本发明涉及水稻稻瘟病技术领域，具体为一种对水稻的稻瘟病基因进行提取检测的方法。
背景技术：
水稻是草本稻属的一种，属谷类，也是稻属中作为粮食的最主要最悠久的一种，目前是全世界最重要的粮食作物之一，也是世界上一半人口的主粮，随着目前全球人口的日益增长，人们对稻米的需求量越来越大，但是，由于水稻在种植中会有各种病害的发生，严重制约了水稻的产量，所以人们对水稻的病害重视度越来越高。
稻瘟病是水稻重要病害之一，可引起大幅度减产，严重时减产40%～50%，甚至颗粒无收，世界各稻区均有发生。该病在水稻植株的各处均有发生，其中以水稻植株叶部、节部发生为多，发生后可造成不同程度减产，尤其穗颈瘟或节瘟发生早而重，可造成白穗以致绝产。近年来，世界各稻区的稻瘟病年发生面积出现逐年增加趋势，局部大爆发并不少见，目前稻瘟病可能发生在省域内的任何年头、任何季节，极大地影响了水稻的产量。
由于稻瘟病对于水稻的严重性，所以世界各稻区均在研究稻瘟病的防治方式，在对稻瘟病研究过程中，都会对各时期稻瘟病的基因进行提取检测装置，虽然目前一些稻瘟病的基因提取检测存在着许多种类，方式也是多种多样，但是一些稻瘟病的基因提取检测方式在进行过程中还是存在一定的问题，例如，有的稻瘟病基因是从植株或者单独培养的菌丝上直接提取的，但是由于后续存在一定的杂质，会影响稻瘟病基因的检测数据结果，而且还不能准确的掌握稻瘟病各时期的基因数据，所以我们提出了一种对水稻的稻瘟病基因进行提取检测的方法，以便于解决上述中提出的问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种对水稻的稻瘟病基因进行提取检测的方法，以解决上述背景技术提出的有的稻瘟病基因是从植株或者单独培养的菌丝上直接提取的，但是由于后续存在一定的杂质，会影响稻瘟病基因的检测数据结果，而且还不能准确的掌握稻瘟病各时期基因数据的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种对水稻的稻瘟病基因进行提取检测的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）提前准备好dna提取缓冲液；
（2）从水稻发病的植株上单独将病斑切取下来或者挑取稻瘟病菌的菌丝，定量的放入试管中；
（3）然后定量的将准备好dna提取缓冲液注入带有植株病斑或者稻瘟病菌菌丝的试管中；
（4）将上述带有植株病斑或者稻瘟病菌菌丝的试管放入湿热灭菌锅中进行水浴处理，时长10min-12min；
（5）将水浴处理后的试管放置到常温状态下进行自然冷却；
（6）试管内的混合液经自然冷却后，导入相应的过滤装置中进行过滤，从而过滤掉混合液中残留的固态杂质；
（7）将过滤后的混合液定量均匀的注入pcr-96孔板内，再将带有混合液的pcr-96孔板安置到-20℃的环境下进行冷藏，以供后续检测使用；
（8）检测时取出pcr-96孔板，检测装置的探针上标记酶、生物素、放射性同位素，探针对pcr-96孔板内的混合液进行数据采集，通过与计算机内的dna检测系统的标准对照表进行对比，计算对比度，自动生成dna检测数据表。
优选的，所述dna提取缓冲液采用tris-hcl、edta、tritonx-100和ddh2o的混合液，或者tris-hcl、edta、kcl和tween20的混合液。
优选的，所述植株上病斑的切取以及稻瘟病菌菌丝的挑取均在无菌环境下进行。
优选的，所述dna提取缓冲液与植株病斑或者稻瘟病菌菌丝混合时，试管上端的开口为封闭状。
优选的，所述试管在湿热灭菌锅中进行水浴处理的温度为100℃-110℃。
优选的，所述试管进行自然冷却时处于无菌环境中，并且试管上端开口打开。
优选的，所述过滤后的混合液在pcr-96孔板内分组注入，可以分为等量组和递增组。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：该对水稻的稻瘟病基因进行提取检测的方法；
（1）通过配取不同种类的dna提取缓冲液，可以更好的配合在不同基因提取原料中对稻瘟病基因进行高效的提取过程，从而提高了基因提取工作的效率，也保证了稻瘟病基因提取工作的正常进行；
（2）在对稻瘟病基因提取工作中，将dna提取缓冲液与稻瘟病基因提取原料同一进行混合，进而提高了稻瘟病基因提取工作的可控性，减少基因提取工作的意外状况的发生，保证稻瘟病基因提取工作的稳定高效；
（3）在稻瘟病基因提取工作结束后会进行过滤工作，可以将混合液中残留的杂质祛除，进而有效避免原料杂质对后续基因检测工作的不良影响，保证了后续基因检测工作的结果准确；
（4）该方法通过湿热灭菌锅对dna提取缓冲液与稻瘟病基因提取原料尽进行水浴处理，可以直接完成对稻瘟病基因的提取工作，从而避免了对稻瘟病基因提取原料进行二次处理的工作过程，提高了稻瘟病基因提取的效率；
（5）稻瘟病基因统一提取之后，在pcr-96孔板内进行分装工作，而且按照量的组合分装为不同的组别，进而可以方便后续基因检测结果的对比，从而生成更加准确的dna检测数据表。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
本实施例1提供一种对水稻的稻瘟病基因进行提取检测的方法，以下对上述方法进行详细介绍。
在对稻瘟病基因进行提取之前，提前准备好dna提取缓冲液，dna提取缓冲液采用tris-hcl、edta和tritonx-100加ddh2o的混合液，然后在无菌环境下，从事先培养好的稻瘟病菌菌丝上，挑取适量的稻瘟病菌菌丝，放入无菌的试管中，之后根据试管中稻瘟病菌菌丝的量，将准备好dna提取缓冲液定量的注入带有稻瘟病菌菌丝的试管中，使之充分混合接触，随后，将试管上端的开口进行封闭，以保证试管内部的环境稳定，从而保证稻瘟病基因正常安全的提取过程。
带有稻瘟病菌菌丝的试管准备好之后，将试管放入湿热灭菌锅中进行水浴处理，而试管中的溶液要完全浸入水浴处理的水面以下，以保证水浴处理的优良效果，通过湿热灭菌锅对试管进行10min的水浴处理工作，湿热灭菌锅内部的温度控制在100℃以上，在湿热灭菌锅中，以高温高压水蒸气为介质，使瘟病菌的蛋白质及核酸变形导致其死亡，这种变形首先是分子中的氢键分裂，当氢键断裂时，蛋白质及核酸内部结构被破坏，从而能够更快速便捷的将dna提取出来，在此过程中，试管的上端开口是封闭的，既可以提高水浴处理对试管内部的加压效果，又可以避免水浴处理对试管内部的不良影响，提高了水浴处理的效果。
盛有稻瘟病混合液的试管在湿热灭菌锅中进行水浴处理后，放置到无菌的常温环境下进行自然冷却，在此过程中，将试管上端开口打开，以方便试管中的溶液能够快速进行降温工作，降温之后的溶液导入相应的过滤装置中进行过滤，从而过滤掉混合液中残留的菌丝杂质，以避免菌丝杂质对后续基因检测工作的不良影响，保证了后续基因检测工作的结果准确。
将过滤后的溶液从试管中取出，然后定量的转移注入pcr-96孔板内，可以根据溶液注入pcr-96孔板内的量进行分组，将注入同量溶液的分为一组，再将注入溶液递增的分为一组，之后将带有混合液的pcr-96孔板安置到-20℃的环境下进行冷藏，以供后续检测使用。
检测时取出不同组别的pcr-96孔板，检测装置的探针上标记酶、生物素、放射性同位素，探针对溶液同量组或者溶液递增组pcr-96孔板内的混合液进行数据采集，通过与计算机内的dna检测系统的标准对照表进行对比，计算对比度，自动生成dna检测数据表，从而根据溶液同量组或者溶液递增组pcr-96孔板上各个混合液的dna检测数据表进行对比确定准确的dna检测数据表。
实施例2
本实施例2提供一种对水稻的稻瘟病基因进行提取检测的方法，以下对上述方法进行详细介绍。
在对稻瘟病基因进行提取之前，提前准备好dna提取缓冲液，dna提取缓冲液采用tris-hcl、edta、kcl和tween20的混合液，然后在无菌环境下，从水稻发病的植株上单独将病斑切取下来，放入无菌的试管中，之后根据植株病斑的量，将准备好dna提取缓冲液定量的注入带有植株病斑的试管中，使之充分混合接触，随后，将试管上端的开口进行封闭，以保证试管内部的环境稳定，从而保证稻瘟病基因正常安全的提取过程。
带有植株病斑的试管准备好之后，将试管放入湿热灭菌锅中进行水浴处理，而试管中的溶液要完全浸入水浴处理的水面以下，以保证水浴处理的优良效果，通过湿热灭菌锅对试管进行12min的水浴处理工作，湿热灭菌锅内部的温度控制在110℃以上，在湿热灭菌锅中，以高温高压水蒸气为介质，使瘟病菌的蛋白质及核酸变形导致其死亡，这种变形首先是分子中的氢键分裂，当氢键断裂时，蛋白质及核酸内部结构被破坏，从而能够更快速便捷的将dna提取出来，在此过程中，试管的上端开口是封闭的，既可以提高水浴处理对试管内部的加压效果，又可以避免水浴处理对试管内部的不良影响，提高了水浴处理的效果。
盛有稻瘟病混合液的试管在湿热灭菌锅中进行水浴处理后，放置到无菌的常温环境下进行自然冷却，在此过程中，将试管上端开口打开，以方便试管中的溶液能够快速进行降温工作，降温之后的溶液导入相应的过滤装置中进行过滤，从而过滤掉混合液中残留的植株杂质，以避免植株杂质对后续基因检测工作的不良影响，保证了后续基因检测工作的结果准确。
将过滤后的溶液从试管中取出，然后定量的转移注入pcr-96孔板内，可以根据溶液注入pcr-96孔板内的量进行分组，将注入同量溶液的分为一组，再将注入溶液递增的分为一组，之后将带有混合液的pcr-96孔板安置到-20℃的环境下进行冷藏，以供后续检测使用。
检测时取出不同组别的pcr-96孔板，检测装置的探针上标记酶、生物素、放射性同位素，探针对溶液同量组或者溶液递增组pcr-96孔板内的混合液进行数据采集，通过与计算机内的dna检测系统的标准对照表进行对比，计算对比度，自动生成dna检测数据表，从而根据溶液同量组或者溶液递增组pcr-96孔板上各个混合液的dna检测数据表进行对比确定准确的dna检测数据表。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。