本发明涉及药物化学领域，具体涉及新型四价铂配合物及其制备方法和其在抗癌、抗肿瘤中的应用。
背景技术：
自从1967年人们发现顺铂有抗癌活性以来，铂金属抗癌药物的应用和研究得到了迅速的发展，现在已形成以第一代顺铂、第二代卡铂和第三代奥沙利铂为主导的二价铂类癌症临床用药。目前，二价铂类抗癌药物已经成为临床癌症治疗不可或缺的化疗药物。然而，二价铂化合物具有稳定性差、生物利用度低、不能口服、毒副作用强(如肾毒性、耳毒性、神经毒性等)、水溶性较差、交差耐药性严重以及无法口服用药等共性的缺陷，这严重影响着其临床疗效以及应用。因此，发展新型铂类抗肿瘤药物，改善原有药物固有缺陷，以使铂类药物更好的服务于癌症临床治疗已经成为医药及化学工作者们面临的重大议题。
近年来，四价铂类抗癌药物以其毒性小、生物利用度高、可口服等特点引起了药学领域的广泛关注。尽管已有大量的工作对四价铂进行修饰，但将天然化合物与四价铂化合物结合的工作相对较少。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明首次将五倍子酸引入四价铂母核，设计合成了新型五倍子酸修饰的四价铂类化合物，考察了其抗癌、抗肿瘤能力。这为解决传统二价铂类药物存在的缺陷提供新候选药物分子，也为四价铂类化合物的开辟新的领域。该药物的研发对国民经济及人民健康等都具有重要的价值和实际意义。
为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：
一种抗肿瘤铂类配合物，其具有以下结构：
其中，l1、l2分别为下述官能团中的一种
式i中
r3为c1-c15的烷基，优选为甲基、戊基、庚基。
优选结构为：
式ii中
所述的四价铂化合物用于抗癌，尤其是对于子宫颈癌、乳腺癌、肺腺癌、肝癌、前列腺癌等。
所述的铂化合物对顺铂耐药性细胞有抑制活性。
相对于现有技术，本发明创造所述的具有抗癌活性的四价铂类化合物具有以下优势：
本发明首次将五倍子酸引入四价铂母核，设计合成了一系列新型四价铂类化合物，考察其抗癌、抗肿瘤能力，发现该类铂配合物不仅具有较高的抗肿瘤活性，而且表现出一定的选择性，以及对耐药性细胞的抑制活性。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的代表性实施例进行详细的描述，而不局限于此。
实施例1羟基奥沙利铂(iv)的制备
向烧瓶中加入奥沙利铂3.0g，蒸馏水70ml，搅拌使之分散，向反应体系中缓慢滴加浓度为30％的双氧水130ml，升高温度至65℃搅拌反应3h。停止反应，冷却条件下放置析晶12小时，过滤分离得到黄色固体，加入适量水，加热使之溶清，冷却静置析晶12小时，过滤得白色晶体(2.5g)。
实施例2羧酸基取代的单羟基奥沙利铂(iv)的制备
向圆底烧瓶中加入实施例1制备的化合物1.6g，己酸酐0.79g，氮气保护条件下加入70ml无水dmso，于35℃条件下搅拌反应4天，减压蒸除dmso，加入丙酮，析出白色固体粉末，抽滤，用丙酮洗涤3遍，得到白色固体产物(1.5g)。
实施例3目标产物合成
向烧瓶中加入实施例2制备的四价铂中间体0.01mol，以及全苄基保护的五倍子酰氯0.02mol，氮气保护并加入无水丙酮，室温搅拌12～36小时，停止反应。浓缩除去丙酮，经柱层析得到产物。再将该产物溶于适量无水二氯甲烷，于-78℃条件下搅拌15分钟，向反应溶液中缓慢滴加1m的三氯化硼/二氯甲烷溶液，继续搅拌反应2h，停止反应，减压蒸除溶剂，残留固体用石油醚洗涤三遍，经柱层析分离得到目标产物，记为化合物1。
产物为浅黄色固体；1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ9.19(s,2h),8.85(s,1h),7.04(s,2h),5.23-5.71(m,4h),2.35(d,2h),2.26(t,2h),1.18-1.71(m,14h),0.92(t,3h)；esi-ms:c21h30n2o11ptm/z[m+na]+＝704。
实施例4
按照上述实施例2-3的方法，选择不同碳链长度的羧酸酐：辛酸酐、乙酸酐，得到相应的铂配合物，分别记为化合物2和3。
实施例5：抗肿瘤活性测试
试验方法：采用mtt法测定待测试样品对细胞生长的半抑制浓度(ic50)值，衡量配合物的抗癌活性。选用的癌细胞株为：人子宫颈癌细胞(hela)，人乳腺癌细胞(mcf-7)，人肺腺癌细胞(a549)，以及对顺铂耐药性的人肺腺癌细胞(a549/ddp)。用含10％胎牛血清的rpmi1640(gibico公司)培养基，在5％(体积分数)co2、37℃饱和湿度培养箱内进行体外培养。
测试过程：将体外培养的细胞悬浮液加入96孔板中，培养一段时间以细胞充分贴壁；将实施例3-4制备的目标产物按照一定浓度梯度(1μm～100μm)稀释，然后加入上述有细胞的96孔板中，每个浓度设3个平行孔；在培养72h后的孔板中，每孔加mtt40μl(用d-hanks缓冲液配成4mg/ml)；在37℃放置4h后，移去上层清液，每孔加150μldmso，振荡5min，使结晶充分溶解；最后，利用自动酶标仪在570nm波长处检测各孔的光密度。
实验同时设置对照组(只加培养液和细胞，不加测试样品)和空白组(只加培养药，不加细胞和测试样品)。
试验结果如下表：
表1化合物1-3的抗肿瘤活性数据(ic50值/μm)
由表1的数据可以看出，本发明制备的铂配合物具有一定的抗肿瘤活性，尤其是化合物3，通过化合物1-3的对比也可以看出羧酸酯部分的烷基链长度对整个化合物的抗癌活性有一定影响，对mcf-7细胞体现出一定的选择性。最重要的是，该类配合物对顺铂耐药性细胞a549/ddp也体现出很好的效果。