第四代EGFR酪氨酸激酶抑制剂的制作方法

本发明涉及具有egfr酪氨酸激酶抑制活性的化合物及含有该化合物的egfr酪氨酸激酶抑制剂。
背景技术：
：肺癌的80％为非小细胞肺癌，该非小细胞肺癌的20～30％中确认到了表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor:egfr)的基因突变。主要的突变是egfr激酶结构域的l858r突变或exon19缺失。由于该突变，从egfr至核的细胞增殖信号传递不断地活性化，细胞发生癌变。对于具有这样的活性化突变egfr(l858r或exon19缺失)的非小细胞肺癌，gefitinib(1)、erlotinib(2)这样的酪氨酸激酶抑制剂(第一代egfr-tki)显示出显著的抗肿瘤效果。另一方面，持续使用这些药剂时，大多数情况下1年左右egfr发生二次耐药性突变(t790m)，癌会复发(非专利文献1)。为了应对该耐药性突变，开发了将迈克尔受体导入gefitinib(1)的骨架而成的不可逆抑制剂afatinib(3)(第二代egfr-tki)(非专利文献2)。然而，该药剂不仅强烈抑制t790m二次耐药性突变egfr，也会强烈抑制正常细胞中存在的野生型egfr(wt)，因此不能充分提高药剂的血药浓度，对于具有耐药性突变egfr的非小细胞肺癌没有显示出足够的治疗效果(非专利文献3)。化学式1另一方面，作为对t790m二次耐药性突变egfr具有选择性抑制活性的第三代egfr-tki，最近开发了具有嘧啶骨架的不可逆抑制剂wz4002(4)(非专利文献4)、rociletinib(co-1686)(5)(非专利文献5)、osimertinib(azd9291)(6)(非专利文献6)。其中，对于astrazeneca公司开发的6，作为突破性治疗药由美国fda认定为快速审查的对象，于2015年11月批准为egfr-t790m阳性突变非小细胞肺癌治疗药(非专利文献7)。日本国内也于2016年5月起可以进行6的临床使用。化学式2然而，在6的临床实验阶段，报告了对第三代egfr-tki也显示耐药性的新的c797s突变型三次耐药性egfr(非专利文献8)。以t790m二次耐药性突变egfr作为靶标的第三代egfr-tki均为不可逆抑制剂，通过egfr激酶结构域中存在的cys797的侧链硫醇基与抑制剂的丙烯酰胺部位形成共价键，显示出强烈的抗肿瘤活性。因此，从cys797向具有反应性低的侧链羟基的ser797的突变对于不可逆抑制剂来说是致命的。实际上，对于具有c797s突变型三次耐药性egfr的非小细胞肺癌，不仅是不可逆抑制剂，现有的egfr-tki全部无效(非专利文献9)。可知，今后随着第三代egfr-tki的临床使用，具有c797s突变型三次耐药性egfr的非小细胞肺癌会明显地表现出来，可以认为开发对该突变体有效的第四代egfr-tki是紧要的课题(非专利文献10)。现有技术文献非专利文献非专利文献1：v.sharma,etal.epidermalgrowthfactorreceptormutationsinlungcancer,naturereviews,7,169-181(2007)非专利文献2：d.li,etal.bibw2992,anirreversibleegfr/her2inhibitorhighlyeffectiveinpreclinicallungcancermodels,oncogene,27,4702-4711(2008)非专利文献3：y.kim,etal.theegfrt790mmutationinacquiredresistancetoanirreversiblesecond-generationegfrinhibitors,molecularcancertherapeutics,11,784-791(2012)非专利文献4：w.zhou,etal.novelmutant-selectiveegfrkinaseinhibitorsagainstegfrt790m,nature,462,1070-1074(2009)非专利文献5：a.o.walter,etal.discoveryofamutant-selectivecovalentinhibitorofegfrthatovercomest790m-mediatedresistanceinnsclc,cancerdiscovery,1404-1415(2013)非专利文献6：d.a.e.cross,etal.azd9291,anirreversibleegfrtki,overcomest790m-mediatedresistancetoegfrinhibitorsinlungcancer,cancerdiscovery,1047-1061(2014)非专利文献7：fdanewsrelease,fdaapprovesnewpilltotreatcertainpatientswithnon-smallcelllungcancer,november13,2015非专利文献8：k.s.thress,etal.acquiredegfrc797smutationmediatesresistancetoazd9291innon-smallcelllungcancerharboringegfrt790m,naturemedicine,21,560-564(2015)非专利文献9：d.ercan,etal.egfrmutationsandresistancetoirreversiblepyrimidine-basedinhibitors,clinicalcancerresearch,21,3913-3923(2015)非专利文献10：y.jia,etal.overcomingegfr(t790m)andegfr(c797s)resistancewithmutant-selectiveallostericinhibitors,nature,534,129-132(2016)技术实现要素：发明要解决的课题本发明的目的在于提供对c797s突变型耐性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)有效的第四代egfr-tki。解决课题的方法本发明人等为了解决上述课题而进行了深入研究，结果发现，下式(i)所示的化合物对c797s突变型耐性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)具有特异性的酪氨酸激酶抑制活性，从而完成了本发明。具体而言，作为以海洋天然产物片螺素(lamellarin)作为结构模体的抗癌药开发研究的一环，本发明人等实施了片螺素类对癌相关激酶的活性评价。其结果是，发现了片螺素n(7)对耐药性突变egfr(l858r/t790m)显示出抑制活性。片螺素n(7)是可逆性抑制剂，由于活性表达不依赖于与cys797形成共价键，因此可以认为是用于创制对c797s突变有效的egfr-tki的命中化合物(hitcompound)。这里，为了提高命中化合物的活性，进行了片螺素n(7)对egfr(l858r/t790m)激酶结构域的对接模拟(图1)。其结果是可以预想，沿激酶的atp结合口袋的开口部取向的片螺素n(7)的a环部取代基与其附近存在的phe795、asp800、glu804的相互作用增强会引起活性提高。因此，合成将各种取代基导入片螺素n(7)的a环部的氧官能团部分(oh、ome)而成的新型片螺素n衍生物，并进行了评价。另外，对于将片螺素n(7)的b环部内酯环取代为内酰胺环而成的氮杂片螺素(azalamellarin)n(8)，也进行了同样的结构研究。化学式2即，本发明如下所述。[1]式(i)所示的化合物或其盐(本说明书中，有时简称为“化合物(i)”)，化学式4[式中，x表示o或nh，r1及r2各自独立地表示氢原子或任选被取代的烃基；r3及r4各自独立地表示氢原子、卤原子或任选被取代的烃基，r5及r6各自独立地表示任选被取代的烃基。]其中，式(i)所示的化合物不包括以下的化合物：化学式5[2]一种c797s突变型耐药性egfr特异性酪氨酸激酶抑制剂，其含有式(i)所示的化合物或其盐，化学式5[式中，x表示o或nh，r1及r2各自独立地表示氢原子或任选被取代的烃基；r3及r4各自独立地表示氢原子、卤原子或任选被取代的烃基，r5及r6各自独立地表示任选被取代的烃基。]。发明效果本发明的化合物对c797s突变型耐药性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)具有特异性的酪氨酸激酶抑制活性，作为c797s突变型耐药性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)特异性酪氨酸激酶抑制剂、具有耐药性突变egfr的非小细胞肺癌等的预防和/或治疗剂等是有用的。附图说明图1示出了片螺素n(7)对egfr(l858r/t790m)激酶结构域的对接模拟。图2示出了利用试验例4中的化合物26d进行的egfr信号抑制。图3示出了试验例5中的化合物26d在小鼠异种移植模型中的抗肿瘤效果。图4示出了试验例5中的化合物26d给药期间中裸鼠体重的变化。具体实施方式以下，对本发明进行详细说明。以下，对本说明书中使用的各取代基的定义进行详细说明。在没有特别说明的情况下，各取代基具有以下的定义。在本说明书中，作为“卤原子”，可以列举例如：氟、氯、溴、碘。在本说明书中，作为“烃基”，可以列举例如：c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c3-10环烷基、c3-10环烯基、c6-14芳基、c7-16芳烷基。在本说明书中，作为“c1-6烷基”，可以列举例如：甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、1-乙基丙基、己基、异己基、1,1-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、3,3-二甲基丁基、2-乙基丁基。在本说明书中，作为“c2-6烯基”，可以列举例如：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、1-己烯基、3-己烯基、5-己烯基。在本说明书中，作为“c2-6炔基”，可以列举例如：乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、1-己炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基、4-甲基-2-戊炔基。在本说明书中，作为“c3-10环烷基”，可以列举例如：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、双环[2.2.1]庚基、双环[2.2.2]辛基、双环[3.2.1]辛基、金刚烷基。在本说明书中，作为“c3-10环烯基”，可以列举例如：环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基。在本说明书中，作为“c6-14芳基”，可以列举例如：苯基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基、9-蒽基。在本说明书中，作为“c7-16芳烷基”，可以列举例如：苄基、苯乙基、萘基甲基、萘基丙基。在本说明书中，作为“任选被取代的烃基”的取代基，可以列举例如：卤原子、羟基、氰基、硝基、羧基、任选被c1-6烷基单取代或二取代的氨基、胍基。取代基的数量例如为1～5个，优选为、1～3个。在存在多个取代基的情况下，各取代基可以相同，也可以不同。以下，对式(i)中的各符号的定义进行详细说明。x表示o或nh。r1及r2各自独立地表示氢原子或任选被取代的烃基。作为r1及r2所示的“任选被取代的烃基”的“烃基”，优选为c1-6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基)。r1及r2优选各自独立地表示氢原子或任选被取代的c1-6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基)；更优选各自独立地表示氢原子、或任选被以下的1～3个取代基取代的c1-6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基)，所述取代基选自任选被c1-6烷基单取代或二取代的氨基(例如，二甲基氨基)及胍基；进一步优选各自独立地表示氢原子、或任选被氨基取代的c1-6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基)，所述氨基为被c1-6烷基二取代的氨基(例如，二甲基氨基)。r3及r4各自独立地表示氢原子、卤原子或任选被取代的烃基。作为r3及r4所示的“任选被取代的烃基”的“烃基”，优选为c1-6烷基(例如，甲基)。r3及r4优选各自独立地表示氢原子、卤原子或任选被取代的c1-6烷基(例如，甲基)，更优选各自独立地表示氢原子或卤原子，进一步优选分别为氢原子。r5及r6各自独立地表示任选被取代的烃基。作为r5及r5所示的“任选被取代的烃基”的“烃基”，优选为c1-6烷基(例如，甲基)。r5及r6优选各自独立地表示任选被取代的c1-6烷基(例如，甲基)，更优选各自独立地表示c1-6烷基(例如，甲基)。作为化合物(i)的优选例，可以举出以下的化合物。[化合物i-1]化合物(i)x为o或nh；r1及r2各自独立地表示氢原子或任选被取代的c1-6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基)；r3及r4各自独立地表示氢原子、卤原子或任选被取代的c1-6烷基(例如，甲基)；r5及r6各自独立地表示任选被取代的c1-6烷基(例如，甲基)。[化合物i-2]化合物(i)x为o或nh；r1及r2各自独立地表示氢原子、或任选被以下的1～3个取代基取代的c1-6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基)，所述取代基选自任选被c1-6烷基单取代或二取代的氨基(例如，二甲基氨基)及胍基；r3及r4各自独立地表示氢原子、卤原子或c1-6烷基(例如，甲基)；r5及r6各自独立地表示c1-6烷基(例如，甲基)。[化合物i-3]化合物(i)x为o或nh；r1及r2各自独立地表示氢原子、或任选被以下的1～3个取代基取代的c1-6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基)，所述取代基选自任选被c1-6烷基单取代或二取代的氨基(例如，二甲基氨基)及胍基；r3及r4各自独立地表示氢原子或卤原子；r5及r6各自独立地表示c1-6烷基(例如，甲基)。[化合物i-4]化合物(i)x为o或nh；r1及r2各自独立地表示氢原子、或任选被氨基取代的c1-6烷基(例如，甲基、乙基、正丙基)，氨基是被c1-6烷基二取代的氨基(例如，二甲基氨基)；r3及r4分别为氢原子；r5及r6各自独立地表示c1-6烷基(例如，甲基)。在化合物(i)为盐的情况下，作为这样的盐，可以列举例如：与无机碱形成的盐、与有机碱形成的盐、与无机酸形成的盐、与有机酸形成的盐、与碱性或酸性氨基酸形成的盐等。作为与无机碱形成的盐的优选例，可以列举：钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐等碱土金属盐；铝盐；铵盐。作为与有机碱形成的盐的优选例，可以列举：与三甲胺、三乙胺、吡啶、甲基吡啶、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇[三(羟甲基)甲胺]、叔丁胺、环己胺、苄胺、二环己胺、n,n-二苄基乙二胺形成的盐。作为与无机酸形成的盐的优选例，可以列举：与氯化氢、溴化氢、硝酸、硫酸、磷酸形成的盐。作为与有机酸形成的盐的优选例，可以列举：与甲酸、酢酸、三氟乙酸、邻苯二甲酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、丁二酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸形成的盐。作为与碱性氨基酸形成的盐的优选例，可以列举：与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸形成的盐。作为与酸性氨基酸形成的盐的优选例，可以列举：与天冬氨酸、谷氨酸形成的盐。在这些盐中，优选为药学上可以允许的盐。作为药学上可以允许的盐，在化合物内具有碱性官能团的情况下，可以列举例如：与盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等无机酸形成的盐；或与乙酸、邻苯二甲酸、富马酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、丁二酸、甲磺酸、对甲苯磺酸等有机酸形成的盐。另外，在化合物内具有酸性官能团的情况下，可以列举：碱金属盐(例如，钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(例如，钙盐、镁盐、钡盐等)等无机盐；铵盐等。另外，化合物(i)可以用同位素(例、3h、13c、14c、18f、35s、125i)等进行了标记。另外，化合物(i)可以是水合物，也可以是非水合物，可以是非溶剂化物，也可以是溶剂化物。此外，将1h转化为2h(d)的氘转化体也包含于化合物(i)。在化合物(i)具有手性中心的情况下，可以存在对映体或非对映体等异构体。这样的异构体及它们的混合物均包含在本发明的范围内。另外，有时生成因构象或互变异构引起的异构体，这样的异构体或其混合物也包含于本发明的化合物(i)。另外，有时生成阻转异构体(具体而言，在式(i)中，r3及r4中的任一者或两者为除氢原子以外的情况)，这样的异构体或其混合物也包含于本发明的化合物(i)。接下来，对本发明的化合物(i)的制造方法进行说明。本发明的化合物(i)例如可以通过j.org.chem.2014,79,529-537中记载的片螺素类的模块合成法或基于此的方法等来合成。作为一例，将r5及r6为甲基的化合物(i)的合成方案示于以下。化学式7(式中，pg1及pg2表示羟基的保护基，其它符号如上述所定义。)可以以能够由市售的吡咯合成的化合物9作为起始物质，以2步合成三环化合物10。通过使本化合物10与芳基硼酸11或芳基硼酸酯12进行铃木-宫浦偶联，可以合成片螺素衍生物13及氮杂片螺素衍生物14。进而，将片螺素衍生物13及氮杂片螺素衍生物14的a环部氧上的保护基(pg1、pg2)选择性地脱保护，进一步使得到的酚衍生物官能化，由此可以合成本发明的化合物(i)(片螺素n衍生物(x＝o)及氮杂片螺素n衍生物(x＝nh)。本发明的化合物(i)对于c797s突变型耐药性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)具有特异性的酪氨酸激酶抑制活性，可以用作c797s突变型耐药性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)特异性酪氨酸激酶抑制剂、具有耐药性突变egfr的非小细胞肺癌等的预防和/或治疗剂等。本发明的化合物(i)对于c797s突变型耐药性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)显示出特异性的酪氨酸激酶抑制活性，且本发明的化合物(i)在药效显现、药代动力学(例如，吸收性、分布、代谢、排泄)、溶解性(例如，水溶性)、与其它医药品的相互作用(例如，药物代谢酶抑制作用)、安全性(例如，急性毒性、慢性毒性、遗传毒性、生殖毒性、心脏毒性、致癌性、中枢毒性)、稳定性(例如，化学稳定性、对酶的稳定性)方面也优异，因此可以用作医药品。因此，对于哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猫、犬、牛、羊、猴、人)，本发明的化合物(i)可以用于对c797s突变型耐药性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)特异性的酪氨酸激酶抑制作用。本发明的化合物(i)可以直接或与药理学上允许的载体配合制成医药品而对哺乳动物(优选为人)口服或非口服给药。以下，对含有本发明的化合物(i)而成的医药(有时简称为“本发明的医药”)进行详细说明。作为本发明的医药的剂型，可以列举例如：片剂(例如，糖衣片、薄膜包衣片、舌下片、口含片、口腔速崩片)、丸剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂(例如，软胶囊剂、微胶囊剂)、糖浆剂、乳剂、悬浮剂、膜剂(例如，口腔崩解膜、口腔粘膜粘贴膜)等口服制剂。另外，作为本发明的医药的剂型，可以列举例如：注射剂、输液剂、透皮剂(例如，离子电渗透皮剂)、栓剂、软膏剂、滴鼻剂、肺部给药剂、滴眼剂等非口服制剂。另外，本发明的医药可以为速释制剂、缓释制剂(例如，缓释微胶囊)等控释制剂。本发明的医药可以通过制剂
技术领域：
通常使用的公知的制造方法(例如，日本药局方中记载的方法)来制造。另外，本发明的医药可以根据需要适当、适量地含有制剂领域通常使用的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、甜味剂、表面活性剂、助悬剂、乳化剂、着色剂、防腐剂、芳香剂、矫味剂、稳定剂、增稠剂等添加剂。作为上述的药理学上允许的载体，可以列举这些添加剂。例如，片剂可以使用赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等制造，丸剂及颗粒剂可以使用赋形剂、粘合剂、崩解剂来制造。另外，散剂及胶囊剂可以使用赋形剂等制造，糖浆剂可以使用甜味剂等制造，乳剂或悬浮剂可以使用助悬剂、表面活性剂、乳化剂等制造。作为赋形剂的例子，可以列举：乳糖、蔗糖、葡萄糖、淀粉、蔗糖、微晶纤维素、甘草粉末、甘露醇、碳酸氢钠、磷酸钙、硫酸钙。作为粘合剂的例子，可以列举：5～10重量％淀粉糊液、10～20重量％阿拉伯胶液或明胶液、1～5重量％黄蓍胶液、羧甲基纤维素液、藻酸钠液、甘油。作为崩解剂的例子，可以列举：淀粉、碳酸钙。作为润滑剂的例子，可以列举：硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钙、纯化的滑石。作为甜味剂的例子，可以列举：葡萄糖、果糖、转化糖、山梨糖醇、木糖醇、甘油、单糖浆。作为表面活性剂的例子，可以列举：月桂基硫酸钠、聚山梨醇酯80、脱水山梨糖醇单脂肪酸酯、聚乙二醇硬脂酸酯40。作为助悬剂的例子，可以列举：阿拉伯胶、藻酸钠、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、膨润土。作为乳化剂的例子，可以列举：阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、聚山梨醇酯80。例如，在本发明的医药为片剂的情况下，该片剂可以通过按照本身公知的方法，在本发明的化合物(i)中添加例如赋形剂(例如，乳糖、蔗糖、淀粉)、崩解剂(例如，淀粉、碳酸钙)、粘合剂(例如，淀粉、阿拉伯胶、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素)或润滑剂(例如，滑石、硬脂酸镁、聚乙二醇6000)并进行压缩成形，接着根据需要，为了掩盖气味、肠溶性或持续性而用本身公知的方法进行包衣来制造。作为包衣所用的包衣剂，可以使用例如，羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚氧乙二醇、吐温80、普朗尼克(pluronic)f68、邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙酸羟甲基纤维素琥珀酸酯、尤特奇(eudragit，rohm公司制、德国、甲基丙烯酸-丙烯酸共聚物)及色素(例如，铁丹、二氧化钛)。作为上述注射剂，除静脉注射剂以外，还包括皮下注射剂、皮内注射剂、肌肉注射剂、腹腔内注射剂、输液注射剂等。所述注射剂可以通过本身公知的方法、即将本发明的化合物(i)溶解、悬浮或乳化于无菌的水性液体或油性液体来制备。作为水性液体，可以列举：生理盐水、包含葡萄糖、其它佐剂的等渗液(例如，d-山梨糖醇、d-甘露醇、氯化钠)等。该水性液体可以包含适当的增溶剂、例如醇(例如，乙醇)、多元醇(例如，丙二醇、聚乙二醇)、非离子型表面活性剂(例如，聚山梨醇酯80、hco-50)。作为油性液体，可以列举：芝麻油、大豆油等。该油性液体可以包含适当的增溶剂。作为该增溶剂，可以列举：苯甲酸苄酯、苯甲醇等。另外，该注射剂中可以配合缓冲剂(例如，磷酸缓冲液、乙酸钠缓冲液)、无痛化剂(例如，苯扎氯铵、盐酸普鲁卡因)、稳定剂(例如，人血清白蛋白、聚乙二醇)、防腐剂(例如，苯甲醇、苯酚)等。制备的注射液通常可以填充于安瓿。本发明的医药中的本发明的化合物(i)的含量根据制剂的形态而不同，通常相对于全部制剂为约0.01～约100重量％，优选为约2～约85重量％，进一步优选为约5～约70重量％。本发明的医药中的添加剂的含量根据制剂的形态而不同，通常相对于全部制剂为约1～约99.9重量％，优选为约10～约90重量％。本发明的化合物(i)可以稳定且低毒性地安全使用。本发明的化合物(i)的1天给药量根据患者的状态、体重、化合物的种类、给药途径等而不同，例如，在为了治疗癌而对患者口服给药的情况下，成人(体重约60kg)每1天的给药量以本发明的化合物(i)计为约1～约1000mg，优选为约3～约300mg，进一步优选为约10～约200mg，可以将它们分成1次或2～3次给药。在非口服给药本发明的化合物(i)的情况下，通常以液体制剂(例如，注射剂)的形式给药。本发明的化合物(i)的1次给药量根据给药对象、对象脏器、症状、给药方法等而不同，例如，优选将每1kg体重通常为约0.01～约100mg、优选为约0.01～约50mg、更优选为约0.01～约20mg的本发明的化合物(i)通过静脉注射进行给药。实施例以下，列举实施例对本发明进行更具体说明，但本发明并不受以下实施例的限制，可以在能够符合上述/下述的主旨的范围内适当进行变更来实施，这些均包含于本发明的技术范围内。在本说明书中，以下的方案中使用的缩写符号表示以下含义。-me：甲基-et：乙基-ome：甲氧基-oi-pr：异丙氧基-co2me：甲氧羰基-nme2：二甲基氨基-mom：甲氧基甲基-omom：甲氧基甲氧基-obn：苄氧基-boc：叔丁氧羰基-nhboc：叔丁氧羰基氨基[片螺素n衍生物的合成法]化学式8化合物9可以通过j.org.chem.2014,79,529-537中记载的方法或以此为基准的方法来合成。工序(a)：化合物15的合成在氩气氛围下，将由化合物9(2.66g,5.00mmol)、2-溴-1,1-二甲氧基乙烷(3.72ml,31.5mmol)、碳酸铯(11.7g,35.8mmol)、及干燥二甲基甲酰胺(60ml)形成的混合物在110℃下搅拌了16小时。冷却后，加入水，用己烷/乙酸乙酯混合溶剂(1∶1)进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去溶剂。用硅胶快速色谱(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1)纯化残渣，以白色的半固体(2.83g)的形式得到了化合物15。收率91％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.21(d,j＝6.1hz,6h),1.35(d,j＝6.1hz,6h),3.23(s,6h),3.67(s,3h),3.81(s,3h),3.93(s,3h),4.27(sep,j＝6.1hz,1h),4.41-4.46(m,3h),4.50(sep,j＝6.1hz,1h),6.66(s,1h),6.72-6.76(m,3h),6.76(d,j＝1.7hz,1h),6.79(d,j＝8.3hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc30h38brno8(m+):619.1781.found:619.1782.工序(b)：化合物10的合成在氩气氛围下，在0℃下向化合物15(1.84g,2.97mmol)的二氯甲烷(110ml)溶液中加入三氟甲磺酸三甲基硅酯(270μl,1.49mmol)。在0℃下搅拌1.5小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，将混合物升温至室温，然后在该温度下搅拌30分钟。加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶快速色谱(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化残渣，以白色固体(1.50g)的形式得到了化合物10。收率91％。熔点165-166℃(二乙基醚/己烷混合溶剂)。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.35(d,j＝6.1hz,3h),1.38(d,j＝6.1hz,3h),1.42(d,j＝6.1hz,6h),3.41(s,3h),3.93(s,3h),3.98(s,3h),4.53(sep,j＝6.1hz,1h),4.66(sep,j＝6.1hz,1h),6.93(d,j＝7.6hz,1h),6.95(d,j＝1.9hz,1h),6.99(dd,j＝1.9and8.2hz,1h),7.02(s,1h),7.05(d,j＝8.2hz,1h),7.07(s,1h),9.28(d,j＝7.6hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc28h31brno6[(m+h)+]:556.13347.found:556.13474.化学式9工序(a)：化合物11a的合成在氩气氛围下，在-78℃下，向市售的、或者通过本身公知的方法或以其为基准的方法合成的化合物17a(13.8g,39.1mmol)的四氢呋喃(120ml)溶液滴加叔丁基锂戊烷溶液(1.35m,60.9ml,82.2mmol)，在该温度下搅拌1小时。在-78℃下滴加了硼酸三甲酯(6.54ml,58.7mmol)后，在该温度下搅拌1小时，升温至室温，在该温度下搅拌1小时。在反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中一点一点地加入乙酸，使其为ph＝3。然后，用二氯甲烷进行萃取，用水、饱和碳酸氢钠水溶液及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去二氯甲烷后，用己烷清洗残渣，以淡黄色固体(12.3g)的形式得到了化合物11a。收率99％。化学式10工序(a)：化合物19的合成在氩气氛围下，向市售的、或者通过本身公知的方法或以其为基准的方法合成的化合物18(5.01g,36.2mmol)的干燥二甲基甲酰胺(30ml)溶液依次加入碳酸钾(5.00g,36.2mmol)、碘化钾(6.02g,36.3mmol)及2-溴丙烷(4.42ml,47.1mmol)。将混合物在40℃下搅拌21小时。冷却后，加入2m盐酸，用乙酸乙酯进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去乙酸乙酯。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1～1∶1)纯化残渣，以白色固体(4.25g)的形式得到了化合物19。收率65％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.42(d,j＝6.1hz,6h),4.74(sep,j＝6.1hz,1h),5.94(brs,1h),6.96(d,j＝8.2hz,1h),7.41(dd,j＝2.0and8.0hz,1h),7.45(d,j＝2.0hz,1h),9.83(s,1h).工序(b)：化合物20的合成在氩气氛围下，向化合物19(3.89g,21.6mmol)的干燥丙酮(40ml)溶液依次加入碳酸钾(3.87g,36.2mmol)及溴化苄(3.33ml,28.0mmol)。将混合物加热回流21小时。冷却后，加入2m盐酸，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用乙酸乙酯进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去乙酸乙酯。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)纯化残渣，以白色固体(5.71g)的形式得到了化合物20。收率98％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.41(d,j＝6.0hz,6h),4.68(sep,j＝6.0hz,1h),5.17(s,2h),7.00(d,j＝8.2hz,1h),7.29-7.47(m,7h),9.80(s,1h).工序(c)：化合物21的合成在氩气氛围下，在0℃下向化合物20(1.02g,3.79mmol)的二氯甲烷(12ml)溶液加入间氯过氧苯甲酸(含有水约30％,1.31g)。在0℃下搅拌18小时后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，升温至室温，用二氯甲烷进行萃取。用水清洗萃取液，并用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去乙酸乙酯。在氩气氛围下，将残渣、碳酸钾(1.27g,4.28mmol)、及甲醇(13ml)的混合物在室温下搅拌30分钟，然后减压蒸馏除去甲醇。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1～1∶1～乙酸乙酯)纯化残渣，以黄色油状物(785mg)的形式得到了化合物21。收率80％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.29(d,j＝6.0hz,6h),4.34(sep,j＝6.0hz,1h),5.01(s,2h),5.13(brs,1h),6.31(dd,j＝2.8and8.6hz,1h),6.45(d,j＝2.8hz,1h),6.80(d,j＝8.6hz,1h),7.27-7.41(m,5h).工序(d)：化合物22的合成在氩气氛围下，在0℃下向化合物21(785mg,3.04mmol)及n,n-二异丙基乙胺(1.06ml,6.08mmol)的二氯甲烷(11.5ml)溶液加入氯二甲醚(0.35ml,4.56mmol)，在该温度下搅拌1小时。升温至室温，在该温度下搅拌18小时，然后加入28％氨水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1～1∶1～乙酸乙酯)纯化残渣，以淡黄色油状物(856mg)的形式得到了化合物22。收率93％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.31(d,j＝6.2hz,6h),3.45(s,3h),4.38(sep,j＝6.1hz,1h),5.08(s,2h),5.09(s,2h),6.57(dd,j＝2.9,8.7hz,1h),6.68(d,j＝2.8hz,1h),6.86(d,j＝8.7hz,1h),7.28-7.45(m,5h).工序(e)：化合物17b的合成在氩气氛围下，在0℃下向化合物22(201mg,0.663mmol)的干燥二甲基甲酰胺(3.3ml)溶液加入n-溴代琥珀酰亚胺(119mg,0.668mmol)。在0℃下搅拌2小时，然后加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)纯化残渣，以淡黄色油状物(232mg)的形式得到了化合物17b。收率92％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.32(d,j＝6.1hz,6h),3.48(s,3h),4.40(sep,j＝6.1hz,1h),5.09(s,2h),5.10(s,2h),6.83(s,1h),7.10(s,1h),7.28-7.43(m,5h).工序(f)：化合物11b的合成在氩气氛围下，在-100℃下向化合物17b(574mg,1.51mmol)的四氢呋喃(9.5ml)溶液滴加正丁基锂己烷溶液(1.50m,1.1ml,1.66mmol)，并在该温度下搅拌20分钟。在-100℃下滴加硼酸三甲酯(0.30ml,2.67mmol)后，升温至室温，在该温度下搅拌1小时。向反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中一点一点地加入乙酸，使其为ph＝3。然后，用二氯甲烷进行萃取，用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去二氯甲烷后，用己烷清洗残渣，以白色固体(379mg)的形式得到了化合物11b。收率73％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.32(d,j＝6.2hz,6h),3.46(s,3h),4.45(sep,1h,6.1hz),5.15(s,2h),5.16(s,2h),6.32(brs,2h),6.81(s,1h),7.40(s,1h),7.29-7.45(m,5h).化学式11工序(a)：化合物17c的合成在氩气氛围下，在0℃下向化合物23(1.20mg,3.43mmol)的干燥二甲基甲酰胺(20ml)溶液加入n-溴代琥珀酰亚胺(0.64g,3.60mmol)。在0℃下搅拌2小时后，加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝7∶1)纯化残渣，以白色固体(1.23g)的形式得到了化合物17c。收率83％。工序(b)：化合物11c的合成在氩气氛围下，在-78℃下向化合物17c(1.22g,2.87mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液滴加正丁基锂己烷溶液(1.54m,2.05ml,3.16mmol)，在该温度下搅拌1小时。在-78℃下滴加硼酸三甲酯(0.48ml,4.31mmol)后，升温至室温，在该温度下搅拌1小时。向反应溶液中加入饱和氯化铵水溶液，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中一点一点地加入乙酸，使其为ph＝3。然后，用二氯甲烷进行萃取，用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去二氯甲烷后，用己烷清洗残渣，以淡黄色固体(905mg)的形式得到了化合物11c。收率89％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ3.46(s,3h),5.12(s,2h),5.16(s,2h),5.18(s,2h),5.93(s,2h),6.83(s,1h),7.25-7.37(s,6h),7.42-7.46(m,5h).化学式12工序(a)：化合物16a的合成在氩气氛围下，将由化合物10(290mg,0.521mmol)、化合物11a(497mg,1.56mmol)、双(二亚苄基丙酮)钯(0)(30.0mg,52.1μmol)、1,1’-双(二苯基膦)二茂铁(28.9mg,52.1μmol)、na2co3(365mg,3.44mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(12ml)、及脱气水(1.0ml)形成的混合物加热回流24小时。冷却后，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶快速色谱(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1)纯化残渣，以淡褐色固体(302mg)的形式得到了化合物16a。收率77％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ0.98-1.33(m,6h),1.40-1.48(m,6h),3.22(brs,3h),3.43(brs,3h),3.61(brs,6h),3.84(brs,3h),4.20-4.43(m,1h),4.63-4.95(m,3h),5.06-5.16(m,2h),6.48-7.50(m,13h),9.27(d,j＝7.5hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc44h48no10[(m+h)+]:750.32782.found:750.32788.工序(a)：化合物16b的合成在氩气氛围下，将由化合物10(186mg,0.334mmol)、化合物11b(173mg,0.500mmol)、双(二亚苄基丙酮)钯(0)(19.6mg,34.1μmol)、1,1’-双(二苯基膦)二茂铁(18.3mg,33.0μmol)、na2co3(233mg,2.20mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(15ml)、及脱气水(1ml)形成的混合物加热回流24小时。冷却后，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶快速色谱(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化残渣，以淡褐色固体(55.3mg)的形式得到了化合物16b。收率94％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ1.02-1.31(m,12h),1.42(d,j＝6.1hz,6h),3.23(brs,3h),3.42(s,3h),3.60(s,3h),3.82(s,3h),4.14-4.42(m,2h),4.66(sep,j＝6.1hz,1h),4.69-4.93(m,2h),5.02-5.13(m,2h),6.57(brs,0.5h),6.66(brs,0.5h),6.75-6.90(m,3.5h),6.91(d,j＝7.6hz,1h),6.96-7.02(m,0.5h),7.04(s,1h),7.20-7.33(m,2h),7.34-7.39(m,2h),7.42-7.47(m,2h),9.28(d,j＝7.6hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc46h52no10[(m+h)+]:778.35912.found:778.35688.工序(a)：化合物16c的合成在氩气氛围下，将由化合物10(1.23g,2.21mmol)、化合物11c(1.31mg,3.32mmol)、双(二亚苄基丙酮)钯(0)(123mg,0.213mmol)、1,1’-双(二苯基膦)二茂铁(132mg,0.237mmol)、na2co3(1.55g,14.6mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(80ml)、及脱气水(6ml)形成的混合物加热回流24小时。冷却后，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶快速色谱(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)纯化残渣，以淡黄色固体(1.83g)的形式得到了化合物16c。收率100％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ1.03-1.30(m,6h),1.42(d,j＝6.1hz,6h),3.23(brs,3h),3.42(s,3h),3.56(brs,3h),3.82(s,3h),4.23-4.40(m,1h),4.66(sep,j＝6.1hz,1h),4.79-4.93(m,4h),5.04-5.14(m,2h),6.63(brs,0.5h),6.71-6.90(m,4.5h),6.91(d,j＝7.6hz,1h),7.03(s,1h),7.20-7.38(m,9h),7.40-7.45(m,2h),9.27(d,j＝7.6hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc50h52no10[(m+h)+]:826.35912.found:826.36040.化学式13工序(a)：化合物13a的合成在氩气氛围下，用封管将由化合物16a(30.0mg,40.0μmol)、对甲苯磺酸一水合物(30.4mg,0.160mmol)、甲醇(1.5ml)形成的混合物在65℃下加热搅拌18小时。冷却后，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化残渣，以淡黄色固体(25.0mg)的形式得到了化合物13a。收率93％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.35(d,j＝6.1hz,3h),1.37(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),3.45(s,3h),3.49(s,3h),3.96(s,3h),4.55(sep,j＝6.1hz,1h),4.69(sep,j＝6.1hz,1h),5.17(s,2h),6.76(s,1h),6.93(s,1h),7.01(d,j＝7.4hz,1h),7.09(s,1h),7.14(d,j＝1.8hz,1h),7.15(d,j＝8.2hz,1h),7.17(s,1h),7.20(dd,j＝1.8and8.2hz,1h),7.27-7.33(m,1h),7.33-7.40(m,2h),7.40-7.45(m,2h),9.19(d,j＝7.4hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc41h40no8[(m+h)+]:674.27539.found:674.27820.工序(a)：化合物13b的合成在氩气氛围下，将由化合物16b(202mg,0.260mmol)、对甲苯磺酸一水合物(198mg,1.04mmol)、甲醇(10ml)形成的混合物加热回流18小时。冷却后，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化残渣，以淡黄色固体(161mg)的形式得到了化合物13b。收率88％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.19(d,j＝6.1hz,3h),1.20(d,j＝6.1hz,3h),1.35(d,j＝6.1hz,3h),1.36(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),3.44(s,3h),3.98(s,3h),4.02(sep,j＝6.1hz,1h),4.54(sep,j＝6.1hz,1h),4.69(sep,j＝6.1hz,1h),5.15(s,2h),6.77(s,1h),6.94(s,1h),7.00(d,j＝7.4hz,1h),7.08(s,1h),7.11-7.16(m,3h),7.17(s,1h),7.27-7.33(m,1h),7.33-7.39(m,2h),7.40-7.45(m,2h),9.18(d,j＝7.4hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc43h44no8[(m+h)+]:702.30669.found:702.30518.工序(a)：化合物13c的合成在氩气氛围下，将由化合物16c(1.77g,2.14mmol)、对甲苯磺酸一水合物(1.63g,8.57mmol)、甲醇(60ml)形成的混合物加热回流18小时。冷却后，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。将残渣用二氯甲烷-己烷进行重结晶，以白色固体(1.35g)的形式得到了化合物13c。收率84％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.34(d,j＝6.1hz,3h),1.37(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,3h),3.44(s,3h),3.97(s,3h),4.54(sep,j＝6.1hz,1h),4.69(sep,j＝6.1hz,1h),4.76(d,j＝12.4hz,1h),4.78(d,j＝12.4hz,1h),5.19(s,2h),6.91(s,1h),6.98(s,1h),7.00(d,j＝7.4hz,1h),7.08(s,1h),7.10(s,1h),7.12(s,1h),7.13-7.16(m,2h),7.23-7.39(m,8h),7.43-7.46(m,2h),9.20(d,j＝7.4hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc47h44no8[(m+h)+]:750.30669.found:750.30535.化学式14工序(a)：化合物24a的合成在氩气氛围下，向由化合物13a(405mg,0.601mmol)、乙酸乙酯(15ml)及乙醇(15ml)形成的溶液依次加入钯碳(pd：10％,80.8mg)及甲酸铵(1.14g,18.0mmol)，加热回流1小时。冷却后，用硅藻土对反应混合物进行过滤。将滤液浓缩，用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)纯化残渣，以淡黄色固体(328mg)的形式得到了化合物24a。收率93％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.36(d,j＝6.0hz,3h),1.37(d,j＝6.0hz,3h),1.43(d,j＝6.0hz,6h),3.45(s,3h),3.51(s,3h),3.97(s,3h),4.57(sep,j＝6.0hz,1h),4.70(sep,j＝6.0hz,1h),5.95(brs,1h),6.71(s,1h),6.99(s,1h),6.99(d,j＝7.3hz,1h),7.08(s,1h),7.15(d,j＝8.1hz,1h),7.15(d,j＝1.7hz,1h),7.16(s,1h),7.19(dd,j＝1.7and8.1hz,1h),9.18(d,j＝7.3hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc34h34no8[(m+h)+]:584.22844.found:584.22588.工序(a)：化合物24b的合成在氩气氛围下，向由化合物13b(84.9mg,0.121mmol)、乙酸乙酯(5ml)及乙醇(5ml)形成的溶液依次加入钯碳(pd：10％,17mg)及甲酸铵(233mg,3.70mmol)，加热回流30分钟。冷却后，用硅藻土对反应混合物进行过滤。将滤液浓缩，用硅胶柱色谱(丙酮)纯化残渣，以淡黄色固体(71.2mg)的形式得到了化合物24b。收率97％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.19(d,j＝6.0hz,6h),1.35(d,j＝6.0hz,3h),1.36(d,j＝6.0hz,3h),1.44(d,j＝6.0hz,6h),3.45(s,3h),3.98(s,3h),4.01(sep,j＝6.0hz,1h),4.55(sep,j＝6.0hz,1h),4.70(sep,j＝6.0hz,1h),5.92(s,1h),6.68(s,1h),6.99(d,j＝7.3hz,1h),6.99(s,1h),7.09(s,1h),7.12-7.17(m,3h),7.17(s,1h),9.18(d,j＝7.3hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc36h38no8[(m+h)+]:612.25974.found:612.26035.工序(a)：化合物24c的合成在氩气氛围下，向由化合物13c(200mg,0.267mmol)、乙酸乙酯(10ml)及乙醇(10ml)形成的溶液依次加入钯碳(pd：10％,40mg)及甲酸铵(505mg,8.01mmol)，加热回流1小时。冷却后，用硅藻土对反应混合物进行过滤。将滤液浓缩，用硅胶柱色谱(丙酮)纯化残渣，以淡黄色固体(146mg)的形式得到了化合物24c。收率96％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ1.21(d,j＝6.0hz,3h),1.25(d,j＝6.0hz,3h),1.31(d,j＝6.0hz,6h),3.33(s,3h),3.89(s,3h),4.58(sep,j＝6.0hz,1h),4.74(sep,j＝6.0hz,1h),6.74(s,1h),6.84(s,1h),6.90(s,1h),7.08-7.12(m,2h),7.26(d,j＝7.3hz,1h),7.27(d,j＝8.4hz,1h),7.41(s,1h),9.04(brs,1h),9.08(d,j＝7.3hz,1h),9.76(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc33h32no8[(m+h)+]:570.21279.found:570.21008.化学式15工序(a)：化合物25a的合成在氩气氛围下，向化合物24a(150mg,0.257mmol)的干燥丙酮(7ml)溶液依次加入3-(二甲基氨基)丙基氯盐酸盐(48.7mg,0.308mmol)、碳酸钾(178mg,1.29mmol)，然后将混合物加热回流24小时。冷却后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，在减压下浓缩混合物。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去二氯甲烷。用chromatorexnh-dm1020柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝3∶2)纯化残渣，以淡黄色固体(120mg)的形式得到了化合物25a。收率70％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.36(d,j＝6.1hz,3h),1.36(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),2.01(quin,j＝7.0hz,2h),2.25(s,6h),2.44(t,j＝7.0hz,2h),3.45(s,3h),3.47(s,3h),3.97(s,3h),4.07(t,j＝7.0hz,2h),4.56(sep,j＝6.1hz,1h),4.69(sep,j＝6.1hz,1h),6.74(s,1h),6.94(s,1h),7.00(d,j＝7.4hz,1h),7.09(s,1h),7.16(d,j＝1.8hz,1h),7.16(d,j＝8.2hz,1h),7.18(s,1h),7.21(dd,j＝1.8and8.2hz,1h),9.18(d,j＝7.4hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc39h45n2o8[(m+h)+]:669.31759.found:669.31472.化学式16工序(a)：化合物25b的合成在氩气氛围下，向化合物24b(30.0mg,49.0μmol)的干燥丙酮(2ml)溶液依次加入3-(二甲基氨基)丙基氯盐酸盐(9.3mg,58.8μmol)、碳酸钾(40.6mg,0.294mmol)，然后将混合物加热回流21小时。冷却后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，在减压下浓缩混合物。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1～二氯甲烷∶甲醇＝1∶1)纯化残渣，以淡黄色固体(11.6mg)的形式得到了化合物25b。收率34％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.17(d,j＝6.1hz,3h),1.17(d,j＝6.1hz,3h),1.34(d,j＝6.1hz,3h),1.35(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),2.00(quin,j＝6.8hz,2h),2.25(s,6h),2.47(t,j＝7.3hz,2h),3.44(s,3h),3.97(s,3h),3.97(sep,j＝6.1hz,1h),4.07(t,j＝6.4hz,2h),4.53(sep,j＝6.1hz,1h),4.70(sep,j＝6.1hz,1h),6.76(s,1h),6.96(s,1h),7.02(d,j＝7.4hz,1h),7.10(s,1h),7.11(s,1h),7.14(s,2h),7.17(s,1h),9.22(d,j＝7.4hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc41h49n2o8[(m+h)+]:697.34889.found:697.35000.化学式17工序(a)：化合物25c的合成在氩气氛围下，向化合物24c(40.3mg,70.8μmol)的干燥丙酮(10ml)溶液依次加入2-(二甲基氨基)乙基氯盐酸盐(51.0mg,0.354mmol)、碘化钠(10.0mg,66.7μmol)、碳酸钾(147mg,1.06mmol)，然后将混合物加热回流10小时。暂时冷却后，追加2-(二甲基氨基)乙基氯盐酸盐(51.0mg,0.354mmol)及碳酸钾(147mg,1.06mmol)，进一步将混合物加热回流12小时。冷却后，用二氯甲烷稀释，用硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩后，用chromatorexnh-dm1020柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝1∶2～乙酸乙酯)纯化残渣，以淡黄色固体(27.0mg)的形式得到了化合物25c。收率54％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ1.34(d,j＝6.1hz,3h),1.34(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),2.28(s,6h),2.34(s,6h),2.55-2.65(m,2h),2.78(t,j＝5.8hz,2h),3.44(s,3h),3.67(t,j＝5.8hz,2h),3.96(s,3h),4.12(t,j＝5.8hz,2h),4.53(sep,j＝6.1hz,1h),4.70(sep,j＝6.1hz,1h),6.76(s,1h),6.96(s,1h),7.02(d,j＝7.4hz,1h),7.10(s,1h),7.11(d,j＝1.8hz,1h),7.15(d,j＝8.1hz,1h),7.17(s,1h),7.18(dd,j＝1.8and8.1hz,1h),9.22(d,j＝7.4hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc41h50n3o8[(m+h)+]:712.35979.found:712.36040.化学式18工序(a)：化合物25d的合成在氩气氛围下，向化合物24c(146mg,0.256mmol)的干燥丙酮(25ml)溶液依次加入3-(二甲基氨基)丙基氯盐酸盐(194mg,1.23mmol)、碳酸钾(708mg,5.12mmol)，然后将混合物加热回流48小时。冷却后，加入饱和碳酸氢钠水溶液，在减压下浓缩混合物。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥后，减压蒸馏除去二氯甲烷。将残渣用二氯甲烷-己烷进行重结晶，以淡褐色固体(134mg)的形式得到了化合物25d。收率71％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.34(d,j＝6.1hz,3h),1.35(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),1.81(quin,j＝6.9hz,2h),2.00(quin,j＝6.8hz,2h),2.23(s,6h),2.25(s,6h),2.31-2.41(m,2h),2.47(t,j＝7.3hz,2h),3.44(s,3h),3.62(t,j＝6.3hz,2h),3.97(s,3h),4.08(t,j＝6.5hz,2h),4.53(sep,j＝6.1hz,1h),4.70(sep,j＝6.1hz,1h),6.75(s,1h),6.96(s,1h),7.01(d,j＝7.3hz,1h),7.09(s,1h),7.11(d,j＝1.8hz,1h),7.14(d,j＝8.1hz,1h),7.16(s,1h),7.18(dd,j＝1.8and8.1hz,1h),9.22(d,j＝7.3hz,1h).hrdartmsm/z.calcdforc43h54n3o8[(m+h)+]:740.39109.found:740.39380.化学式19工序(b)：化合物26a的合成在氩气氛围下，在室温下向化合物25a(60.0mg,89.7μmol)的干燥二氯甲烷(4.0ml)溶液滴加氯化铝-硝基苯溶液(1.0m,540μl,0.540mmol)，在该温度下搅拌18小时。在反应溶液中加入由碳酸氢钠(200mg,2.38mmol)、罗谢尔盐(440mg,1.56mmol)及水(7.0ml)形成的混合溶液，剧烈搅拌1小时后，减压蒸馏除去二氯甲烷及水。向残渣中加入水，在减压下共沸除去硝基苯。向残渣中加入水，使其充分悬浮后，抽滤滤取固体。在减压干燥后，以淡灰色固体(47.5mg)的形式得到了脱保护体。收率91％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ1.85(quin,j＝6.8hz,2h),2.14(s,6h),2.34(t,j＝7.1hz,2h),3.39(s,3h),3.40(s,3h),3.87(s,3h),4.04(t,j＝6.5hz,2h),6.78(s,1h),7.00-7.04(m,2h),7.08(s,1h),7.19(s,1h),7.21(s,1h),7.22(d,j＝7.3hz,1h),7.24(d,j＝8.7hz,1h),9.00(d,j＝7.3hz,1h),9.39(brs,1h).向脱保护体(20.0mg,34.2μmol)的二氯甲烷(1.0ml)悬浮液加入三氟乙酸(1.0ml)，在室温下搅拌30分钟。减压蒸馏除去溶剂后，用柱色谱(sephadexlh-20，含有0.1％v/v三氟乙酸的甲醇)纯化残渣，以褐色固体(21.6mg)的形式得到了化合物26a。收率90％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ2.13(quin,j＝6.9hz,2h),2.82(s,3h),2.83(s,3h),3.21(quin,j＝5.1hz,2h),3.40(s,3h),3.40(s,3h),3.88(s,3h),4.13(t,j＝6.1hz,2h),6.81(s,1h),7.00-7.04(m,2h),7.17(s,1h),7.19(s,1h),7.21(s,1h),7.25(d,j＝7.3hz,1h),7.25(d,j＝9.2hz,1h),9.01(d,j＝7.3hz,1h),9.43(brs,2h),9.98(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc33h33n2o8[(m-cf3coo)+]:585.22369.found:585.22208.化学式20工序(b)：化合物26b的合成在氩气氛围下，在室温下向化合物25b(20.0mg,28.7μmol)的干燥二氯甲烷(5.0ml)溶液滴加氯化铝-硝基苯溶液(1.0m,218μl,0.218mmol)，并在该温度下搅拌48小时。在反应溶液中加入由碳酸氢钠(55.0mg,0.654mmol)、罗谢尔盐(185mg,0.654mmol)及水(3.3ml)形成的混合溶液，剧烈搅拌1小时后，减压蒸馏除去二氯甲烷及水。向残渣中加入水，在减压下共沸除去硝基苯后，进行减压干燥。向残渣加入二氯甲烷(2.0ml)及三氟乙酸(2.0ml)，然后减压蒸馏除去溶剂。用柱色谱(sephadexlh-20，含有0.1％v/v三氟乙酸的水～含有0.1％v/v三氟乙酸的水∶甲醇＝1∶1～含有0.1％v/v三氟乙酸的甲醇)纯化残渣，以褐色固体(19.3mg)的形式得到了化合物26b。收率98％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ2.12(quin,j＝5.5hz,2h),2.82(s,6h),3.28(t,j＝7.8hz,2h),3.37(s,3h),3.90(s,3h),4.12(t,j＝5.9hz,2h),6.81(s,1h),6.92(s,1h),6.94(d,j＝2.0hz,1h),6.95(dd,j＝2.0and8.0hz,1h),7.11(s,1h),7.18(s,1h),7.21(d,j＝7.4hz,1h),7.23(d,j＝8.0hz,1h),9.03(d,j＝7.4hz,1h),9.04(brs,1h),9.41(brs,1h),9.53(brs,1h),9.98(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc32h31n2o8[(m-cf3coo)+]:571.20804.found:571.20608.化学式21工序(b)：化合物26c的合成在氩气氛围下，在室温下向化合物25c(13.4mg,18.8μmol)的干燥二氯甲烷(1.0ml)溶液滴加氯化铝-硝基苯溶液(1.0m,120μl,0.120mmol)，并在该温度下搅拌48小时。在反应溶液中加入由碳酸氢钠(30.3mg,0.361mmol)、罗谢尔盐(102mg,0.361mmol)及水(0.7ml)形成的混合溶液，剧烈搅拌1小时后，减压蒸馏除去二氯甲烷及水。向残渣中加入水，在减压下共沸除去硝基苯。向残渣中加入水，使其充分悬浮后，抽滤滤取固体。在得到的固体的二氯甲烷(1.0ml)悬浮液中加入三氟乙酸(1.0ml)，减压蒸馏除去溶剂。用柱色谱(sephadexlh-20，含有0.1％v/v三氟乙酸的甲醇)纯化残渣，以褐色固体(15.0mg)的形式得到了化合物26c。收率93％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ2.82(s,6h),2.88(s,6h),3.40(s,3h),3.54(t,j＝4.8hz,2h),3.90(s,3h),3.90-3.98(m,2h),4.44(t,j＝5.0hz,2h),6.87(s,1h),7.01(d,j＝2.1hz,1h),7.03(dd,j＝2.1and8.1hz,1h),7.14(s,1h),7.21(s,1h),7.25(d,j＝8.1hz,1h),7.27(d,j＝7.4hz,1h),7.35(s,1h),9.02(d,j＝7.4hz,1h),9.48(brs,1h),10.04(brs,3h).hrdartmsm/z.calcdforc35h38n3o8[(m-2cf3coo-h)+]:628.26589.found:628.26746.化学式22工序(b)：化合物26d的合成在氩气氛围下，在室温下向化合物25d(90.2mg,0.122mmol)的干燥二氯甲烷(19.5ml)溶液滴加氯化铝-硝基苯溶液(1.0m,780μl,0.780mmol)，并在该温度下搅拌84.5小时。在反应溶液中加入由碳酸氢钠(166mg,1.97mmol)、罗谢尔盐(557mg,1.97mmol)及水(3.9ml)形成的混合溶液，剧烈搅拌1小时后，减压蒸馏除去二氯甲烷及水。向残渣中加入水，在减压下共沸除去硝基苯。向残渣中加入水，使其充分悬浮后，抽滤滤取固体。在减压干燥后，以褐色固体(80.0mg)的形式得到了脱保护体。收率100％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ1.63-1.70(m,2h),1.82-1.89(m,2h),2.14(s,6h),2.17(s,6h),2.23-2.30(m,2h),2.36-2.43(m,2h),3.39(s,3h),3.53-3.60(m,2h),3.88(s,3h),4.01-4.08(m,2h),6.76(s,1h),6.97-7.02(m,2h),7.07(s,1h),7.15(s,1h),7.19(s,1h),7.20-7.24(m,2h),8.99(d,j＝7.3hz,1h).向脱保护体(78.3mg,0.106mmol)的二氯甲烷(3.0ml)悬浮液加入三氟乙酸(3.0ml)，在室温下搅拌30分钟。减压蒸馏除去溶剂后，用柱色谱(sephadexlh-20，含有0.1％v/v三氟乙酸的甲醇)纯化残渣，以褐色固体(94.2mg)的形式得到了化合物26d。收率100％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ1.92-2.00(m,2h),2.09-2.17(m,2h),2.81(s,6h),2.83(s,6h),3.06-3.13(m,2h),3.21(t,j＝7.2hz,2h),3.40(s,3h),3.59-3.70(m,2h),3.90(s,3h),4.13(t,j＝6.2hz,2h),6.79(s,1h),7.01(d,j＝2.0hz,1h),7.02(dd,j＝2.0and8.0hz,1h),7.17(s,1h),7.19(s,1h),7.21(s,1h),7.25(d,j＝7.4hz,1h),7.26(d,j＝8.0hz,1h),9.00(d,j＝7.4hz,1h),9.50(brs,1h),9.84(brs,1h),9.87(brs,1h),10.05(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc37h42n3o8[(m-2cf3coo-h)+]:656.29719.found:656.29442.[氮杂片螺素n衍生物的合成法]化学式23化学式24工序(a)：化合物29a的合成在氩气氛围下，在室温下向市售的、或者通过本身公知的方法或以其为基准的方法合成的化合物28a(4.33g,28.3mmol)的干燥四氢呋喃(120ml)溶液滴加二碳酸二叔丁酯(7.20ml,31.2mmol)，加热回流2小时。冷却后，减压蒸馏除去溶剂。将残渣用乙醚进行重结晶，以淡褐色固体(6.68g)的形式得到了化合物29a。收率93％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.51(s,9h),3.84(s,3h),3.87(s,3h),6.47(brs,1h),6.72(dd,j＝2.2and8.6hz,1h),6.78(d,j＝8.6hz,1h),7.18(br,1h).hrdartmsm/z.calcdforc13h20no4[(m+h)+]:254.1392.found:254.1399.工序(a)：化合物29b的合成按照化合物28a的合成中记载的方法，使市售的、或者通过本身公知的方法或以其为基准的方法合成的化合物28b(6.87g,30.0mmol)发生反应。用硅胶快速色谱(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化后，以淡褐色固体(3.10g)的形式得到了化合物29b。收率31％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.50(s,9h),3.83(s,3h),5.12(s,2h),6.37(brs,1h),6.81(s,2h),7.12(brs,1h),7.27-7.32(m,1h),7.33-7.39(m,2h),7.42-7.47(m,2h).hrdartmsm/z.calcdforc19h23brno4(m+):329.1627.found:329.1639.工序(b)：化合物30a的合成在氩气氛围下，在0℃下向化合物29a(333mg,1.31mmol)的干燥四氢呋喃(5ml)溶液加入n-溴代琥珀酰亚胺(254mg,1.43mmol)。在0℃下搅拌1小时，然后加入水，升温至室温。用二氯甲烷进行萃取后，用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)纯化残渣，以淡黄色固体(377mg)的形式得到了化合物30a。收率87％。1hnmr(300mhz,cdcl3):δ1.53(s,9h),3.84(s,3h),3.91(s,3h),6.79(brs,1h),6.97(s,1h),7.81(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc13h18brno4(m+):331.0419.found:331.0425.工序(b)：化合物30b的合成按照化合物30a的合成中记载的方法使化合物29b(3.00g,9.11mmol)发生反应。用硅胶快速色谱(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1)纯化后，以淡黄色固体(3.38g)的形式得到了化合物30b。收率91％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.53(s,9h),3.82(s,3h),5.13(s,2h),6.75(brs,1h),6.99(s,1h),7.28-7.33(m,1h),7.34-7.39(m,2h),7.45-7.50(m,2h),7.90(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc19h22brno4(m+):407.0732.found:409.0743.工序(c)：化合物12a的合成在氩气氛围下，在室温下向由化合物30a(377mg,1.13mmol)、[1,1’-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(ii)二氯甲烷加合物(46.9mg,57.4μmol)及1,4-二烷(6.0ml)形成的溶液依次加入三乙胺(640μl,4.54mmol)及频哪醇硼烷(490μl,3.40mmol)，加热回流2.5小时。冷却后，加入饱和氯化铵水溶液，蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥。减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝50∶1)纯化残渣，以淡黄色固体(282mg)的形式得到了化合物12a。收率65％。1hnmr(400mhz,cdcl3):δ1.35(s,12h),1.52(s,9h),3.88(s,3h),3.94(s,3h),7.15(s,1h),7.92(brs,1h),8.67(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc19h30bno6(m+):379.2166.found:379.2169.工序(c)：化合物12b的合成按照化合物12a的合成中记载的方法使化合物30b(3.38g,8.28mmol)发生反应。用硅胶快速色谱(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)纯化后，以淡黄色固体(2.72g)的形式得到了化合物12b。收率72％。1hnmr(300mhz,cdcl3):δ1.35(s,12h),1.52(s,9h),3.86(s,3h),5.19(s,2h),7.18(s,1h),7.27-7.32(m,1h),7.33-7.39(m,2h),7.47-7.51(m,2h),8.02(brs,1h),8.63(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc25h34bno6(m+):455.2479.found:455.2485.化学式25工序(a)：化合物27a的合成在氩气氛围下，用封管将由化合物10(100mg,0.180mmol)、化合物12a(114mg,0.301mmol)、pd(pph3)4(23.2mg,20.1μmol)、na2co3(141mg,1.32mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(5.0ml)、及脱气水(0.5ml)构成的混合物在85℃下加热搅拌24小时。冷却后，减压蒸馏除去溶剂。向残渣中加入水，用二氯甲烷进行萃取。用水及饱和食盐水依次清洗萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去二氯甲烷。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1～2∶1～1∶1～乙酸乙酯)纯化残渣，以淡黄色半固体(115mg)的形式得到了化合物27a。收率88％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ1.02(d,j＝6.1hz,1.72h),1.09(d,j＝6.1hz,1.72h),1.11(d,j＝6.1hz,1.28h),1.16(d,j＝6.1hz,1.28h),1.30(d,j＝6.1hz,6h),1.37(s,9h),3.29(s,1.28h),3.29(s,1.72h),3.48(s,1.72h),3.53(s,1.28h),3.53(s,1.72h),3.56(s,1.28h),3.69(s,1.72h),3.70(s,1.28h),3.71(s,1.28h),3.74(s,1.72h),4.26(sep,j＝6.1hz,0.57h),4.43(sep,j＝6.1hz,0.43h),4.70(sep,j＝6.1hz,1h),6.52(s,0.57h),6.71(s,0.43h),6.85-7.17(m,4h),7.18(d,j＝7.6hz,0.57h),7.18(d,j＝7.6hz,0.43h),7.34(s,1h),7.35(brs,0.43h),7.44(brs,0.57h),7.60(brs,0.43h),7.85(brs,0.57h),9.20(d,j＝7.6hz,0.57h),9.23(d,j＝7.6hz,0.43h).hrdartmsm/z.calcdforc41h49n2o10[(m+h)+]:729.3387.found:729.3358.工序(a)：化合物27b的合成按照化合物27a的合成中记载的方法使化合物10(100mg,0.180mmol)及化合物12b(137mg,0.302mmol)发生反应。用硅胶柱色谱(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1～2∶1～1∶1～1∶2)纯化后，以淡黄色半固体(131mg)的形式得到了化合物27b。收率91％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ1.02(d,j＝6.1hz,1.67h),1.10(d,j＝6.1hz,1.67h),1.13(d,j＝6.1hz,1.33h),1.17(d,j＝6.1hz,1.33h),1.30(d,j＝6.1hz,6h),1.37(s,9h),3.29(s,1.33h),3.30(s,1.67h),3.49(s,1.67h),3.53(s,1.33h),3.54(s,1.67h),3.57(s,1.33h),3.72(s,1.33h),3.74(s,1.67h),4.28(sep,j＝6.1hz,0.56h),4.44(sep,j＝6.1hz,0.44h),4.71(sep,j＝6.1hz,1h),4.92-5.01(m,2h),6.56(s,0.56h),6.75(s,0.44h),6.86-7.10(m,4h),7.18(d,j＝7.6hz,0.56h),7.19(d,j＝7.6hz,0.44h),7.23-7.47(m,7h),7.64(brs,0.44h),7.89(brs,0.56h),9.21(d,j＝7.6hz,0.56h),9.23(d,j＝7.6hz,0.44h).hrdartmsm/z.calcdforc47h53n2o10[(m+h)+]:805.3700.found:805.3715.化学式26工序(a)：化合物14a的合成在氩气氛围下，在封管中向化合物27a(50.0mg,68.6μmol)及四氢呋喃(3.0ml)溶液滴加四丁基氟化铵四氢呋喃溶液(1.0m,343μl,0.343mmol)，然后在85℃下加热搅拌19小时。冷却后，加入水，蒸馏除去溶剂。对析出的固体进行抽滤，用水及甲醇依次清洗回收的固体，进行真空干燥，由此，以淡褐色固体(33.6mg)的形式得到了化合物14a。收率82％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ1.35(d,j＝6.1hz,6h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),3.45(s,3h),3.47(s,3h),3.96(s,3h),3.99(s,3h),4.54(sep,j＝6.1hz,1h),4.69(sep,j＝6.1hz,1h),6.90(s,1h),6.94(d,j＝7.4hz,1h),6.94(s,1h),7.10(s,1h),7.16(d,j＝8.1hz,1h),7.17(d,j＝1.7hz,1h),7.20(s,1h),7.22(dd,j＝1.7and8.1hz,1h),9.59(d,j＝7.4hz,1h),10.588(s,1h).hrdartmsm/z.calcdforc35h37n2o7[(m+h)+]:597.2601.found:597.2612.工序(a)：化合物14b的合成按照化合物14a的合成中记载的方法使化合物27b(100mg,0.180mmol)发生反应。其结果是以淡褐色固体(78.2mg)的形式得到了化合物14b。收率85％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ1.34(d,j＝6.1hz,3h),1.34(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,3h),1.44(d,j＝6.1hz,3h),3.42(s,3h),3.46(s,3h),3.93(s,3h),4.53(sep,j＝6.1hz,1h),4.68(sep,j＝6.1hz,1h),5.22(s,2h),6.76-6.88(m,2h),7.00-7.30(m,9h),7.43-7.47(m,2h),9.44(brs,1h),11.05(brs,1h).hrdartmsm/z.calcdforc41h41n2o7[(m+h)+]:673.2914.found:673.2939.化学式27工序(a)：化合物8a的合成在氩气氛围下，在-78℃下向化合物14a(20.0mg,33.5μmol)的干燥二氯甲烷(12ml)溶液滴加三氯化硼庚烷溶液(1.0m,235μl,0.235mmol)，并在该温度下搅拌30分钟。然后，升温至室温，并在该温度下搅拌3小时。向反应溶液加入饱和碳酸氢钠水溶液，减压蒸馏除去溶剂。对析出的固体进行抽滤，用水清洗回收的固体，进行真空干燥。用硅胶柱色谱(丙酮)纯化得到的固体，以淡褐色固体(14.2mg)的形式得到了化合物8a。收率71％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ3.34(s,3h),3.39(s,3h),3.78(s,3h),3.86(s,3h),6.87(s,1h),6.98-7.02(m,3h),7.04(d,j＝7.4hz,1h),7.14(s,1h),7.16(s,1h),7.23(d,j＝8.7hz,1h),9.34(s,1h),9.38(d,j＝7.4hz,1h),9.73(brs,1h),11.34(s,1h).hrfabmsm/z.calcdforc29h25n2o7[(m+h)+]:513.1662.found:513.1676.工序(a)：化合物8的合成按照化合物8a的合成中记载的方法使化合物14b(30.0mg,44.6μmol)及三氯化硼庚烷溶液(1.0m,445μl,0.445mmol)发生反应。用硅胶柱色谱(丙酮)纯化得到的粗产物的固体，以淡褐色固体(18.6mg)的形式得到了化合物8。收率84％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ3.36(s,3h),3.39(s,3h),3.86(s,3h),6.84(s,1h),6.89(s,1h),6.98-7.03(m,3h),7.13(s,1h),7.15(s,1h),7.23(d,j＝8.2hz,1h),9.33(s,1h),9.37(d,j＝7.4hz,1h),9.49(s,1h),9.71(s,1h),11.27(s,1h).hrdartmsm/z.calcdforc28h23n2o7[(m+h)+]:499.1505.found:499.1502.化学式28工序(a)：化合物31的合成在氩气氛围下，向由化合物14b(300mg,0.446mmol)、乙酸乙酯(45ml)及乙醇(45ml)形成的溶液依次加入钯碳(pd：10％,60.0mg)及甲酸铵(844mg,13.4mmol)，加热回流30分钟。冷却后，用硅藻土对反应混合物进行过滤。将滤液浓缩，用硅胶柱色谱(丙酮)纯化残渣，以淡黄色固体(258mg)的形式得到了化合物31。收率99％。1hnmr(300mhz,cdcl3):δ1.35(d,j＝6.1hz,3h),1.36(d,j＝6.1hz,3h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),3.44(s,3h),3.50(s,3h),3.97(s,3h),4.55(sep,j＝6.1hz,1h),4.69(sep,j＝6.1hz,1h),5.84(brs,1h),6.87(s,2h),6.94(d,j＝7.4hz,1h),7.09(s,1h),7.14-7.24(m,4h),9.34(brs,1h),9.53(d,j＝7.4hz,1h).化学式29工序(a)：化合物32的合成在氩气氛围下，向化合物31(70.0mg,0.120mmol)的干燥丙酮(15ml)溶液依次加入3-(二甲基氨基)丙基氯盐酸盐(22.8mg,0.144mmol)、碳酸钾(83.0mg,0.601mmol)，然后将混合物加热回流18小时。暂时冷却后，追加3-(二甲基氨基)丙基氯盐酸盐(22.8mg,0.144mmol)及碳酸钾(83.0mg,0.601mmol)，进一步将混合物加热回流5小时。冷却后，用丙酮稀释，用硅藻土过滤。将滤液在减压下浓缩后，用chromatorexdiol柱色谱(乙酸乙酯～二氯甲烷∶甲醇＝10∶1)及chromatorex纯化残渣，以淡黄色固体(39.7mg)的形式得到了化合物32。收率50％。1hnmr(500mhz,cdcl3):δ1.34(d,j＝6.1hz,6h),1.43(d,j＝6.1hz,6h),2.08(quin,j＝6.9hz,2h),2.28(s,6h),2.51(t,j＝7.2hz,2h),3.45(s,6h),3.96(s,3h),4.17(t,j＝6.7hz,2h),4.54(sep,j＝6.1hz,1h),4.68(sep,j＝6.1hz,1h),6.88(s,1h),6.93(d,j＝7.4hz,1h),7.00(s,1h),7.09(s,1h),7.14(d,j＝8.2hz,1h),7.16(d,j＝1.7hz,1h),7.19(s,1h),7.21(dd,j＝1.7and8.2hz,1h),9.59(d,j＝7.4hz,1h),10.58(brs,1h).化学式30工序(b)：化合物33的合成在氩气氛围下，在室温下向化合物32(15.2mg,22.8μmol)的干燥二氯甲烷(5.0ml)溶液滴加氯化铝-硝基苯溶液(1.0m,145μl,0.145mmol)，并在该温度下搅拌72小时。向反应溶液加入由碳酸氢钠(36.7mg,0.437mmol)、罗谢尔盐(123mg,0.437mmol)及水(2.1ml)形成的混合溶液，剧烈搅拌1小时后，减压蒸馏除去二氯甲烷及水。向残渣中加入水，在减压下共沸除去硝基苯，然后进行减压干燥。向残渣加入二氯甲烷(1.0ml)及三氟乙酸(1.0ml)后，减压蒸馏除去溶剂。用柱色谱(sephadexlh-20，含有0.1％v/v三氟乙酸的水～含有0.1％v/v三氟乙酸的水∶甲醇＝1∶1～含有0.1％v/v三氟乙酸的甲醇)进行纯化，褐色固体(15.8mg)的形式得到了化合物33。收率100％。1hnmr(500mhz,dmso-d6):δ2.11-2.18(m,2h),2.82(s,3h),2.83(s,3h),3.20-3.26(m,2h),3.36(s,3h),3.39(s,3h),3.86(s,3h),4.05(t,j＝5.9hz,2h),6.90(s,1h),6.98-7.02(m,3h),7.05(d,j＝7.5hz,1h),7.14(s,1h),7.16(s,1h),7.23(d,j＝8.7hz,1h),9.37(d,j＝7.5hz,1h),9.60(brs,1h),9.75(brs,2h),11.37(brs,1h).试验例1使用了导入egfr基因的baf3细胞的增殖抑制活性的评价对于药剂在酶水平上的活性而言，由于该药剂的细胞膜通透性、脱靶抑制等等，未必与细胞水平的活性直接相关。因此，作为激酶抑制剂在细胞水平上的评价方法，进行了确立了有效性的使用了转导baf3细胞的egfr抑制活性评价。baf3细胞(小鼠前淋巴细胞)仅能够在il-3(interleukin-3)存在下增殖。另一方面，转导了egfr基因的baf3细胞即使不存在il-3，也可以依赖于egfr进行增殖。向其中加入egfr抑制剂时，baf3细胞变得无法增殖，但加入il-3时，即使存在egfr抑制剂，也能够增殖。利用这样的性质，可以评价egfr抑制剂的活性、特异性。此次，进行了片螺素类(化合物26a、26b、26c、26d)及氮杂片螺素类(化合物8、8a、33)对于转导了双重突变egfr基因的baf3(l858r/t790m)、baf3(delexon19/t790m)及转导了三重突变egfr基因的baf3(l858r/t790m/c797s)、baf3(delexon19/t790m/c797s)的增殖抑制活性评价。作为阳性对照，使用了第一代抑制剂吉非替尼、第二代抑制剂阿法替尼及第三代抑制剂奥希替尼。具体的试验方法如下所述。使用neon电穿孔系统(thermofisherscientific公司)对baf3细胞2×106细胞导入2μg的各种pbabe-egfr质粒，用包含10ng/mlil-3、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素、以及10％胎牛血清的rpmi-1640培养基在5％二氧化碳/95％空气氛围中于37℃进行培养。2天后，添加1μg/ml嘌呤霉素，培养了4天。用pbs清洗细胞后，通过不含有il-3的培养基进行培养，使用了不依赖il-3进行增殖的细胞。将该细胞以3000细胞/孔接种于96孔微孔板(thermofisherscientific公司)，并加入各种浓度的试验化合物，在150μl的培养基中培养4天。在孔中添加15μl的5mg/mlmtt(噻唑蓝溴化四唑)溶液，在37℃下温育4小时，然后添加100μl的20％sds，进一步温育过夜。使用酶标仪(beckmancoulter公司)测定570nm的吸光度，计算出50％细胞增殖抑制浓度(ic50)。将结果示于下表。[表1]使用了导入egfr(l858r/t790m)基因的baf3细胞的增殖抑制活性[表2]使用了导入egfr(delexon19/t790m)基因的baf3细胞的增殖抑制活性[表3]使用了导入egfr(t790m/l858r/c797s)基因的baf3细胞的增殖抑制活性[表4]使用了导入egfr(delexon19/t790m/c797s)基因的baf3细胞的增殖抑制活性通过试验例1可知以下结果。(1)对于具有双重突变egfr的baf3(l858r/t790m)，片螺素类显示出与阿法替尼相同程度的活性，而且氮杂片螺素类显示出与奥希替尼相当的活性。然而，两者均治疗浓度范围(在该情况下，定义为－il3与+il3之差)狭窄，未确认到相对于阿法替尼、奥希替尼的优势。(2)对于具有双重突变egfr的baf3(delexon19/t790m)，片螺素类显示出与阿法替尼相同程度的活性。然而，两者均治疗浓度范围狭窄，未确认到相对于阿法替尼、奥希替尼的优势。(3)另一方面，对于具有三重突变egfr的baf3(l858r/t790m/c797s)、baf3(delexon19/t790m/c797s)，阿法替尼、奥希替尼的活性大幅减弱(特别是奥希替尼)。然而，在作为可逆性抑制剂的片螺素类、氮杂片螺素类的情况下，没有确认到这样的减弱，反而确认到了活性的提高。其活性超过了阿法替尼、奥希替尼的活性。而且，在各化合物中确认到明显的治疗浓度范围扩大，明确地表明egfr抑制与细胞增殖抑制相关。试验例2化合物26d对导入野生型egfr基因的baf3细胞的增殖抑制活性的评价使用表达不具有活性型突变的野生型egfr的baf3细胞研究了化合物26d对具有活性型突变的egfr的选择性。使用neon电穿孔系统(thermofisherscientific公司)对baf3细胞2×106细胞导入2μg的pbabe-egfr野生型，用包含10ng/mlil-3、100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素、以及10％胎牛血清的rpmi-1640培养基在5％二氧化碳/95％空气氛围中、37℃下进行培养。2天后，添加1μg/ml嘌呤霉素，对耐药性细胞进行选择。用pbs将该细胞清洗2次后，以30000细胞/孔接种于96孔微孔板(thermofisherscientific公司)，加入10ng/mlegf或il-3及各种浓度的化合物26d，在150μl的培养基中培养4天。在孔中添加15μl的5mg/mlmtt(噻唑蓝溴化四唑)溶液，在37℃下温育4小时，然后添加100μl的20％sds，进一步温育过夜。用酶标仪(beckmancoulter公司)测定570nm的吸光度，计算出50％细胞增殖抑制浓度(ic50)。将结果使用下表。[表5]化合物26d对导入野生型egfr基因的baf3细胞的增殖抑制活性对于具有活性型突变的baf3(delexon19/t790m/c797s)，在表达野生型egfr的baf3细胞的情况下，化合物26d的效果低，为与il-3存在下的增殖抑制活性相同程度。因此，化合物26d对于具有三重突变的egfr显示出选择性。试验例3使用了导入egfr基因的肺腺癌细胞的增殖抑制活性的评价研究了化合物26d对肺腺癌细胞株的增殖抑制活性。使用viafect转染试剂(promega公司)将2μg的pbabe-egfr导入egfr基因中缺失外显子19(delexon19)的肺腺癌细胞株pc-9，用包含100u/ml青霉素、100μg/ml链霉素、以及10％胎牛血清的rpmi-1640培养基在5％二氧化碳/95％空气氛围中、37℃下进行培养。2天后，添加2μg/ml嘌呤霉素，对耐药性细胞进行选择。将这些细胞及表达野生型egfr的a549细胞分别以3000细胞/孔、7500细胞/孔接种于96孔微孔板(thermofisherscientific公司)，加入各种浓度的试验化合物，在150μl的培养基中培养4天。在孔中添加15μl的5mg/mlmtt(噻唑蓝溴化四唑)溶液，在37℃下温育4小时后，添加100μl的20％sds，进一步温育过夜。使用酶标仪(beckmancoulter公司)测定570nm的吸光度，计算出50％细胞增殖抑制浓度(ic50)。将结果示于下表。[表6]化合物26d对导入egfr基因的肺腺癌pc-9细胞、egfr野生型a549的增殖抑制活性ic50(nm)pc-9658.5delexon19/t790m493.9l858r/t790m719.0delexon19/t790m/c797s739.9l858r/t790m/c797s595.7a5492861.7向pc-9导入具有活性型突变的egfr基因，研究了化合物26d对肺腺癌细胞株的增殖抑制活性，结果是，无论有无耐药性突变(t790m、c797s突变)，化合物26d均以基本相同程度的浓度抑制了增殖。对于表达不具有突变的野生型egfr的肺腺癌细胞株a549，以高于具有活性型突变的pc-9细胞的浓度抑制了增殖。因此，化合物26d对于具有活性型突变的egfr显示出选择性。试验例4化合物26d对egfr信号的抑制的评价egfr酪氨酸激酶抑制剂抑制egfr的自磷酸化及下游的信号。因此，对于化合物26d是否在细胞水平上抑制egfr(delexon19/t790m/c797s)的自磷酸化及下游的信号进行了研究。以100000细胞/孔将肺腺癌细胞pc-9及分别表达egfr(delexon19/t790m)、egfr(delexon19/t790m/c797s)的pc-9细胞接种于6孔板，用包含100μg/ml链霉素及10％胎牛血清的rpmi-1640培养基在5％二氧化碳/95％空气氛围中、37℃下进行培养。次日，添加奥希替尼或化合物26d，培养4小时。用冰冷的pbs清洗后，悬浮于含有5mm钒酸钠、5mm氟化钠、proteaseinhibitorcocktail(roche公司)的100μl的ripa缓冲液(20mmtris-hclph7.5、150mmnacl、1％np40、1％脱氧胆酸钠、0.1％sds)，在冰上温育30分钟，以15000转离心30分钟，将上清作为细胞提取液。利用sds聚丙烯酰胺凝胶对细胞提取液进行分离，转印至pvdf膜。pvdf膜用5％脱脂乳封闭30分钟，使用抗磷酸化egfr抗体、抗egfr抗体、抗磷酸化akt抗体、抗akt抗体、抗磷酸化erk抗体(cellsignalingtechnologies公司)、抗erk抗体(santacruz)、抗肌动蛋白抗体(sigma公司)、辣根过氧化物酶结合抗小鼠igg、辣根过氧化物酶结合抗兔igg进行了蛋白质印迹试验(westernblot)。检测使用了eclprimedetectionreagent、las3000(gehealthcare公司)。将结果示于图2。化合物26d抑制了pc-9细胞的egfr的磷酸化、存在于egfr信号的下游的erk的磷酸化。另一方面，未观察到egfr信号的下游的akt的磷酸化的抑制。无论有无耐药性突变(t790m、c797s突变)，这些蛋白质的磷酸化以基本相同程度的浓度被抑制。因此，化合物26d显示出抑制现有的药剂耐药性突变细胞的egfr信号的结果。试验例5化合物26d在小鼠异种移植模型中的抗肿瘤效果的评价为调查化合物26d在动物水平上的治疗效果，使用小鼠异种移植模型进行了研究。将表达egfr(delexon19/t790m/c797s)的pc-9制备为5×107细胞，与基质胶(matrigel)(becton,dickinson公司)以1∶1混合。将其100μl注射于balb/c裸鼠(charlesriverjapan公司)的皮下。从观察到形成肿瘤起，每天腹腔内给药0.2mg的化合物26d，测定肿瘤直径。通过长轴(mm)×短轴(mm)2/2计算出肿瘤体积。将结果示于图3及4。化合物26d抑制了移植至裸鼠皮下的表达egfr(delexon19/t790m/c797s)基因的pc-9细胞的肿瘤的增大。因此，化合物26d显示出在动物水平上抑制对吉非替尼、奥希替尼呈现耐药性的人肺癌移植肿瘤的增大的结果。由于在给药期间中未观察到体重减少，因此可以认为化合物26d不具有明显的毒性。如上所述可知，按照基于结构的药剂设计(structure-baseddrugdesign)创制出的本发明的化合物在细胞水平上强烈地抑制egfr(l858r/t790m/c797s)、egfr(delexon19/t790m/c797s)。与已批准的现有egfr-tki(吉非替尼、阿法替尼、奥希替尼)相比，其活性非常强，可以认为作为用于目前尚无治疗方法的具有三重突变egfr的非小细胞肺癌治疗药(第四代egfr-tki)开发的先导化合物是有用的。工业实用性本发明的化合物对c797s突变型耐药性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)具有特异性的酪氨酸激酶抑制活性，作为c797s突变型耐药性egfr(特别是c797s突变型三次耐药性egfr)酪氨酸激酶抑制剂、具有耐药性突变egfr的非小细胞肺癌等的预防和/或治疗剂等是有用的。本申请以在日本提出申请的日本特愿2017-064866为基础，本说明书包含其全部内容。当前第1页12