果糖二磷酸醛缩酶(fba)活性的基因修饰引入葡糖醋杆菌属微生物。基因修饰可以是针对本申请所述的任意重组微生物的。因此，例如，遗传修饰可以是例如将编码果糖二磷酸醛缩酶的外源性基因引入葡糖醋杆菌属微生物。该基因可以是异源性的或内源性的。可以通过将包含该基因的媒介引入微生物中实现引入编码果糖-二磷酸醛缩酶的基因。此外或作为替代，基因修饰可以包括扩增内源性基因、操纵基因的调控序列或者如通过插入、取代、转换或加入核苷酸操纵基因本身。
该方法还可以包括引入如本申请上文所描述的一种或多种选自下组的基因修饰：pgm活性的基因修饰，该酶催化葡萄糖-6-磷酸转化为葡萄糖-1-磷酸，增加upg活性的基因修饰，该酶催化葡萄糖-1-磷酸转化为udp-葡萄糖以及增加纤维素合酶活性的基因修饰，该酶催化udp-葡萄糖转化为纤维素。例如，基因修饰可以增加一种或多种选自下组的基因的拷贝数：编码具有pgm活性的多肽的基因，该多肽与seqidno:4所示的氨基酸序列具有约95％或更高的序列同一性，以及编码具有upg活性的多肽的基因，该多肽与seqidno:6所示的氨基酸序列具有约95％或更高的序列同一性。可以通过增加选自下组的一种或多种基因的拷贝数实现引入基因修饰：具有seqidno:3所示的核苷酸序列的基因和具有seqidno:5所示的核苷酸序列的基因。
具有增强的纤维素生产能力的葡糖醋杆菌属重组微生物可以用于有效地和/或高收率地生产纤维素。
现在将详细地提及实施方式。在这方面，本实施方式可以具有不同的形式，并且不应被解释为限于本申请所示的描述。如在本申请中所使用的，术语“和/或”包括一个或多个相关列出项目的任意和所有组合。
根据一个实施方式，一种生产具有增强的纤维素生产效率的重组微生物的方法包括进行上文所述的或在下述实施例中描述的基因修饰。
实施例1：制备包含果糖-二磷酸醛缩酶基因的k.xylinus和生产纤维素
在这个实施例中，使用外源性或内源性果糖-二磷酸醛缩酶(fba)基因转化k.xylinusdsm2325。培养所得到的微生物以生产纤维素，以考察基因的引入对纤维素生产能力的影响。
1.引入果糖-二磷酸醛缩酶基因
将具有seqidno:2所示的核苷酸序列的k.xylinusdsm2325gx_1979基因引入k.xylinusdsm2325m9菌株。进行的具体引入步骤如下：
(1)构建载体
使用ptsa-ex1载体(seqidno:11)作为模板和引物对f1-f(seqidno:7)和f1-r(seqidno:8)或者f2-f(seqidno:9)和f2-r(seqidno:10)进行pcr以获得分别为1.9kb或0.3kb的pcr产物。该pcr产物在载体的序列中具有点突变并且从其中除去了一个限制酶位点。使用in-fusiongd克隆试剂盒(takara)将该pcr产物克隆至ptsa-ex1载体的bamhi/sali限制性位点以制备ptsa-ex11载体。
接下来，通过对使用k.xylinusdsm2325m9菌株的基因组dna作为模板和引物对seqidno:12和seqidno:13的pcr产物进行凝胶提取获得果糖-二磷酸醛缩酶gx_1979基因的开放阅读框架(orf)。
使用in-fusiongd克隆试剂盒(takara)将该基因的orf克隆至ptsa-ex11载体的sali限制性位点以制备过表达载体ptsa-gx1979。
(2)转化
将k.xylinusdsm2325m9菌株涂布在含有补充了2％葡萄糖的hs-琼脂培养基的培养皿上，并且在30℃下培养3天。使用2ml无菌水冲洗经此培养的菌株，并收集菌落。将菌落转移至50mlfalcon管中，随后涡旋2分钟。含2％葡萄糖的hs-琼脂培养基包含0.5％蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.27％na2hpo4、0.15％柠檬酸、2％葡萄糖和1.5％细菌琼脂。此后，加入1％的纤维素酶(sigma，来自里氏木霉atcc26921的纤维素酶)并使其在30℃和160rpm下反应2小时。然后，使用含1mmhepes缓冲液的培养基洗涤菌落，随后使用15(w/w)％的甘油洗涤3次，接着在1ml15(w/w)％的甘油中重悬。
将100μl如此制备的感受态细胞转移至2-mm电选皿中，然后将3μgptsa-gx1979质粒加入其中，随后通过电穿孔(2.4kv,200ω,25μf)转化。将转化后的细胞重悬于1ml含2％葡萄糖的hs培养基中，然后转移至14-ml圆底管中，接下来在30℃和160rpm下孵育2小时。然后，将细胞涂布在含有补充了2％葡萄糖、1(v/v)％乙醇和5ug/ml四环素的hs-琼脂培养基的培养皿上，并且在30℃下培养5天。
(3)对葡萄糖消耗和纤维素生产情况的测试
将(2)中培养的菌株接种至含有25ml补充了5％葡萄糖、1％乙醇和5μg/ml四环素的hs培养基的250-ml烧瓶中，并且在30℃和230rpm下培养5天。结果，在培养基与空气接触的表面上形成了纤维素(以下也称为“纤维素纳米纤维(cnf)”)。收集如此生产的cnf膜，使用60℃下的0.1nnaoh和蒸馏水洗涤，然后冷冻干燥以除去h2o，接下来称重。
使用配有aminexhpx-87h柱(bio-rad,usa)的hplc对葡萄糖和葡糖酸盐进行分析。表1显示了引入fba基因的k.xylinus菌株的cnf的产量和收率、葡糖酸盐的收率以及葡萄糖的消耗量。
[表1]
在表1中，ptsa-ex1代表作为对照组的含有ptsa-ex1载体的k.xylinus菌株和ptsa-gx1979代表作为实验组的含有ptsa-gx1979载体的k.xylinus菌株。如表1中所示，与ptsa-ex1对照菌株相比，使用fbagx_1979基因转化的k.xylinus菌株(ptsa-gx1979)在cnf的产量方面显示出增加43.6％。在表1中，cnf的收率和葡糖酸盐的收率分别以cnf的克数/葡萄糖的克数和葡糖酸盐的克数/葡萄糖的克数表示。如在表1中所示，实验组和对照组显示出相似的cnf收率。与对照组相比，实验组在葡糖酸盐的收率方面显示出减少25％。而且，与对照组相比，实验组在葡萄糖的消耗方面显示出增加43.0％。葡萄糖的消耗以葡萄糖g/培养基1l表示。
实施例2：引入磷酸葡萄糖变位酶基因或utp-葡萄糖-1-磷酸尿苷酰转移酶基因
通过糖异生产生的葡萄糖-6-磷酸被磷酸葡萄糖变位酶(以下也称为“pgm”)和utp-葡萄糖-1-磷酸尿苷酰转移酶(以下也称为“ugp”)转化为utp-葡萄糖，其是纤维素合酶的底物。在这个实施例中，将来源于k.xylinusdsm2325m9菌株的pgm基因或ugp基因引入k.xylinus中，并且考察基因的引入对纤维素生产能力的影响。
(1)构建载体
通过对使用k.xylinusdsm2325m9菌株的基因组dna作为模板和引物对seqidno:14和15或seqidno:16和17的pcr产物进行凝胶提取获得pgmgx_1215基因(seqidno:3)和ugpgx_2556基因(seqidno:5)的开放阅读框架。使用in-fusiongd克隆试剂盒(takara)将所获得的各基因的orf克隆至ptsa-ex11载体的sali限制性位点以制备过表达载体。在下文中，将这些载体分别称为ptsa-gx1215载体和ptsa-gx2556载体。
(2)转化
将k.xylinusdsm2325m9菌株涂布在含有补充了2％葡萄糖的hs-琼脂培养基的培养皿上，并且在30℃下培养3天。使用2ml无菌水冲洗经此培养的菌株，并收集菌落。将菌落转移至50mlfalcon管中，随后涡旋2分钟。含2％葡萄糖的hs-琼脂培养基包含0.5％蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.27％na2hpo4、0.15％柠檬酸、2％葡萄糖和1.5％细菌琼脂。此后，加入1％的纤维素酶(sigma，来自里氏木霉atcc26921的纤维素酶)并使其在30℃和160rpm下反应2小时。然后，使用含1mmhepes缓冲液的培养基洗涤菌落，随后使用15(w/w)％的甘油洗涤3次，接着在1ml15(w/w)％的甘油中重悬。
将100μl如此制备的感受态细胞转移至2-mm电选皿中，然后将3μgptsa-gx1215或ptsa-gx2556质粒加入其中，随后通过电穿孔(2.4kv,200ω,25μf)转化。将转化后的细胞重悬于1ml含2％葡萄糖的hs培养基中，然后转移至14-ml圆底管中，接下来在30℃和160rpm下孵育2小时。然后，将细胞涂布在含有补充了2％葡萄糖、1(v/v)％乙醇和5ug/ml四环素的hs-琼脂培养基的培养皿上，并且在30℃下培养5天。
(3)对葡萄糖消耗以及纤维素和葡糖酸盐生产情况的测试
将(2)中培养的菌株接种至含有25ml补充了5％葡萄糖、1％乙醇和5μg/ml四环素的hs培养基的250-ml烧瓶中，并且在30℃和230rpm下培养5天。结果，在培养基与空气接触的表面上形成了纤维素(以下也称为“纤维素纳米纤维(cnf)”)。收集如此生产的cnf膜，使用60℃下的0.1nnaoh和蒸馏水洗涤，然后冷冻干燥以除去h2o，接下来称重。
使用hplc对葡萄糖和葡糖酸盐进行分析。表2显示了使用pgm基因或ugp基因转化的k.xylinus菌株的cnf的产量、葡糖酸盐的产量和葡萄糖的消耗量。
[表2]
在表4中，ptsa-ex1代表作为对照菌株的含有ptsa-ex1载体的k.xylinus菌株、ptsa-gx1215代表作为pgm转化的实验菌株的含有ptsa-gx1215的k.xylinus菌株以及ptsa-gx2556代表作为ugp转化的实验菌株的含有ptsa-gx2556载体的k.xylinus菌株。如表2中所示，与对照相比，引入pgm基因和ugp基因的菌株在cnf的产量方面分别显示出增加13.0％和30.4％。
应当理解，应将本申请所述的实施方式认为是仅具有描述性意义并且不是出于限制性目的。通常应将在每个实施方式中对特征或方面的描述认为是可供在其他实施方式中相似的特征或方面使用的。
尽管已经参照附图描述了一个或多个实施方式，但是本领域的普通技术人员应当理解在不脱离由下述权利要求所定义的主旨和范围的前提下，可以对其形式和细节进行各种改变。
除非本申请中另有说明或与上下文明显矛盾，应将在对本发明的内容(特别是在下述权利要求的内容中)进行的描述中使用术语“一个”和“一种”和“该”和“至少一个”以及类似指示物解释为包括单数和复数。除非本申请中另有说明或与上下文明显矛盾，应将使用术语“至少一个”后接一个或多个项目的列表(例如“a和b的至少一个”)解释为表示从所列的项目选择一个项目(a或b)或者两个或多个所列项目的任意组合(a和b)。除非另有说明，应将术语“包含”、“具有”、“包括”和“含有”解释为开放式术语(即表示“包括，但不限于”)。除非本申请另有说明，对本申请值范围的表述仅旨在用作对单独提及的落入该范围内的每个单独的值的简写方法，并且将每个单独的值并入说明书中，如同将其在本申请中单独列举一样。除非本申请中另有说明或与上下文明显矛盾，本申请所述的具有方法均可以以任意适宜的顺序进行。除非另有说明，本申请提供的任何和所有实施例或示例性语言(例如“如”)的使用仅旨在更好地阐明本发明并且不对本发明的范围构成限制。不应将说明书中的语言解释为表示对本发明的实施是必要的任何未被主张的要素。
本申请描述了本发明的优选实施方式，包括发明人已知的用于实施该发明的最佳模式。在阅读了前述说明书后，这些优选的实施方式对于本领域普通技术人员而言可能变得显而易见。本发明人期望本领域技术人员适当地使用这种变化，并且发明人旨在以不同于本申请具体描述的方式实施本发明。因此，本发明包括根据适用法律允许的所附权利要求中所述的主题的所有修改和等同物。而且，除非本申请中另有说明或与上下文明显矛盾，在所有可能的变化中的上述元件的任意组合均包含在本发明中。
<110>三星电子株式会社
<120>具有增强的纤维素生产能力的葡糖醋杆菌
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<170>kopatentin2.0
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