本发明涉及一种口腔黏膜细胞基因组dna快速提取方法，属于生物技术领域。
背景技术：
市面上针对口腔黏膜细胞基因组dna的提取试剂盒很多，大部分试剂盒的dna提取质量od260/od280都保持在1.8左右，为了增加dna的提取量，可能涉及多个步骤，因此成本和抽提时间都会增加。
随着检测技术的不断发展，仪器本身的灵敏度增加，成本较低、操作简洁、耗时较短，并且所获得dna能符合绝大部分平台的方法成为绝大部分基因检测行业者的首选。
技术实现要素：
本发明的目的是解决现有技术存在的问题，提供一种口腔黏膜细胞基因组dna快速提取方法。
本发明的技术方案如下：
一种口腔黏膜细胞基因组dna快速提取方法，包括如下步骤：
1)取450-500μl的naoh(50mm)加入到试管中，涡旋混匀10-45s，95℃放置5-6min；
2)室温放置2-5min后瞬离，用镊子取出拭子，并将55-60μltris-hcl(20mm)溶液加入管中，涡旋混匀10-15s；12000rpm离心1min，取45-50μl上清；
3)将90-95μl磁珠加入至装有上述上清的pcr管中，轻轻吸打混匀6次，室温静置孵育5-10min，将pcr管置于磁力架上3-5min；
4)移除上清，将pcr管继续放置于磁力架上，向pcr管中加入300-350μl75％乙醇溶液，分2次旋转管子180度，静置30s；
5)移除上清，再向pcr管中加入300-350μl75％乙醇溶液，分2次旋转管子180度，静置30s后彻底移除上清；
6)室温静置2-5min，使残留乙醇彻底挥发；
7)加入10-12μl的nucleasefreewater，把pcr管从磁力架取下，轻轻吸打重悬磁珠，避免产生气泡，室温静置2min；
8)将pcr管置于磁力架上2min；用移液器吸取10μl左右上清液，转移到新的pcr管中，在反应管上标记样本编号。
本发明的方法中，主要包括如下创新点:
相对于现有的方法，省略了试剂且应用效果良好。现有的dna提取一般采用试剂盒提取，试剂盒通常对应多种平台，因此试剂盒中包括的试剂种类较多，成本较高。本发明的方法专门针对massarray平台，只涉及了4种试剂，成分十分简单并且成本低廉，针对性强。
本发明选用的试剂、仪器都是常见的实验用品，无需购买昂贵的试剂盒，在任何地方均能很好的开展，可重复性高。
本发明具有如下技术效果：
1)本发明在整个dna的提取过程中只涉及了4种试剂，成分简单并且纯度等要求不高，因此成本可控制得较低；
2)整个提取过程的反应时间最快需要24分钟；
3)通过实际项目验证，采用该方法提取的dna，符合绝大部分pcr反应以及massarray平台的检测。
4)本方法是针对dna纯度(od260/od280)在1.7左右的高效提取方法。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明的方法。
实施例1
使用普通的口腔拭子采集12个人的口腔黏膜细胞。
按照下列操作步骤，进行dna的提取：
1)取450μl的naoh(50mm)加入到试管中，涡旋混匀10s，95℃放置5min；
2)室温放置2min后瞬离，用镊子取出拭子，并将55μltris-hcl(20mm)溶液加入管中，涡旋混匀10s。12000rpm离心1min，取45μl上清。
3)将90μl磁珠加入至装有上述上清的pcr管中，轻轻吸打混匀6次，室温静置孵育5min，将pcr管置于磁力架上3min；
4)移除上清，将pcr管继续放置于磁力架上，向pcr管中加入300μl75％乙醇溶液，分2次旋转管子180度，静置30s。
5)移除上清，再向pcr管中加入300μl75％乙醇溶液，分2次旋转管子180度，静置30s后彻底移除上清(建议使用10μl移液器移除底部残留乙醇溶液)。
6)室温静置2min，使残留乙醇彻底挥发。
7)加入10μl的nucleasefreewater，把pcr管从磁力架取下，轻轻吸打重悬磁珠，避免产生气泡，室温静置2min；
8)将pcr管置于磁力架上2min。用移液器吸取10μl上清液，转移到新的pcr管中，在反应管上标记样本编号。
制备获得12个dna样本，分别标记1-12。1-12号样本通过nanodrop2000检测dna质量，见表一的样本浓度和样本纯度；
12个样本统一使用massarray平台进行检测，所使用的试剂和方法参考
massarray分型技术是建立在多重pcr反应的基础上，本次实施例是含有12个多重pcr反应的项目，正常情况下会存在一定程度的引物二聚体等情况，这均属于技术范围内可接受的失败，其失败率进行检测的项目有关。正常情况下，该项目的分型失败率是低于20％的，从这一指标来看，新的口腔黏膜细胞基因组dna快速提取方法的样本质量是符合massarray的分型。
另外从dna的nanodrop2000检测结果来看，其浓度均高于10ng/ul，od260/od280绝大部分都在1.8左右，说明通过本方法获得的dna符合绝大部分检测平台的要求，实用性相对较广。