新型eEF2K抑制剂的制备及应用的制作方法

本发明涉及一种eef2k抑制剂及其应用，属于抗肿瘤药学技术领域。

背景技术：

癌症是影响健康的主要慢性疾病之一，在欧美等发达国家，癌症位居人类死因的第二位，在发展中国家居第二位或第三位。其中，乳腺癌已经占到女性恶性肿瘤发病率首位，和肺癌、结肠癌并称为世界三大癌症。目前，病理学家根据乳腺癌癌组织免疫组织化学检查结果的不同，即雌激素受体（er）、孕激素受体（pr）和人表皮生长因子受体-2（her-2）指标差异，将乳腺癌分为4种亚型，即luminala型、luminalb型、her-2阳性和三阴性乳腺癌。其中，三阴性乳腺癌因其生物学行为和临床病理特征特殊、预后差、侵袭性强、转移风险高、致死率高等特点，严重威胁着人类的生命健康。目前，还没有特有的针对三阴性乳腺癌的治疗指南，因此，开发针对三阴性乳腺癌的精准治疗策略，具有较高的学术价值和临床价值。

人类真核生物延伸因子（eukaryoticelongationfactor2,eef2）是结合翻译延长因子家族中的成员，它能促进gtp依赖的核糖体易位。其激酶（eef2k），又被称为“ca²⁺/cam-kinaseiii”，为非典型蛋白激酶小家族“alpha-激酶”成员，能够磷酸化eef2而使其失活，进而调节蛋白质的合成。近年研究发现，在肿瘤细胞缺乏营养和缺氧等条件下，eef2k的活性会增强，帮助肿瘤细胞抵抗不良环境。所以，eef2k作为一个潜在的抗癌药物靶点，已经越来越受到人们的关注。

研究表明，eef2k在包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤中呈现高表达，eef2k抑制剂的开发工作也取得了一些成果，如：ts-2是第一个被鉴定出具有eef2k抑制活性的小分子抑制剂；tx-1918作为一种非选择性eef2k抑制剂，除抑制eef2k外，还能抑制多种酪氨酸激酶。nh125因具有高eef2k抑制活性，广泛应用于eef2k体外抑制研究中……但大多数均不是eef2k靶向抑制剂，且不具有药物开发的潜力。同样，迄今为止，还没有用于治疗三阴性乳腺癌的eef2k抑制剂的相关开发工作。因此，针对于三阴性乳腺癌的新型eef2k靶向小分子抑制剂的开发，具有很广阔的研究前景。

技术实现要素：

本发明解决的技术问题是提供一种作为eef2k新型抑制剂的新化合物。

本发明提供如下所示的化合物或其药学上可接受的盐：

式ⅰ

其中，r1为h；

r2为、、、、、、、、、、、、、；

作为本发明的一个优选方案，r1为4-t-tbutyl；

r2为、、、、、、、、、、；

进一步优选r1为2-f；

r2为、、、、、、、；

更优选r1为2,4-dichloro；

r2为、、、、、、、、、、、、。

本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。

进一步的，所述抗肿瘤药物优选为新型eef2k抑制剂剂类药物。

所述抗肿瘤药物优选为治疗三阴性乳腺癌的药物。

本发明制备的化合物或其药学上可接受的盐，可以作为eef2k抑制剂，具有一定的抗肿瘤活性，能有效的抑制癌细胞的生长。本发明化合物对多种肿瘤细胞，特别是三阴性乳腺癌细胞具有明显的抑制作用。

图表说明

表1为上述化合物的eef2k酶活性检测及其抗增殖活性测试结果。

。

图1a为mda-mb-231和mda-mb-436细胞用11l处理，相差显微镜对细胞形态进行观察分析图。

图1b为mda-mb-231和mda-mb-436细胞用11l处理，hoechst33258染色检测凋亡的发生图。

图1c为mda-mb-231和mda-mb-436细胞用11l处理，化合物作用时间-凋亡程度变化量化图。

图1d为mda-mb-231和mda-mb-436细胞用11l处理，rhodamine123染色检测线粒体膜电位变化图。

图1e为mda-mb-231和mda-mb-436细胞用11l处理，化合物时间-线粒体膜电位变化量化图。

图1f为mda-mb-231和mda-mb-436细胞用11l处理，检测细胞内凋亡相关蛋白表达量变化图。

图2a为进行化合物11l不同剂量给药后，mda-mb-231和mda-mb-436细胞异种移植鼠模型的相对体积变化图，数据为肿瘤体积均值±sem（n=6）。

图2b为进行化合物11l不同剂量给药后，mda-mb-231和mda-mb-436细胞异种移植鼠模型的相对瘤重图，*,p<0.05;***,p<0.001，与对照组相比。

图2c为化合物11l治疗期间不同组的小鼠体重，**,p<0.01，与对照组相比。

图2d为细胞增殖标记物ki-67和凋亡标记物tunel的免疫组化分析图（scalebar=200μm）。

图2e为lc3-ii，pro-caspase-3和p-eef2k（ser398）的免疫组化分析图（scalebar=200μm）。

图2f为图2d、2e中蛋白免疫组化分析结果量化图。

图2g检测离体组织中eef2k，p-eef2k(ser398)，lc3，beclin-1，p62，parp和caspase3蛋白的表达水平。

具体实施方式

本发明提供如下所示的化合物或其药学上可接受的盐。

式ⅰ。

其中，r1为h；

r2为、、、、、、、、、、、、、。

作为本发明的一个优选方案，r1为4-t-tbutyl；

r2为、、、、、、、、、、。

进一步优选r1为2-f；

r2为、、、、、、、。

更优选r1为2,4-dichloro；

r2为、、、、、、、、、、、、。

下面是本发明的化合物的一些优选结构。

本发明还提供上述化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的用途。

进一步的，所述抗肿瘤药物优选为eef2k抑制剂类药物。

所述抗肿瘤药物优选为治疗三阴性乳腺癌的药物。

本发明还提供一种药物组合物，它是包含有效剂量的上述化合物或其药学上可接受的盐的制剂。

可以通过本领域已知的方法可将本发明化合物制成以下形式：片剂、胶囊剂、水性或油性溶液剂、混悬剂、乳剂、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、喷鼻剂、栓剂、用于吸入的细小分散的粉剂或气雾剂或喷雾剂、用于胃肠道外(包括静脉内、肌内或输注)的无菌水性或油性溶液或混悬剂或无菌乳剂。可采用无菌水或水-丙二醇溶液作为溶剂来制备液体制剂，还可将活性组分配制在聚乙二醇水溶液中。用于口服给予的水性溶液可通过将活性组分溶解在水中并按需要加入合适的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂来制备。口服使用的水性混悬剂可通过将细小分散的活性组分与粘性物质一道分散在水中，所述粘性物质如为天然合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素和其他药剂领域已知的悬浮剂。

药物组合物可为单位剂量形式。在这些形式中，将所述组合物分成含适量活性组分的单位剂量。该单位剂量形式可为包装制剂，包装中包括分隔量的制剂，例如盒装片剂、胶囊剂和在管形瓶或安瓿中的粉剂。单位剂量形式还可为胶囊剂、扁囊剂或片剂或其可为适当数量的任何这些包装形式。

本发明的药物组合物，其活性成分可仅为本发明的化合物，也可与其它抗肿瘤化合物组合作为活性成分。

在治疗肿瘤的过程中，可采用本发明的药物组合物与其他抗肿瘤药进行联合治疗。例如，与用于医学肿瘤学的抗增殖/抗肿瘤药、细胞生长抑制剂、抗入侵药物、生长因子功能抑制剂、抗血管生成剂、血管损伤剂等联用。

在治疗肿瘤时，可通过同时、序贯或单独给予各种治疗成分可实现这种联合治疗。此类组合产品应用有效剂量范围内的本发明化合物和准许剂量范围内的其他药学活性剂。

下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

实施例1优选化合物的合成

优选化合物采用如下反应式合成。

(i)c2h5oh,reflux,7h;(ii)hcl/methanol,r.t.;(iii)ch2cl2,diea,0℃;(iv)naoh/h2o,r.t。

1.中间体2a-d的合成通法。

取丙二酸（1.04g，10mmol），甲酸铵（1.26g，20mmol）溶于乙醇（50ml）中，加至芳香醛（10mmol）中。混合物回流7h。反应混合物冷却至室温即得粗产物。经重结晶（95%乙醇）进一步纯化，得到中间体2a-2d。

氨基-3-苯丙酸（2a）:

白色固体，收率82%。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.37(1h,s),7.57(1h,s),7.43(4h,m),5.10(2h,s)3.65(1h,m),2.81(2h,m)。

3-氨基-3-（4-叔丁基苯基）丙酸（2b）:

白色固体，收率79%。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.30(1h,s),7.09(2h,d,j=8.3hz),6.99(2h,d,j=8.3hz),5.10(2h,s),3.69(1h,m),2.57(2h,m),1.19(9h,s)。

氨基-3-（2-氟苯基）丙酸（2c）:

白色固体，收率76%。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.39(1h,s),7.50(2h,m),7.31(1h,m),7.18(1h,m),5.13(2h,s),3.68(1h,m),2.74(2h,m)。

氨基-3-（2,4-二氯苯基）丙酸（2d）:

白色固体，收率85%。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.54(1h,m),9.11(1h,d,j=7.7hz),7.67(1h,dd,j=7.6,1.7hz),7.61(1h,d,j=2.0hz),5.10(2h,s),3.64(1h,m),2.77(2h,m)。

2.中间体3a-d的合成通法。

分别取中间体2a-d（10mmol）溶于30ml甲醇中，加入3滴浓硫酸。混合物室温搅动7h。反应混合物减压浓缩并用乙酸乙酯（50ml）稀释。后用饱和碳酸氢钠溶液冲洗，减压去除溶液，经硅胶柱纯化，得中间体3a-d。

氨基-3-苯丙酸甲酯（3a）：

白色晶体，收率80%。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):7.30(1h,s),7.25(4h,m),5.10(2h,s),3.68(3h,s),3.33(1h,m),2.87(2h,m)。

氨基-3-4叔丁基苯丙酸甲酯（3b）：

白色固体，收率78%。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):7.28(2h,m),7.15(2h,m),4.59(1h,m),3.68(3h,s),3.49(1h,m),3.34(2h,m),2.84(1h,m),1.30(9h,s)。

氨基-3-（2-氟苯基）丙酸甲酯（3c）：

白色固体，收率85%。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):7.40(1h,m),7.28(1h,m),7.13(2h,m),4.58(1h,m),3.68(3h,s),3.55(1h,m),3.34(2h,m),2.90(1h,m)。

氨基-3-2,4-二氯苯丙酸甲酯（3d）3d：

白色固体，收率95%。¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):7.70(1h,d,j=2.1hz),7.36(1h,dd,j=8.4,2.1hz),7.23(1h,d,j=8.4hz),4.62(1h,m),3.64(3h,m),3.60(1h,m),3.46(1h,m),2.84(1h,m)。

3.化合物8a-11m合成通法。

取中间体3（10mmol）和15mmol三乙胺溶于20ml二氯甲烷中，逐滴加入适量酰氯或磺酰氯（1.05eq）的二氯甲烷（3ml）溶液，室温过夜。混合物用饱和碳酸氢钠溶液冲洗，减压去除溶剂，粗产物用硅胶柱纯化，得到中间产物4a-n，5a-k，6a-h，7a-m。然后，上述中间体（2mmol）溶于甲醇/水（75%，10ml）中，加入氢氧化锂（2.4mmol）。产物60℃加热4h。冷却至室温，减压去除甲醇。产物用水稀释，盐酸（1mol/l）酸化至ph=3。过滤得到白色固体，水洗三次，干燥，即得目标产物。

氟苯甲酰胺-3-苯丙酸（8a）:

白色固体，收率76%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.27(1h,s),8.91(1h,d,j=8.1hz),7.92(2h,m),7.40(2h,m),7.30(4h,m),7.23(1h,m),5.42(1h,m),2.88(1h,m),2.78(1h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):172.3,165.0,143.2,130.5,131.3,130.4,128.8,128.8,127.5,127.0,127.0,120.0,115.8,115.5,50.6,41.2;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z288.1036,发现288.1039。

甲氧基苯甲酰胺-3-苯丙酸（8b）:

白色固体，收率85%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.37(1h,s),8.98(1h,d,j=8.0hz),7.72(1h,d,j=7.7hz),7.45(1h,ddd,j=8.1,7.6,1.8hz),7.38(2h,m),7.32(2h,dd,j=7.7,7.3hz),7.22(1h,m),7.13(1h,d,j=8.2hz),7.02(1h,dd,j=7.5,7.4hz),5.41(1h,m),3.89(3h,s),2.83(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):172.7,164.6,157.6,142.8,132.9,130.9,128.7,128.7,127.4,126.9,126.9,123.2,121.0,112.6,56.4,50.0,41.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z300.1236,发现300.1232。

溴苯甲酰胺-3-苯丙酸（8c）：

白色固体，收率80%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.32(1h,s),9.03(1h,d,j=8.1hz),8.05(1h,s),7.85(1h,d,j=7.8hz),7.74(1h,d,j=7.8hz),7.46(1h,m),7.41(2h,m),7.34(1h,dd,j=7.7,7.4hz),7.25(1h,m),5.43(1h,m),2.85(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):172.3,164.5,143.0,127.0,134.5,131.1,130.3,128.8,128.8,127.5,127.0,127.0,122.1,50.7,41.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z348.0235,发现348.0235。

二氯苯甲酰胺-3-苯丙酸（8d）：

白色固体，收率82%,whitesolid,yield82%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.31(1h,s),9.22(1h,d,j=8.2hz),7.48(2h,m),7.41(3h,m),7.33(2h,t,j=7.4hz),7.25(1h,t,j=7.4hz),5.41(1h,dd,j=15.6,7.6hz),2.74(2h,d,j=7.5hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.9,163.1,142.1,136.9,131.7,131.7,131.4,128.7,128.7,128.5,128.5,127.6,127.2,127.2,50.4,41.4;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z338.0351,发现338.0352。

二氯苯甲酰胺-3-苯丙酸（8e）:

白色固体，收率87%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.37(1h,s),9.10(1h,d,j=8.4hz),7.73(1h,d,j=2.0hz),7.57(1h,dd,j=8.2,2.0hz),7.43(5h,m),7.32(1h,m),5.42(1h,m),2.81(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):172.1,165.0,142.5,136.1,135.0,131.7,130.7,129.6,128.8,128.8,127.8,127.6,127.0,127.0,50.5,41.3;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z338.0351,发现338.0355。

苯基-3-苯磺酰胺基丙酸（8f）：

白色固体，收率79%,whitesolid,yield79%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.31(1h,s),8.37(1h,d,j=8.8hz),7.56(2h,m),7.47(1h,m),7.36(2h,m),7.11(5h,m),4.65(1h,m),2.59(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.5,141.8,141.0,132.3,129.1,129.1,128.5,128.5,127.6,127.1,127.1,126.7,126.7,55.1,42.7;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z306.0800,发现478.306.0806。

叔丁基苯磺酰胺-3-苯丙酸（8g）：

白色固体，收率82%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.27(1h,s),8.25(1h,d,j=9.0hz),7.41(2h,dt,j=8.6,1.9hz),7.30(2h,dt,j=8.6,1.9hz),7.03(5h,brs),4.61(1h,dd,j=16.6,7.6hz),2.62(1h,m),2.55(1h,m),1.22(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.5,155.1,140.6,138.7,128.4,128.4,127.4,127.1,127.1,126.6,126.6,125.8,125.8,55.2,42.8,35.1,31.2,31.2,31.2;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z362.1426,发现362.1423。

氟苯磺酰胺-3-苯丙酸（8h）：

白色固体，收率88%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.30(1h,s),8.41(1h,s),7.56(2h,dd,j=5.4,5.3hz),7.14(7h,m),4.63(1h,brs),2.61(1h,m),2.52(1h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.5,164.2,140.8,138.2,129.8,129.7,128.5,128.5,127.6,127.1,127.1,116.2,116.0,55.2,42.7;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z324.0706,发现324.0710。

溴苯基磺酰胺-3-苯丙酸（8i）：

白色固体，收率80%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.27(1h,s),8.48(1h,d,j=8.6hz),7.85(1h,dd,j=7.7,1.9hz),7.59(1h,dd,j=7.5,1.5hz),7.38(2h,m),7.13(5h,m),4.61(1h,m),2.69(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.5,140.8,140.1,135.3,134.0,131.2,128.3,128.3,128.2,127.6,127.0,127.0,119.8,55.0,42.2;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z383.9905,发现383.9904。

二氟苯磺酰胺-3-苯丙酸（8j）：

白色固体，收率93%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.42(1h,s),8.74(1h,s),7.43(1h,m),7.19(5h,m),7.15(2h,m),4.74(1h,m),2.70(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.4,163.4,160.9,145.1,140.3,128.4,128.4,127.8,127.2,127.2,110.6,110.4,107.9,55.5,42.5;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z342.0612,发现342.0605。

苯腈磺酰胺-3-苯丙酸（8k）：

白色固体，收率86%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.32(1h,s),8.71(1h,d,j=7.3hz),7.80(2h,d,j=8.5hz),7.64(2h,d,j=8.5hz),7.10(5h,m),4.66(1h,m),2.62(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.4,145.8,140.5,133.2,133.2,128.5,128.5,127.6,127.5,127.5,127.1,127.1,118.2,114.6,55.4,42.6;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z331.0753,发现331.0752。

苯-3-（4-三氟甲苯磺酰胺）丙酸（8l）：

白色固体，收率91%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.32(1h,s),8.65(1h,d,j=8.8hz),7.66(4h,m),7.05(5h,m),4.67(1h,dd,j=15.3,7.7hz),2.67(1h,m),2.58(1h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.4,145.5,140.3,132.0,131.9,128.5,128.5,127.7,127.7,127.5,127.1,126.0,125.3,122.6,55.4,42,6;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z374.0674,发现374.0670。

（3-硝基苯磺酰胺）-3-苯丙酸（8m）：

白色固体，收率84%，¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.34(1h,s),8.76(1h,d,j=8.7hz),8.24(1h,brd,j=8.2hz),8.06(1h,dd,j=1.9,1.8hz),7.93(1h,brd,j=7.8hz),7.64(1h,dd,j=8.1,8.0hz),7.04(5h,m),4.69(1h,m),2.64(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.4,147.6,143.3,140.0,132.7,131.1,128.5,128.5,127.5,127.1,127.1,126.8,121.8,55.6,42.5;hrms(esi)+calculatedfor[m+h]⁺:m/z351.0651,发现351.0650。

苯-3-（4-三氟甲氧基苯磺酰胺基）丙酸（8n）：

白色固体，收率87%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.33(1h,s),8.54(1h,d,j=8.9hz),7.58(1h,d,j=8.8hz),7.27(1h,d,j=8.8hz),7.56(2h,m),7.06(5h,m),4.66(1h,m),2.59(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.4,150.7,140.7,140.4,129.2,129.2,128.4,128.4,127.5,127.1,127.1,121.4,121.4,118.9,55.4,42.7;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z390.0623,发现390.0629。

（4-叔丁基苯基）-3-（4-副苯甲酰胺基）丙酸（9a）：

白色固体，收率82%，¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.25(1h,s),8.88(1h,d,j=8.3hz),7.92(2h,td,j=5.5,2.1hz),7.31(6h,m),5.40(1h,m),2.88(1h,dd,j=15.7,8.8hz),2.76(1h,dd,j=15.7,6.3hz),1.25(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.8,164.3,162.6,149.2,139.6,130.8,129.9,129.8,126.2,126.2,125.0,125.0,115.2,115.0,49.7,40.5,34.1,31.1,31.1,31.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z344.1662,发现344.1662。

（4-叔丁基苯基）3-（2-甲氧基苯甲酰胺）丙酸（9b）：

白色固体，收率85%，¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.50(1h,s),9.00(1h,d,j=8.2hz),7.74(1h,dd,j=7.7,1.7hz),7.47(1h,m),7.33(4h,dd,j=15.8,8.5hz),7.16(1h,d,j=8.2hz),7.03(1h,td,j=7.9,0.5hz),5.40(1h,dd,j=14.5,6.3hz),3.91(3h,s),2.81(2h,m),1.25(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):172.3,163.9,157.1,149.0,139.3,132.3,130.4,126.0,126.0,124.9,124.9,122.7,120.5,112.1,55.8,49.2,40.6,34.1,31.1,31.1,31.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z356.1862,发现356.1863。

（4-叔丁基苯基）-3-（4-甲氧基苯甲酰氨基）丙酸（9c）：

白色固体，收率78%.¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.23(1h,s),8.69(1h,d,j=8.2hz),7.84(2h,d,j=9.0hz),7.32(4h,s),7.00(2h,d,j=8.8hz),5.41(1h,dd,j=14.7,8.5hz),3.80(3h,s),2.88(1h,dd,j=15.6,8.8hz),2.76(1h,dd,j=15.6,6.3hz),1.25(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.9,164.8,161.5,149.1,139.9,129.1,129.1,126.6,126.2,126.2,124.9,124.9,113.3,113.3,55.3,49.6,40.6,34.1,31.1,31.1,31.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z356.1862,发现356.1864。

（4叔丁基苯基）-3-（4-（三氟甲基）苯甲酰胺基）丙酸（9d）：

白色固体，收率85%.¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.31(1h,s),8.64(1h,d,j=9.1hz),7.60(4h,s),7.03(2h,d,j=8.2hz),6.96(2h,d,j=8.2hz),4.66(1h,dd,j=15.6,8.2hz),2.68(1h,dd,j=15.4,8.3hz),2.57(1h,dd,j=15.2,6.9hz),1.14(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.0,149.5,145.1,136.6,131.4,131.1,127.1,127.1,126.3,126.3,125.5,125.4,124.5,124.5,122.0,54.7,42.1,33.9,30.8,30.8,30.8;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z394.1630,发现394.1627。

（4-叔丁基苯基）-3-（2-率苯甲酰胺）丙酸（9e）:

白色固体，收率80%.¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.29(1h,s),9.16(1h,d,j=8.3hz),7.48(2h,m),7.41(1h,m),7.35(4h,m),5.39(1h,dd,j=15.5,7.6hz),2.73(2h,d,j=7.4hz),1.27(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.4,162.6,149.3,138.5,136.4,131.2,131.2,130.9,128.0,128.0,126.3,126.3,124.9,124.9,49.5,40.8,34.1,31.1,31.1,31.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z360.1366,发现360.1366。

（4-叔丁基苯基）-3-（2,4-二氯苯甲酰胺基）丙酸（9f）

白色固体，收率83%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.29(1h,s),9.00(1h,d,j=8.4hz),7.67(1h,d,j=2.0hz),7.51(1h,dd,j=8.2,2.0hz),7.37(3h,t,j=8.0hz),7.32(2h,d,j=8.3hz),5.35(1h,dd,j=15.5,7.7hz),2.74(2h,m),1.26(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.6,164.4,149.3,138.9,135.6,134.4,131.2,130.2,129.1,127.2,126.1,126.1,125.0,125.0,49.5,40.8,34.1,31.1,31.1,31.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z394.0977,发现394.0978。

（4-叔丁基苯基）-3-苯磺酰胺基丙酸（9g）：

白色固体，收率85%.¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.30(1h,s),8.30(1h,s),7.50(2h,m),7.41(1h,m),7.30(2h,t,j=7.8hz),7.09(2h,d,j=8.3hz),6.99(2h,d,j=8.3hz),4.59(1h,t,j=7.1hz),2.57(2h,m),1.19(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.6,149.8,141.8,137.7,132.2,129.0,129.0,126.8,126.8,126.7,126.7,125.2,125.2,54.9,42.5,34.5,31.5,31.5,31.5;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z362.1426,发现362.1425。

（4-叔丁基苯基）-3-（4-氟苯基苯磺酰胺基）丙酸（9h）：

白色固体，收率74%.¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.28(1h,s),8.36(1h,d,j=9.0hz),7.46(2h,m),7.04(4h,m),6.96(2h,d,j=8.3hz),4.60(1h,dd,j=16.0,8.0hz),2.66(1h,dd,j=15.6,8.0hz),2.56(1h,dd,j=15.6,7.2hz),1.18(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.6,164.2,145.0,138.0,137.3,129.7,126.9,126.9,126.9,125.1,125.1,116.0,115.8,55.1,42.6,34.5,31.5,31.5,31.5;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z380.1332,380.1331。

（4-叔丁基苯基）-3-（4-三氟甲基苯基）磺酰胺基丙酸（9i）：

白色固体，收率81%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.27(1h,s),9.10(1h,d,j=8.1hz),8.04(2h,d,j=8.1hz),7.86(2h,d,j=8.1hz),7.34(4h,d,j=1.0hz),5.42(1h,m),2.90(1h,dd,j=15.8,8.8hz),2.78(1h,dd,j=15.5,6.0hz),1.25(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.8,164.2,149.3,139.4,138.1,131.2,128.2,128.2,126.2,126.2,125.3,125.2,125.0,125.0,49.8,40.5,34.1,31.1,31.1,31.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z430.1300,发现430.13004。

（4-叔丁基苯基）-3-（2-甲氧基苯基）磺酰胺基丙酸（9j）：

白色固体，收率82%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.19(1h,s),7.73(1h,d,j=10.0hz),7.54(1h,dd,j=7.7,1.6hz),7.33(1h,td,j=8.6,1.7hz),7.02(2h,d,j=2h),6.93(2h,d,j=8.2hz),6.86(1h,t,j=7.3hz),6.73(1h,d,j=8.2hz),4.52(1h,dd,j=17.2,7.5hz),3.65(3h,s),2.76(1h,dd,j=15.4,7.2hz),2.61(1h,dd,j=15.4,7.8hz),1.17(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.2,155.6,149.0,136.9,133.8,128.9,127.9,126.1,126.1,124.1,124.1,119.3,111.7,55.3,54.4,41.6,33.9,31.0,31.0,31.0;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z392.1532,发现392.1531。

（4-叔丁基苯基）-（4-三氟甲氧基苯基）磺酰胺基丙酸（9k）：

白色固体，收率88%.¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.30(1h,s),8.49(1h,d,j=8.8hz),7.55(2h,d,j=8.8hz),7.23(2h,d,j=8.3hz),7.06(2h,d,j=8.3hz),6.97(2h,d,j=8.3hz),4.64(1h,m),2.61(2h,m),1.17(9h,s);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.5,150.6,150.0,140.7,137.3,129.3,129.3,126.8,126.8,125.1,125.1,120.8,120.8,120.3,55.1,42.6,34.4,31.4,31.4,31.4;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z446.1249,发现446.1250。

（4-氟苯甲酰胺基）-3-（2-氟苯基）丙酸（10a）：

白色固体，收率82%.¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.34(1h,s),8.95(1h,d,j=7.8hz),7.93(2h,m),7.48(1h,t,j=7.8hz),7.31(3h,m),7.16(2h,m),5.68(1h,m),2.90(1h,dd,j=15.9,9.3hz),2.74(1h,dd,j=15.9,5.4hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):172.0,165.1,162.2,131.1,130.5,130.5,129.9,129.8,129.5,128.6,129.5,124.9,115.8,115.7,115.7,44.8,44.8;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z356.0910,发现356.0911。

（3-溴苯甲酰胺）-3-（2-氟苯基）丙酸（10b）：

白色固体，收率80%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.37(1h,s),9.06(1h,d,j=7.6hz),8.04(1h,t,j=1.7hz),7.84(1h,dt,j=8.0,1.3hz),7.75(1h,dd,j=7.9,1.0hz),7.48(2h,m),7.31(1h,m),7.18(2h,m),5.67(1h,m),2.90(1h,dd,j=15.6,9.3hz),2.75(1h,dd,j=16.0,5.5hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):172.0,164.7,159.8,136.7,134.6,131.1,130.3,129.7,129.6,128.5,127.1,125.0,122.1,115.9,115.7,44.9;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z366.0141,发现366.0137。

（2-氟苯基）3-（4-三氟甲基苯基）磺酰胺基丙酸（10c）：

白色固体，收率80%，¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.38(1h,m),9.18(1h,d,j=7.8hz),8.05(2h,d,j=8.2hz),7.87(2h,d,j=8.2hz),7.49(1h,m),7.30(1h,m),7.17(2h,m),5.69(1h,m),2.92(1h,dd,j=15.9,9.3hz),2.76(1h,dd,j=15.9,5.4hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.9,165.0,161.2,158.7,138.4,131.7,129.6,128.7,128.7,128.5,125.8,125.0,115.9,115.7,44.9,44.9;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z392.0580,发现392.0582。

（2,4-二氯苯甲酰胺）-3-（2-氟苯基）丙酸（10d）：

白色固体，收率87%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.39(1h,s),9.11(1h,d,j=7.9hz),7.68(1h,d,j=1.8hz),7.50(2h,m),7.37(1h,d,j=8.3hz),7.31(1h,m),7.18(2h,m),5.63(1h,dd,j=14.6,7.5hz),2.74(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.8,165.2,159.8,135.9,135.1,131.7,130.7,129.6,129.2,128.6,127.8,124.9,115.9,115.7,56.5,44.7;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z356.0257,发现356.0260。

（2-氟苯基）-3-苯磺酰胺基丙酸（10e）：

白色固体，收率81%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.32(1h,s),8.43(1h,d,j=8.8hz),7.53(2h,d,j=7.9hz),7.44(1h,m),7.34(2h,m),7.24(1h,m),7.13(1h,m),6.91(2h,m),4.98(1h,dd,j=15.3,7.6hz),2.63(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.2,159.3,141.3,132.5,129.7,129.1,129.1,128.7,127.7,126.6,126.6,124.6,115.4,48.1,41.6;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z478.0604,发现324.0706324.0702。

（4-苯腈磺酰胺基）-3-（2-氟苯基）丙酸（10f）：

白色固体，收率84%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.39(1h,m),8.80(1h,m),7.83(2h,d,j=7.6hz),7.66(2h,d,j=8.0hz),7.18(2h,m),6.93(2h,m),4.97(1h,t,j=7.0hz),2.66(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.2,159.3,145.4,133.3,133.3,130.0,128.8,127.3,127.3124.8,118.2,115.5,114.8,56.6,48.3,41.3;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z349.0658,发现349.06581。

（2-氟苯基）-3-（4-三氟甲基苯磺酰胺基）丙酸（10g）：

白色固体,收率75%，¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.38(1h,s),8.72(1h,d,j=8.8hz),7.69(4h,s),7.19(1h,td,j=7.6,1.4hz),7.08(1h,m),6.88(2h,m),4.99(1h,dd,j=15.3,7.9hz),2.71(1h,dd,j=15.4,9.3hz),2.61(1h,dd,j=15.4,6.5hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):160.5,158.0,145.0,132.2,129.7,128.7,127.6,127.6,127.2,126.3,126.2,124.7,123.9,115.4,48.2,41.3;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z392.0580,发现392.0585。

（3,5-二氟苯基磺酰胺基）-3-（2-氟苯基）丙酸（10h）：

白色固体,收率80%，¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.41(1h,s),8.75(1h,d,j=8.5hz),7.40(1h,m),7.25(1h,m),7.14(3h,m),6.97(2h,m),4.99(1h,m),2.72(1h,dd,j=15.8,8.5hz),2.66(1h,dd,j=15.8,6.6hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.2,171.2,166.7,159.5,144.7,130.0,128.8,127.0,124.7,115.4,110.3,110.3,108.1,48.4,41.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z360.0517,发现360.0515。

（2,4-二氯苯基）-3-（4-氟苯甲酰胺基）丙酸（11a）：

白色固体,收率91%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.42(1h,s),9.02(1h,d,j=7.5hz),7.93(2h,dd,j=8.6,5.9hz),7.60(1h,s),7.54(1h,d,j=8.6hz),7.44(1h,dd,j=8.3,2.0hz),7.32(2h,t,j=8.7hz),5.69(1h,m),2.82(1h,m),2.69(1h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.9,165.2,139.7,133.5,133.1,132.8,131.0,130.5,130.5,129.5,129.1,128.1,115.8,115.6,47.9,47.9;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z356.0257,发现356.0258。

（3-溴苯甲酰胺基）-3-（2,4-二氯苯基）丙酸（11b）：

白色固体,收率86%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.45(1h,s),9.12(1h,d,j=7.4hz),8.05(1h,s),7.85(1h,d,j=7.9hz),7.76(1h,d,j=7.9hz),7.61(1h,m),7.54(1h,d,j=8.3hz),7.45(1h,d,j=8.3hz),7.43(1h,m),5.70(1h,m),2.82(1h,dd,j=16.2,4.2hz),2.67(1h,dd,j=16.2,4.2hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.8,164.8,139.5,136.6,134.7,133.1,132.9,131.2,130.3,129.5,129.2,128.2,127.1,122.1,48.0,39.3;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z415.9456,发现415.9454。

（2,4-二氯苯基）-3-（4-甲氧基苯甲酰氨基）丙酸（11c）：

白色固体,收率82%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.39(1h,s),8.83(1h,d,j=7.4hz),7.85(2h,d,j=8.9hz),7.54(2h,m),7.43(1h,dd,j=8.3,2.0hz),7.01(2h,dt,j=8.9,1.8hz),5.71(1h,m),3.80(3h,s),2.82(1h,dd,j=16.2,10.2hz),2.67(1h,dd,j=16.2,4.2hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.9,165.7,162.2,140.1,133.1,132.7,131.8,129.7,129.7,129.5,129.2,128.1,126.7,114.0,114.0,55.9,47.8;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z368.0456,发现368.0453。

（2-甲氧基苯甲酰氨基）-3-苯丙酸（11d）：

白色固体,收率82%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.54(1h,m),9.11(1h,d,j=7.7hz),7.67(1h,dd,j=7.6,1.7hz),7.61(1h,d,j=2.0hz),7.48(3h,m),7.17(1h,d,j=8.1hz),7.03(1h,t,j=7.6hz),5.64(1h,m),3.92(3h,s),2.77(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):172.2,164.8,157.6,139.3,132.9,132.9,130.8,129.8,129.2,128.0,121.0,112.6,55.5,55.4,47.6,19.0,19.0;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z300.1236,发现300.1234。

（2-氟苯基）-3-（4-三氟甲基苯磺酰胺基）丙酸（11e）：

白色固体,收率88%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.45(1h,s),9.25(1h,d,j=7.4hz),8.04(2h,d,j=8.1hz),7.88(2h,d,j=8.1hz),7.60(1h,d,j=2.1hz),7.56(1h,d,j=8.4hz),7.43(1h,dd,j=8.4,2.1hz),5.71(1h,m),2.84(1h,m),2.71(1h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.8,165.1,139.5,138.1,133.2,132.9,132.0,131.7,129.5,129.3,128.7,128.7,128.2,125.9,125.8,123.0,48.0;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z406.0225,发现406.0225。

（2-氟苯基）-3-（4-三氟甲基苯磺酰胺基）丙酸（10g）：

白色固体,收率75%，¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.38(1h,s),8.72(1h,d,j=8.8hz),7.69(4h,s),7.19(1h,td,j=7.6,1.4hz),7.08(1h,m),6.88(2h,m),4.99(1h,dd,j=15.3,7.9hz),2.71(1h,dd,j=15.4,9.3hz),2.61(1h,dd,j=15.4,6.5hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):160.5,158.0,145.0,132.2,129.7,128.7,127.6,127.6,127.2,126.3,126.2,124.7,123.9,115.4,48.2,41.3;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z392.0580,发现392.0585。

（2,6-二氯苯甲酰胺基）-3-（2,4-二氯苯基）丙酸（11f）：

白色固体,收率80%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.45(1h,s),9.40(1h,d,j=7.8hz),7.63(1h,d,j=2.1hz),7.57(1h,d,j=8.4hz),7.48(4h,m),5.70(1h,m),2.64(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.4,165.8,163.4,138.8,136.5,133.1,131.8,131.8,131.6,131.0,129.9,129.3,128.5,127.9,47.5,41.5;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z405.9571,发现405.9568。

（2，4-二氯苯甲酰胺基）-3-（2,4-二氯苯基）丙酸（11g）：

白色固体,收率87%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.47(1h,s),9.19(1h,d,j=7.6hz),7.69(1h,m),7.62(1h,m),7.52(2h,m),7.46(1h,m),7.40(1h,d,j=8.1hz),5.66(1h,dd,j=14.0,6.7hz),2.68(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.6,165.2,139.0,135.7,135.2,133.1,133.0,131.7,130.6,129.7,129.6,129.3,128.1,127.8,47.6,47.6;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z405.9571,发现405.9570。

（2，4-二氯苯基）-3-（苯磺酰胺基）丙酸（11h）：

白色固体,收率84%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.40(1h,s),8.55(1h,d,j=8.6hz),7.51(3h,m),7.35(4h,m),7.14(1h,dd,j=8.5,1.9hz),5.14(1h,dd,j=15.5,7.4hz),2.55(2h,d,j=7.4hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.1,141.2,137.5,132.9,132.8,132.5,130.0,129.1,129.1,128.7,127.7,126.7,126.7,51.0,41.4;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z374.0021,发现374.0027。

（2-溴苯基磺酰胺基）-3-（2,4-二氯苯基）丙酸（11i）：

白色固体,收率90%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.37(1h,s),8.70(1h,d,j=8.9hz),7.87(1h,dd,j=7.2,2.2hz),7.61(1h,m),7.56(1h,d,j=8.0hz),7.39(2h,m),7.30(2h,m),5.10(1h,m),2.74(1h,dd,j=15.8,8.7hz),2.57(1h,dd,j=15.8,8.7hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.1,139.6,137.9,135.3,134.1,132.9,132.6,131.1,130.0,128.6,128.2,127.8,119.9,50.7,41.0;hrms(esi)+calculatedforc15h12brcl2no4s,[m+h]⁺:m/z451.9126,found451.9126。

（2，4-二氯苯基）-3-（3-硝基苯磺酰胺基）丙酸（11j）：

白色固体,收率84%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.45(1h,s),8.95(1h,d,j=6.9hz),8.33(1h,dt,j=8.2,1.1hz),8.13(1h,t,j=1.8hz),7.96(1h,dt,j=8.1,1.3hz),7.70(1h,t,j=7.7hz),7.32(1h,m),7.27(1h,d,j=8.5hz),7.14(1h,d,j=8.5hz),5.15(1h,brs),2.60(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.0,147.7,142.8,137.0,133.1,133.0,132.8,131.4,130.0,128.8,127.9,127.0,121.6,51,2,41.0;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z418.9871,发现418.9876。

（2，4-二氯苯基）-3-（4-三氟甲基苯磺酰胺基）丙酸（11k）：

白色固体,收率84%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.46(1h,s),8.83(1h,d,j=8.6hz),7.70(4h,m),7.33(1h,m),7.23(1h,d,j=8.1hz),7.07(1h,m),5.15(1h,dd,j=14.6,8.2hz),2.57(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.0,145.0,137.0,133.1,132.8,132.5,132.2,130.0,128.7,127.8,127.6,127.6,126.3,126.3,51.1,41.2;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z441.9894,发现441.9897。

（4-苯腈磺酰胺基）-3-（2,4-二氯苯基）丙酸（11l）：

白色固体,收率81%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.44(1h,s),8.88(1h,s),7.86(2h,m),7.65(2h,m),7.37(1h,m),7.28(1h,m),7.14(1h,m),5.12(1h,t,j=6.6hz),2.56(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.0,145.3,137.2,133.3,133.3,133.1,132.8,130.0,128.9,128.0,127.5,127.5,118.1,114.9,51.1,41.1;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z398.9973,发现398.9978。

（2，4-二氯苯基）-3-（3,5-二氟苯基磺酰胺基）丙酸（11m）：

白色固体,收率87%,¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.49(1h,s),8.87(1h,d,j=7.6hz),7.46(2h,m),7.31(1h,d,j=8.3hz),7.26(1h,d,j=8.3hz),7.12(2h,m),5.14(1h,dd,j=13.6,7.1hz),2.61(2h,m);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):171.0,162.4,144.6,144.5,137.1,133.3,133.0,130.0,128.8,127.9,110.6,110.3,108.2,51.1,41.0;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z409.9832,发现409.9833。

（2-氟苯基）-3-（4-三氟甲基苯磺酰胺基）丙酸（10g）：

白色固体,收率75%，¹h-nmr(400mhz,dmso-d6),δ(ppm):12.38(1h,s),8.72(1h,d,j=8.8hz),7.69(4h,s),7.19(1h,td,j=7.6,1.4hz),7.08(1h,m),6.88(2h,m),4.99(1h,dd,j=15.3,7.9hz),2.71(1h,dd,j=15.4,9.3hz),2.61(1h,dd,j=15.4,6.5hz);¹³c-nmr(100mhz,dmso-d6),δ(ppm):160.5,158.0,145.0,132.2,129.7,128.7,127.6,127.6,127.2,126.3,126.2,124.7,123.9,115.4,48.2,41.3;hrms(esi)+[m+h]⁺:m/z392.0580,发现392.0585。

试验例1化合物1～32对多种肿瘤细胞的抗增值试验。

采用多种肿瘤细胞（包括mda-mb-231,mda-mb-436细胞系）的抗增值活性试验，其结果见表1。用优选化合物处理mda-mb-231,mda-mb-436细胞，测定了对不同肿瘤细胞的半数抑制浓度。

从表1中可以明显看出，该系列化合物对多种肿瘤细胞具有显著的较强的抗增殖活性。

试验例2化合物1～32的激酶抑制活性。

本实验的目的是检测本发明的化合物对体外eef2k酶抑制活性，结果见表1。

实验结果表明，优选化合物对eef2k具有较强的抑制活性，其中最优化合物11l的抑制作用最强。

试验例3化合物11l的体外抗肿瘤机制研究。

本实验的目的是研究本发明的化合物的抗肿瘤机制。

首先，我们观察了化合物11l处理细胞后，细胞的形态学变化（图1a），检测了化合物11l诱导tnbc细胞死亡是否与凋亡相关。化合物11l处理细胞后，利用hoechst33258染色测定了三阴性乳腺癌细胞dna破损程度（图1b）。结果表明细胞发生了显著的凋亡，并且凋亡率呈现显著的时间依赖(图1c)。同时，我们也评价发现化合物11l诱导了显著的ki-67的下调（图2d)。综上结果显示化合物11l诱导三阴性乳腺癌细胞细胞发生了凋亡。

进一步，我们检测了在化合物11l处理的乳腺癌细胞中up-regulatedbax,decreasedtheexpressionofbcl-2,andincreasedthecleavageofcaspase-3,caspase-8andparp表达情况。结果bax，剪切caspase-3，caspase-8，parp的剪切的表达量发生了显著的上调，bcl-2的表达量发生下调(图1f)。为了验证化合物11l诱导的凋亡是否是通过靶向eef2k，我们发,荧光点基本消失了(图2e)，紧接着我们检测了pro-caspase-3，p-eef2k(ser398)，lc3和p62的表达。综上结果表明化合物11l诱导凋亡是通过靶向eef2k实现的。值得注意到的是，现有的eef2k抑制剂大多为非特异性抑制剂，且目前尚无针对三阴性乳腺癌的eef2k靶向小分子抑制剂。而化合物11l是通过靶向抑制eef2k诱导三阴性乳腺癌发生细胞凋亡。这为三阴性乳腺癌的治疗提供了一个全新思路。

试验例4化合物lyn-1604的体内抗肿瘤实验。

本实验的目的是检测发明化合物的体内抗肿瘤效果。本实验采用模型，测试发明化合物lyn-1604的体内抗肿瘤活性。所用细胞株为mda-mb-231。

1.实验方法。

将培养好的mda-mb-231细胞经消化胰酶消化后，再用pbs液清洗2次，然后用1%台盼兰染色，于细胞记数板上进行细胞记数，并调节活细胞浓度至5×10⁷/ml，在无菌条件下施行裸鼠右侧胸壁第二乳垫，脂肪层下接种0.2ml/只，共接种3只，术后荷瘤裸鼠继续饲养于spf环境中，待肿瘤长至100cm³时，行裸鼠间原位移植。在无菌条件下取出乳腺癌组织，剪切成1mm³左右的小块，分别移植于24只裸鼠右侧胸壁的第二乳垫脂肪层下，4d后即可见肿瘤生长，成瘤率100%。裸鼠分组（n＝6）并注射给药。对照组注射pbs（即control组），实验组分别注射低剂量的化合物11l，用量为25mg/kg/d，中剂量的化合物11l，用量为50mg/kg/d，高剂量的化合物11l，用量为100mg/kg/d。

肿瘤生长曲线：从第一次注射开始每隔2天，观察一次荷瘤裸鼠的全身情况及各组肿瘤生长情况，在无菌的条件下测量各组荷瘤裸鼠移植瘤的直径，并连续观察纪录。以时间为横坐标，肿瘤的体积为纵坐标，肿瘤体积计算公式为：v=1/2*ab2，a为肿瘤长径，b为短径，并据此绘制移植瘤生长曲线。

抑瘤率：注射药物14天后，脱颈处死各组裸鼠，用动物天平称取裸鼠体重，在分离各组瘤体，称取瘤重，计算抑瘤率。

观察指标：每3天观测一次裸鼠，观察有无腹泻，抽搐，皮疹，体重明显减轻等反应。

2实验数据。

实验测定的生长曲线如图2a～图5c。其中，图2a为小鼠肿瘤相对体积(n=6)注射pbs,化合物11l，低剂量(25mg/kg/d)，中剂量(50mg/kg/d)，高剂量100mg/kg/d**,p<0.01。图2b为小鼠相对瘤重，注射pbs,化合物11l，低剂量(25mg/kg/d)，中剂量(50mg/kg/d)，高剂量100mg/kg/d*,p<0.05;***,p<0.001与对照组相比。图2c为治疗期间的小鼠体重，**,p<0.01；与对照组相比。图5d为不同组小鼠的肝、脾、肾指数，*,p<0.05;**,p<0.01;与对照组相比。图2e为p-eef2k(ser398)的免疫组化分析（scalebar=200μm）。图2f为5g为肿瘤离体组织的eef2k，p-eef2k(ser398)，lc3，beclin-1，p62，parp和caspase3的蛋白印迹图。

实验结果表明，化合物11l对mda-mb-231细胞具有明显的体内生长抑制活性，在每天50mg／kg及以上剂量下，可以明显抑制肿瘤生长或完全消退肿瘤。给药过程中未发现裸鼠出现体重降低、皮疹、腹泻等不良反应，表明在测试剂量下，化合物11l在给药剂量范围内毒性低。