本发明涉及通式i的新型吲哚酮类化合物以及生理上可接受的盐，这些化合物在肿瘤治疗中的用途，以及含有所述化合物的药物组合物。
背景技术
吲哚酮结构是抗肿瘤药物研究中的优势骨架之一，近年来受到药物化学家的密切关注。
具有单吲哚酮优势骨架的化合物广泛存在于抗肿瘤药物和合成小分子中，目前，已有十余种单吲哚酮类化合物作为抗肿瘤药物处于临床前研究、临床研究和已上市阶段。其中，sunitinib在2006年已经上市，主要用于临床治疗恶性间质瘤或转移性肾细胞癌。toceranibphosphate在2009年获得批准成功上市，用于肿瘤的治疗。
靛玉红(indirubin)及其衍生物是具有双吲哚酮优势骨架的代表性化合物，天然产物靛玉红、异靛红等都具有良好的抗肿瘤活性。其中，靛玉红是传统中药当归龙荟丸中抗肿瘤的有效成分，在临床上被用于抗慢性粒细胞型白血病的治疗；其衍生物靛玉红-3'-肟(indirubin-3'-oxime，im)具有较靛玉红更高的抗肿瘤活性，被证明是多种激酶(cdks、proteinkinasec、caseinkinase1、gsk-3等)的有效抑制剂，还具有抗hiv、抗血管生成等活性。然而，该类化合物由于包含大的共轭基团，其溶解性差和生物利用度低。
本发明巧妙地将双吲哚酮结构中一个五元杂环剖裂，破坏大的共轭体系，同时又保留了单吲哚酮的优势骨架，设计合成了一系列结构简单而新颖的具有抗肿瘤作用的新型吲哚酮类化合物。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种式i所示的新型吲哚酮类化合物。
本发明的另一目的在于提供式i所示的新型吲哚酮类化合物、活性中间体及其类似物的制备方法。
本发明的又一目的在于提供式i所示的化合物在肿瘤治疗中的用途。
为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
本发明是涉及具有通式i的新型化合物及生理上可接受的盐：
其中，r1选自氢、硝基、卤素、氨基或-nhcor3；
r2选自-cor4或-nhr4，
r3选自取代或未取代的苯基、取代或未取代的吡咯、n-甲基哌啶或c1-c4烷基；
r4选自取代或未取代的苯基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的吲哚基、取代或未取代的吡咯基、取代或未取代的噻吩基、取代或未取代的吡嗪基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的咪唑并哒嗪基；
所述取代基选自1个或多个羟基、甲氧基、卤素、咪唑基、环己基、n-甲基哌嗪、含有1～3个杂原子的五元环烷基、含有1～3个杂原子的六元环烷基或含有1～3个杂原子的七元环烷基。
优选的r1为硝基、氢、卤素、-nhcor3，
优选的r3为苯基、1个或多个卤素取代的苯基、1个或多个甲氧基取代的苯基、吡咯、n-甲基哌啶、c1-c4烷基；
优选的r4为取代或未取代的苯基、取代或未取代的噻吩、吲哚、吡咯、咪唑并哒嗪，优选的取代基为1个或多个羟基或卤素、环己基、n-甲基哌嗪、1,3-间二氧杂环。
优选的式i化合物，包括但不限定于，通式ia所示的化合物及其立体异构体和生理上可接受的盐：
其中，r1选自氢、硝基、卤素；
r4选自取代的苯基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的吲哚基、取代或未取代的吡咯基、取代的噻吩基、取代或未取代的吡嗪基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的咪唑并哒嗪基；
其中，r4为取代的苯基时，所述取代基选自1个或多个羟基、咪唑基、环己基、1,3-间二氧杂环；r4为所述其他基团时，所述取代基选自1个或多个卤素。
优选的式i化合物，包括但不限定于，通式ib所示的化合物及其立体异构体和生理上可接受的盐：
其中，r3选自苯基、1个或多个卤素取代的苯基、1个或多个甲氧基取代的苯基、吡咯、n-甲基哌啶、c1-c4烷基；
r4选自n-甲基哌嗪取代的苯基、嘧啶基。
本发明还公开了制备式i化合物的重要活性中间体，包括但不限定于，通式ii所示的化合物及其立体异构体和生理上可接受的盐：
其中，r1选自氢、硝基、卤素；
r4选自取代的苯基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的吲哚基、取代或未取代的吡咯基、取代的噻吩基、取代或未取代的吡嗪基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的咪唑并哒嗪基；
其中，r4为取代的苯基时，所述取代基选自1个或多个羟基、咪唑基、环己基、1,3-间二氧杂环；r4为所述其他基团时，所述取代基选自1个或多个卤素。
最优选的化合物选自下列群组：
本发明还公开了制备本发明化合物的方法，包括以下步骤：
式iii化合物与式iv化合物反应生成式ii重要中间体，后者在脱水生成的式ia化合物：
其中，r1选自氢、硝基、卤素；
r4选自取代的苯基、取代或未取代的噻唑基、取代或未取代的呋喃基、取代或未取代的吲哚基、取代或未取代的吡咯基、取代的噻吩基、取代或未取代的吡嗪基、取代或未取代的嘧啶基、取代或未取代的咪唑并哒嗪基；
其中，r4为取代的苯基时，所述取代基选自1个或多个羟基、咪唑基、环己基、1,3-间二氧杂环；r4为所述其他基团时，所述取代基选自1个或多个卤素。
以5-硝基吲哚-2-酮为原料生成n-乙酰基烯醚中间体v，再与芳胺反应得到烯胺化合物vi，分别经水解、还原反应获得化合物vii、化合物viii，再与不同羧酸经缩合反应得到式ib化合物：
其中，r3选自苯基、1个或多个卤素取代的苯基、1个或多个甲氧基取代的苯基、吡咯、n-甲基哌啶、c1-c4烷基；
r4选自n-甲基哌嗪取代的苯基、嘧啶基。
根据本发明，本发明化合物可以异构体的形式存在，而且通常所述的“本发明化合物”包括该化合物的异构体。
本发明化合物可存在双键的顺反异构体，本发明包括所有可能的立体异构体以及两种或多种异构体的混合物。如果存在顺/反异构体，本发明涉及顺式形式和反式形式以及这些形式的混合物，如果需要单一异构体可根据常规方法分离。
本发明再一方面还涉及以本发明化合物作为活性成份的药物组合物。该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。
还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。
为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、ph调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；ph调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.01-150mg/kg体重，优选为0.1-100mg/kg体重，更优选为1-60mg/kg体重，最优选为2-30mg/kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。
本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。
药理学研究表明，本发明的通式i化合物对多种肿瘤细胞具有抑制作用，因此，可以用于治疗恶性肿瘤。
具体实施方式
以下结合实施例对发明作进一步的说明，但这些实施例并不限制本发明的范围。
核磁共振仪为varianmercury-300型，mercuryplus-400型，内标为tms，化学位移(δ)以百万分之一(ppm)给出。质谱仪为exactiveplustmlc/msdorbitrap串联质谱仪(thermofisherscientific)。熔点用fisherscientific显微熔点仪测定，温度计未校正。柱层析分离用硅胶h或粗硅胶(200-300目)，薄层层析用硅胶gf254，均为青岛海洋化工厂产品。实验所用试剂为化学纯或分析纯，购买后未经进一步处理，直接使用。所用溶剂均为分析纯，其中四氢呋喃、吡啶均为无水溶剂；二甲基亚砜和n,n-二甲基甲酰胺经分子筛干燥，直接使用。其它溶剂未特别指出则未经处理。
通式化合物ii的制备：
将5-氟靛红(165mg,1mmol)、3-乙酰基吲哚(160mg,1mmol)依次加入到8ml无水乙醇中，搅拌均匀后，加入二乙胺(1mmol)，室温搅拌过夜。待反应完全后，停止反应，减压蒸除溶剂得到红褐色油状液体，向油状液体中加入100ml无水乙醚，室温搅拌，有淡黄色固体析出，滤出固体，用少量无水乙醇洗涤2次，烘干，得到实施例1，白色固体，246mg，产率为76％。按照类似合成方法制备实施例2。
实施例1：
白色固体，产率76％，m.p.206-208℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.97(s,1h),10.23(s,1h),8.39(s,1h),7.98(d,j＝7.8hz,1h),7.44(d,j＝8.1hz,1h),7.25–7.07(m,3h),6.97(td,j＝9.6,2.7hz,1h),6.77(dd,j＝8.4,4.2hz,1h),6.15(s,1h),3.90(d,j＝16.2hz,1h),3.44(d,j＝16.2hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝325.0979[m+h]+,calculatedforc18h14fn2o3:325.0983.
实施例2：
白色固体，产率75％，m.p.195-179℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.30(s,1h),7.56(s,1h),7.20(dd,j＝8.4,2.7hz,1h),7.00(m,1h),6.78(dd,j＝8.4,4.5hz,1h),6.21(s,1h),3.91(d,j＝17.7hz,1h),3.50(d,j＝17.7hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝359.9647[m+h]+,calculatedforc14h9cl2fno3s:359.9659.
通式化合物ia的制备：
将实施例1化合物(200mg,0.62mmol)加入到5ml无水乙醇中，搅拌均匀，加入浓盐酸2ml，60℃下搅拌2小时。反应液由淡黄色逐渐变为橙红色，tlc监测反应完全后，停止反应。反应液冷却至室温后，用饱和na2co3溶液中和至ph为中性，有大量固体析出，将固体过滤，洗涤2-3次，干燥得实施例3，橙黄色粉末状产物160mg，产率为84％。按照类似合成方法制备实施例4～15。
通式化合物iaa的理化数据
实施例3：
橙黄色粉末，产率84％，m.p.275-277℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.30(s,1h),10.75(s,1h),8.62(d,j＝3.2hz,1h),8.35(dd,j＝15.6,5.6hz,2h),7.75(s,1h),7.51(dd,j＝5.6,2.8hz,1h),7.31–7.24(m,2h),7.20(td,j＝8.8,2.8hz,1h),6.86(dd,j＝8.4,4.8hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝307.0863[m+h]+,calculatedforc18h12fn2o2:307.0877.
实施例4：
红色粉末，产率80％，m.p.237-239℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.26(s,1h),10.78(s,1h),8.38(dd,j＝9.9,2.7hz,1h),7.60(s,1h),7.30(m,1h),7.26–7.17(m,2h),6.86(dd,j＝8.7,4.5hz,1h),6.32(m,1h).hr-esi-ms:m/z＝257.0712[m+h]+,calculatedforc14h10fn2o2:257.0721.
实施例5：
红色粉末，产率64％，m.p.213-215℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.83(s,1h),8.31(dd,j＝9.6,2.7hz,1h),8.16(s,1h),7.76(d,j＝3.6hz,1h),7.63(s,1h),7.25(td,j＝9.0,2.7hz,1h),6.85(m,2h).hr-esi-ms:m/z＝258.0554[m+h]+,calculatedforc14h9fno3:258.0561.
实施例6：
橙黄色粉末，产率71％，m.p.217-219℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.88(s,1h),8.34(dd,j＝6.9,2.7hz,2h),8.25(d,j＝3.0hz,1h),8.12(s,1h),7.28(td,j＝9.0,2.7hz,1h),6.89(dd,j＝8.7,4.5hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝275.0276[m+h]+,calculatedforc13h8fn2o2s:275.0285.
实施例7：
橙黄色粉末，产率85％，m.p.253-254℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.86(s,1h),9.31(d,j＝1.5hz,1h),8.96(d,j＝2.4hz,1h),8.88(dd,j＝2.4,1.5hz,1h),8.33(dd,j＝9.6,2.7hz,1h),8.29(s,1h),7.28(td,j＝8.7,2.7hz,1h),6.89(dd,j＝8.7,4.5hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝270.0667[m+h]+,calculatedforc14h9fn3o2:270.0673.
实施例8：
橙黄色粉末，产率80％，m.p.238-240℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.86(s,1h),8.20(d,j＝5.1hz,1h),7.97(dd,j＝9.6,2.7hz,1h),7.78(s,1h),7.35(d,j＝5.1hz,1h),7.24(td,j＝9.0,2.7hz,1h),6.87(dd,j＝8.7,4.5hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝307.9932[m+h]+,calculatedforc14h8clfno2s:307.9943.
实施例9：
橙黄色粉末，产率66％，m.p.244-245℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.86(s,1h),8.01(dd,j＝9.6,2.7hz,1h),7.66(s,1h),7.58(s,1h),7.27(td,j＝9.0,2.7hz,1h),6.89(dd,j＝8.7,4.5hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝341.9541[m+h]+,calculatedforc14h7cl2fno2s:341.9553.
实施例10：
橙黄色粉末，产率77％，m.p.250-251℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ14.27(s,1h),13.40(s,1h),8.72(s,1h),8.45(d,j＝10.4hz,1h),8.27(dd,j＝9.2,3.6hz,1h),8.16(d,j＝8.0hz,1h),7.82(s,1h),7.40(t,j＝7.6hz,1h),7.01(t,j＝9.2hz,2h).hr-esi-ms:m/z＝284.0715[m+h]+,calculatedforc16h11fno3:284.0718.
实施例11：
橙红色粉末，产率94％，m.p.203-205℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.80(s,1h),7.81(dd,j＝9.6,2.7hz,1h),7.73(m,2h),7.53(d,j＝1.8hz,1h),7.20(td,j＝9.0,2.7hz,1h),7.09(d,j＝8.1hz,1h),6.86(dd,j＝8.7,4.5hz,1h),6.18(s,2h).hr-esi-ms:m/z＝312.0656[m+h]+,calculatedforc17h11fno4:312.0667.
实施例12：
红色粉末，产率73％，m.p.250-252℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.91(s,1h),9.41(s,1h),8.37–8.20(m,3h),8.09–7.92(m,3h),7.83(s,1h),7.69(s,1h),7.25(td,j＝9.0,2.7hz,1h),6.90(dd,j＝8.7,4.5hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝334.0976[m+h]+,calculatedforc19h13fn3o2:334.0986.
实施例13：
橙黄色粉末，产率63％，m.p.255-257℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.80(s,1h),8.80(s,1h),8.42(d,j＝9.6hz,1h),8.27(dd,j＝9.6,2.4hz,1h),7.89(s,1h),7.71(d,j＝9.6hz,1h),7.22(td,j＝8.8,2.8hz,1h),6.85(dd,j＝8.4,4.4hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝343.0391[m+h]+,calculatedforc16h9clfn4o2:343.0393.
实施例14：
粉红色粉末，产率92％，m.p.210-212℃。
1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.83(s,1h),8.01(d,j＝8.4hz,2h),7.87(dd,j＝9.3,2.7hz,1h),7.79(s,1h),7.46(d,j＝8.1hz,2h),7.23(td,j＝9.0,2.7hz,1h),6.88(dd,j＝8.7,4.5hz,1h),2.62(m,1h),1.80(m,4h),1.71(m,1h),1.52-1.33(m,4h),1.33-1.20(m,1h).hr-esi-ms:m/z＝350.1553[m+h]+,calculatedforc22h21fno2:350.1551.
实施例15：
橙黄色粉末，产率66％，m.p.218-220℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.51(s,1h),8.99(s,1h),8.28(d,j＝8.8hz,1h),8.04(d,j＝8.0hz,2h),7.90(s,1h),7.46(d,j＝8.0hz,2h),7.07(d,j＝8.8hz,1h),2.62(m,1h),1.79(m,4h),1.71(m,1h),1.52–1.35(m,4h),1.33–1.20(m,1h).hr-esi-ms:m/z＝377.1489[m+h]+,calculatedforc22h21n2o4:377.1496.
通式化合物ib的制备：
(a)ch(oet)3,aceticanhydride,150℃,1h；(b)drydmf,110℃,10h；(c)1mnaoh(aq),methanol,r.t.,3-4h；(d)pd/c,h2,ch3oh/ch2cl2,r.t.；(e)hatu,triethylamine,dmso,r.t.
将5-硝基吲哚-2-酮(2.18g,12.3mmol)加入到醋酸酐(20ml)中，搅拌均匀后，加入原甲酸三乙酯(6ml,12.3×3mmol)，加热到150℃，搅拌回流1小时后停止反应，待反应液冷却至室温，有大量固体乳白色固体析出，过滤得白色固体，母液静置后继续析出固体，过滤得白色固体，反复静置过滤至母液不再析出固体。合并所得白色固体，用少量蒸馏水洗涤，干燥，得n-乙酰基烯醚中间体v2.3g，产率68％。hr-esi-ms:m/z＝277.0814[m+h]+,calculatedforc13h13n2o5:277.0819.
将上述中间体(450mg,1.9mmol)、2-氨基嘧啶(190mg,2.0mmol)加入到无水dmf(8ml)中，搅拌均匀后，加热至110℃，搅拌下反应10小时。tlc监测反应完全后，停止反应，将反应液冷却至室温，有大量淡黄色固体析出，搅拌下加入混合溶剂(h2o:iproh＝10:1)11ml，过滤，固体用少量蒸馏水洗涤，干燥，得黄色固体。将该黄色固体加入到无水甲醇(50ml)中，室温搅拌均匀后加入氢氧化钠(5ml,1mol/l)，室温搅拌3-4小时，停止反应，用稀盐酸(1mol/l)中和反应液至中性，有大量淡黄色固体析出，过滤，洗涤，干燥得产物vi338mg，产率63％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.32(s,1h),11.11(d,j＝11.8hz,1h),9.18–9.04(m,1h),8.72-8.64(m,3h),8.03(t,j＝10.6hz,1h),7.21(s,1h),7.02(d,j＝8.4hz,1h).
将产物vi(283mg,1.0mmol)加入到无水甲醇和二氯甲烷的混合溶剂(30ml,ch3oh:ch2cl2＝1:1)中，搅拌均匀后加入含水量10％的pd/c(120mg)，氢气置换三次后，室温常压氢气环境下搅拌过夜。tlc监测反应完全后，停止反应，反应液用硅藻土过滤除去pd/c，滤液减压蒸干，得黄色固体，柱层析分离，得实施例16，淡黄色固体产物100mg，产率40％。
将化合物实施例16(100mg,0.4mmol)，hatu(200mg,0.53mmol)加入到4mldmso中，搅拌均匀，加入三乙胺10滴，搅拌5分钟后，加入2,6-二氯苯甲酸(80mg,0.42mmol)，室温搅拌过夜。反应完全后，停止反应，向反应液中加入20ml蒸馏水，有黄色固体析出，过滤，洗涤，烘干，柱层析分离，得实施例17，淡黄色固体产物58mg，产率34％。按照类似合成方法制备tm-45。
按照类似合成方法制备实施例18～25。
通式化合物iab的理化数据
实施例16：
黄色固体，产率40％，m.p.230-242℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.00(d,j＝11.4hz,1h),10.22(s,1h),8.62(d,j＝4.8hz,2h),8.41(d,j＝11.4hz,1h),7.11(t,j＝4.8hz,1h),6.79(d,j＝1.8hz,1h),6.57(d,j＝8.2hz,1h),6.37(dd,j＝8.2,2.0hz,1h),4.62(s,2h).hr-esi-ms:m/z＝254.1031[m+h]+,calculatedforc13h12n5o2:254.1036.
实施例17：
淡黄色固体，产率34％，m.p.263-265℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.01(d,j＝11.3hz,1h),10.68(s,1h),10.57(s,1h),8.66(m,2h),8.61(d,j＝11.8hz,1h),7.98(s,1h),7.56(m,2h),7.50(d,j＝7.4hz,1h),7.24(d,j＝7.2hz,1h),7.16(s,1h),6.87(d,j＝7.8hz,1h).hr-esi-ms:m/z＝426.0506[m+h]+,calculatedforc20h14cl2n5o2:426.0519.
实施例18：
淡黄色固体，产率95％，m.p.268-270℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.94(d,j＝11.6hz,1h),10.61(s,1h),9.91(s,1h),8.63(d,j＝4.8hz,2h),8.55(d,j＝11.6hz,1h),7.97(d,j＝1.8hz,1h),7.93(d,j＝8.8hz,2h),7.34(dd,j＝8.4,1.8hz,1h),7.13(t,j＝4.8hz,1h),7.02(d,j＝8.8hz,2h),6.82(d,j＝8.4hz,1h),3.80(s,3h).hr-esi-ms:m/z＝388.1390[m+h]+,calculatedforc21h18n5o3:388.1404.
实施例19：
淡黄色固体，产率33％，m.p.278-280℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.76(d,j＝12.6hz,1h),10.45(s,1h),9.92(s,1h),8.56(d,j＝12.6hz,1h),8.05–7.90(m,3h),7.17(t,j＝8.0hz,2h),7.05(d,j＝8.4hz,2h),6.95(s,1h),6.81(d,j＝8.4hz,1h),6.76(d,j＝8.0hz,1h),6.63(d,j＝8.0hz,1h),3.83(s,3h),3.23(s,4h),2.53(s,4h),2.27(s,3h).hr-esi-ms:m/z＝484.2332[m+h]+,calculatedforc28h30n5o3:484.2343.
实施例20：
淡黄色固体，产率45％，m.p.254-255℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.81(d,j＝12.4hz,1h),10.51(d,j＝16.4hz,2h),8.62(d,j＝12.6hz,1h),7.96(s,1h),7.56(s,1h),7.26–7.10(m,4h),6.96(s,1h),6.82(d,j＝8.4hz,1h),6.77(d,j＝7.8hz,1h),6.63(d,j＝7.8hz,1h),3.20(s,4h),2.45(s,4h),2.22(s,3h).hr-esi-ms:m/z＝490.20378[m+h]+,calculatedforc27h26f2n5o2:490.2049.
实施例21：
淡黄色固体，产率43％，m.p.260-262℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.84(d,j＝12.4hz,1h),10.48(s,2h),8.62(d,j＝12.4hz,1h),7.96(d,j＝3.2hz,1h),7.55(dd,j＝5.6,3.2hz,2h),7.48(dt,j＝16.0,5.6hz,1h),7.22–7.12(m,2h),6.96(s,1h),6.82(dd,j＝8.4,4.4hz,2h),6.63(d,j＝8.4hz,1h),3.21(s,4h),2.45(s,4h),2.22(s,3h).hr-esi-ms:m/z＝522.1456[m+h]+,calculatedforc27h26cl2n5o2:522.1458.
实施例22：
淡黄色固体，产率57％，m.p.262-263℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.52(s,1h),10.74(d,j＝12.4hz,1h),10.43(s,1h),9.59(s,1h),8.55(d,j＝12.4hz,1h),7.83(s,1h),7.18(m,2h),7.01(s,1h),6.93(d,j＝7.8hz,2h),6.80(d,j＝8.4hz,1h),6.74(d,j＝7.8hz,1h),6.63(d,j＝8.4hz,1h),6.14(s,1h),3.21(s,4h),2.45(s,4h),2.22(s,3h).hr-esi-ms:m/z＝443.2184[m+h]+,calculatedforc25h27n6o2:443.2190.
实施例23：
淡黄色固体，产率45％，m.p.268-270℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.77(d,j＝12.4hz,1h),10.39(s,1h),9.60(s,1h),8.53(d,j＝12.4hz,1h),7.87(s,1h),7.16(t,j＝8.2hz,1h),7.00(d,j＝8.4hz,1h),6.94(s,1h),6.74(d,j＝8.2hz,2h),6.62(d,j＝8.4hz,1h),3.20(s,4h),2.81(d,j＝10.8hz,2h),2.45(s,4h),2.22(s,4h),2.15(s,3h),1.86(t,j＝10.8hz,2h),1.66(m,4h).hr-esi-ms:m/z＝475.2812[m+h]+,calculatedforc27h35n6o2:475.2816.
实施例24：
淡黄色固体，产率82％，m.p.256-258℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.77(d,j＝12.4hz,1h),10.39(s,1h),9.59(s,1h),8.53(d,j＝12.4hz,1h),7.81(s,1h),7.16(t,j＝8.0hz,1h),7.04(d,j＝7.8hz,1h),6.93(s,1h),6.75(d,j＝8.0hz,2h),6.62(d,j＝7.8hz,1h),3.20(s,4h),2.45(s,4h),2.22(s,3h),2.15(d,j＝6.8hz,2h),2.10–2.02(m,1h),0.94(s,6h).hr-esi-ms:m/z＝434.2539[m+h]+,calculatedforc25h32n5o2:434.2551.
实施例25：
淡黄色固体，产率68％，m.p.281-283℃。
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.76(d,j＝12.4hz,1h),10.48(s,1h),10.16(s,1h),8.58(d,j＝12.4hz,1h),7.95(s,1h),7.83(d,j＝7.8hz,1h),7.78(d,j＝10.0hz,1h),7.58(dd,j＝14.0,7.8hz,1h),7.43(t,j＝8.4hz,1h),7.17(m,2h),6.95(s,1h),6.83(d,j＝8.2hz,1h),6.75(d,j＝8.0hz,1h),6.63(d,j＝8.0hz,1h),3.21(s,4h),2.46(s,4h),2.22(s,3h).hr-esi-ms:m/z＝472.2130[m+h]+,calculatedforc27h27fn5o2:472.2143.
药理实验
本发明的化合物对多种肿瘤细胞的抑制作用
方法一：
目标物抗肿瘤活性的筛选以紫杉醇(taxol)为对照品。通过mtt方法测定了所有目标物对hct-116(人结肠癌细胞)、hepg2(人肝肿瘤细胞)、bgc-823(人胃癌细胞)、nci-h1650(人非小细胞肺癌细胞)、a2780(人卵巢癌细胞)的细胞生长半数抑制浓度ic50。
结果：
分别测定并计算几种本发明化合物的ic50(μm)值。结果如表1所示。
表1.受试化合物对多种肿瘤细胞的抑制作用
方法二：
目标物抗肿瘤活性的筛选以靛玉红-3'-肟(im)为对照品。通过srb(sulforhodamineb)方法测定了结构代表性目标物对kb(人鼻咽癌细胞)、kbvin(kb耐药株)、a549(人肺癌细胞)、mcf-7(人乳腺癌细胞)、mda-mb-231(三阴性乳腺癌细胞)的细胞生长半数抑制浓度ic50。
结果：
分别测定并计算几种本发明化合物的ic50(μm)值。结果如表2所示。
表2.受试化合物对多种肿瘤细胞的抑制作用