双特异性HIV-1-中和抗体

双特异性hiv
‑1‑
中和抗体
1.本申请是基于2014年12月2日提交的申请号为201480074762.4的名为“经由细胞受体锚定使用具有天然架构的双特异性抗体改良的hiv
‑1‑
中和抗体效力和广度”的申请的分案申请。
2.相关申请的交叉引用
3.本申请要求2013年12月2日提交的美国临时专利申请号61/910,685(名称为improved hiv
‑1‑
neutralizing antibody potency and breadth via cell receptor anchoring using bispecific antibodies with native architecture)的优先权以及其权益，且通过引用的方式全文并入本文中。
发明领域
4.在各个实施方案中，本发明一般涉及使用双特异性抗体来预防和治疗hiv。


背景技术：

5.用抗体(ab)被动免疫接种是一种预防与治疗传染病的公认方法。此方法可涉及从传染病恢复的供体制备人类免疫球蛋白并利用此类含有对感染生物体特异的ab的制剂来保护接受者抵抗相同疾病。或者，治疗抗体可以通过用抗原免疫接种小鼠，然后工程改造/人源化小鼠ab进入人类形式来制造。单克隆抗体(mab)在物理特性和免疫化学反应性方面是同质的，且因此提供绝对特异性活性的可能性。
6.该特异性最终可为一些目标的限制，因此从业人员已开发由两种不同mab且结合两种不同抗原类型的片段组成的“双特异性”mab。这有利于例如结合仅弱表达的抗原。一些双特异性mab可以刺激强免疫反应，从而限制其临床应用。一种改善此效应的最近方法是“crossmab”方法，一种采用更天然的类抗体结构的双特异性抗体格式。
7.生成用于临床使用的抗病原体(如hiv)的高效力双特异性或二价抗体探索涉及许多不确定性。例如，hiv的低穗密度及穗结构可能妨碍抗体与hiv的二价结合，且细胞表面锚定的几何形状与空间关系没有进行明确表征。也未知hiv包膜上是否存在足够的表位可近性。锚定至宿主细胞膜的crossmab双特异性抗体提供改良局部抗体浓度，指定顺序和/或相互依存的条目步骤，和补偿单价结合的可能性。


技术实现要素：

8.在一方面，本发明涉及一种用于中和hiv的双特异性抗体。所述双特异性抗体包括第一抗体和第二抗体的一部分，其中所述第一抗体结合hiv包膜蛋白。在某些实施方案中，所述第一抗体是选自pgt145、pg9、pgt128、pgt121、10
‑
1074、3bnc117、vrc01、pgt151、4e10、10e8和其变体。在某些实施方案中，所述双特异性抗体包括第二抗体的一部分，其中所述第二抗体结合细胞膜蛋白。例如，所述第二抗体可结合细胞受体蛋白或细胞膜共受体蛋白。在实施方案中，所述第二抗体是选自cd4抗体、ccr5抗体及cxcr4抗体，诸如pro 140、伊巴利单抗(ibalizumab)、515h7或其变体。在各个实施方案中，所述双特异性抗体具有crossmab格
式。
9.在另一方面，本发明提供一种包括第一抗体和第二抗体的一部分的双特异性抗体，其中所述第一抗体结合hiv包膜蛋白且所述第二抗体结合细胞膜蛋白。在各个实施方案中，所述双特异性抗体具有crossmab格式。
10.在各个实施方案中，也提供包括本文所公开的双特异性抗体的药物组合物。所述药物组合物可调配成用于经口、鼻内、肺、真皮内、透皮、皮下、肌肉内、腹膜内或静脉内递送。
11.在又一方面，提供中和hiv的方法。所述方法包括使抗原结合位点与结合hiv包膜蛋白的双特异性抗体接触和使另一抗原结合位点与结合细胞膜蛋白的双特异性抗体接触的步骤。
12.在另一方面，也提供用于治疗感染hiv的患者的方法。所述方法包括对所述患者施用如本文所公开的双特异性抗体或药物组合物中的任一种。在实施方案中，所述患者为人类。
13.附图简述
14.在附图中，类似的元件符号一般是指贯穿不同视图的相同部件。此外，附图不一定按标度，而是一般设置重点说明本发明原理。在以下描述中，不同的本发明实施方案是参考以下附图进行描述，其中：
15.图1是说明衍生自两种igg单克隆抗体的crossmab抗体的图示。
16.图2a是说明靶向cd4的imab抗体(单克隆抗体伊巴利单抗的简写)和靶向ccr5的pro 140抗体的图示。
17.图2b是说明靶向hiv包膜gp120的mab的图示。
18.图3是比较使用imab与10e8抗体的组合与crossmab双特异性10e8/imab抗体的抗细胞对细胞至细胞hiv传输的最大抑制率百分比(mpi)的图。除非另外声明，否则所有基于imab的双特异性抗体是使用mv1变体构建。
19.图4是比较使用各种浓度的10e8、pro 140或10e8/p140抗体对x4和双向性hiv的各种菌株的抑制率的一系列图。p140是pro 140的简写。
20.图5是比较使用各种浓度的10e8、pro 140、10e8/p140或个别10e8和pro 140单克隆抗体的组合对各种hiv菌株的抑制率的一系列图。
21.图6是比较使用各种浓度的10e8、x19、10e8/x19或10e8/p140抗体对各种hiv菌株的抑制率的一系列图。
22.图7是比较使用各种浓度的10e8、pro 140、10e8/p140和10e8/αher2抗体对各种hiv菌株的抑制率的一系列图。
23.图8a是比较crossmab双特异性抗体10e8/imab和δ10e8/imab与hiv
‑
1醣蛋白mper的结合的图。
24.图8b是比较10e8(浅灰线)和δ10e8(深灰线)抗imab耐药性r5病毒(图a)和x4病毒(图b)的抑制率百分比，以及10e8/imab(浅灰线)和δ10e8/imab(深灰线)抗imab耐药性r5病毒(图c)和x4病毒(图d)的抑制率百分比的一系列图。
25.图9是比较使用各种浓度的10e8、δ10e8、4e10、10e8/p140、δ10e8/p140和4e10/p140抗体对各种hiv菌株的抑制率的一系列图。
26.图10是比较crossmab抗体10e8/pro140和10e8/imab、其亲本单克隆抗体10e8、pro140和imab、以及多种其它靶向hiv包膜的单克隆抗体抗大量hiv包膜假型病毒的抗病毒覆盖率的图。
27.图11是比较单克隆抗体imab(在所有图中为灰条)和crossmab抗体pgt145/伊巴利单抗(145/imab；左上图)、pgt128/伊巴利单抗(128/imab；中上图)、pgt151/伊巴利单抗(151/imab；右上图)、3bnc117/伊巴利单抗(117/imab；左下图)和10e8/伊巴利单抗(10e8/imab；右下图)针对大量hiv包膜假型病毒的最大抑制百分比(mpi)的一系列图。
28.图12是比较crossmab抗体pgt145/伊巴利单抗(145/imab；左上图)、pgt128/伊巴利单抗(128/imab；中上图)、pgt151/伊巴利单抗(151/imab；右上图)、3bnc117/伊巴利单抗(117/imab；左下图)和10e8/伊巴利单抗(10e8/imab；右下图)抗大量hiv包膜假型病毒的最大抑制百分比(mpi)和ic80抗体浓度的一系列图。
29.图13是比较基于imab和pro140的crossmab双特异性抗体与其亲本抗体的pgt145/imab与pgt145/pro140(左上图)、3bnc117/imab与3bnc117/pro140(中上图)、pgt128/imab与pgt128/pro140(右上图)、pgt151/imab与pgt151/pro140(左下图)以及10e8/imab与10e8/pro140(右下图)的ic80抗体浓度的一系列图。
30.图14是比较基于imab和pro140的crossmab双特异性抗体与其亲本抗体的pgt145/imab与pgt145/pro140(左上图)、3bnc117/imab与3bnc117/pro140(中上图)、pgt128/imab与pgt128/pro140(右上图)、pgt151/imab与pgt151/pro140(左下图)以及10e8/imab与10e8/pro140(右下图)的ic50抗体浓度的一系列图。
31.图15是展现基于imab的crossmab双特异性抗体和其亲本抗体抗hiv的细胞至细胞传输的ic80抗体浓度的图，其中10e8/imab(左上图)、3bnc117/imab(中上图)、pgt145/imab(右上图)、pgt128/imab(左下图)和pgt151/imab(右下图)。
32.图16是展现crossmab双特异性抗体和其亲本抗体抗hiv的细胞至细胞传输的最大抑制率百分比(mpi)的图。
33.图17左图是比较hiv菌株抗各种浓度的10e8、pro 140、10e8/p140crossmab双特异性抗体、以及个别10e8和pro 140单克隆抗体的组合的抑制率的图。图17右图是比较hiv菌株抗各种浓度的imab、10e8、10e8/imab crossmab双特异性抗体、以及个别10e8和imab单克隆抗体的组合的抑制率的图。
34.图18上图是比较各种hiv r5菌株抗各种浓度的10e8、pro140、10e8/p140和10e8/515h7抗体的抑制率的一系列图。图18底图是比较各种hiv x4菌株抗各种浓度的10e8、515h7和10e8/515h7抗体的抑制率的一系列图。
35.图19上图是比较各种hiv菌株抗各种浓度的10e8/pro140、10e8/imab、10e8/515h7和10e8/x19抗体的抑制率的一系列图。图19底图表明tzm
‑
bl细胞上存在的cd4、ccr5和cxcr4受体的密度。
36.图20比较crossmab双特异性抗体10e8/pro140、δ10e8/pro140和4e10/pro140与hiv
‑
1醣蛋白mper的结合。
37.图21是比较各种hiv菌株抗各种浓度的4e10、pro140和4e10/p140和10e8/p140抗体的抑制率的一系列图。
38.图22是crossmab抗体10e8/imab、10e8/p140和3bnc117/imab(上图)和单克隆抗体
imab、10e8和pro140(底图)的尺寸排阻色谱分析。
39.图23是单克隆抗体10e8和由10e8重链与4e10轻链配对组成的嵌合抗体的尺寸排阻色谱分析。
40.图24是单克隆抗体10e8和4e10以及由10e8重链与4e10轻链配对组成的嵌合抗体(上图)、单克隆抗体10e8和10e8突变体(具有一般在10e8轻链中工程改造的潜在稳定化突变)(中心图)、以及单克隆抗体10e8和在非
‑
10e8抗体的κ轻链基因接枝的10e8突变体(底图)的一系列尺寸排阻色谱图。
41.图25是单克隆抗体4e10和利用10e8的轻区域(包括cdr1区、cdr2区、cdr3区、或组合的cdr1、cdr2和cdr3区)遗传接枝的4e10突变体的尺寸排阻色谱图。
42.图26上图是10e8嵌合抗体的尺寸排阻色谱图。cdr123是10e8重链与利用10e8抗体生殖细胞系cdr区序列遗传接枝的10e8轻链配对的嵌合抗体。fw123是10e8重链与利用10e8抗体生殖细胞系框架区序列遗传接枝的10e8轻链配对的嵌合抗体。图26底图是指示cdr123和fw123抗体的表达、hiv mper结合能力、尺寸排阻色谱谱、和hiv中和谱的表格。
43.图27是单克隆抗体10e8、其体细胞变体h6l10、以及由h6l10与pro140配对组成的crossmab双特异性抗体的尺寸排阻色谱图。
44.图28是描绘10e8、h6l10/pro 140和其亲本抗体在小鼠模型中的药物动力学谱的图。
45.图29是比较10e8
v 1.0
/imab或p140 crossmab抗体与10e8/imab或p140抗体的效力的图。
46.图30是描绘10e8和衍生自多个10e8变体和imab或p140的crossmab抗体在小鼠模型中的药物动力学的图。
47.图31是描绘10e8
v1.1
/p140和10e8
v2.0
/imab抗体的hiv病毒覆盖率(上图)和10e8
v1.1
/p140和10e8
v2.0
/imab抗体的尺寸排阻色谱稳定性图(底图)的一系列图。
48.图32是描绘储存在4℃的pbs中的10e8
v1.1
/p140和10e8
v2.0
/imab抗体的尺寸排阻稳定性图的一系列图。
49.图33描绘10e8
v2.0
/imab(n297a)抗体的天然质谱分析。
50.图34是比较10e8
v1.1
/p140和10e8
v2.0
/imab对hiv分化支c小组的活性以及此类抗体的ic50和ic80活性的一系列图。
51.图35和36是比较10e8
v1.1
/p140、10e8
v2.0
/imab和各种单克隆抗体抗hiv的效力的图。
具体实施方式
52.本发明的实施方案提供hiv的抑制。在各个实施中，形成双特异性抗体，各自包括来自两个不同亲本抗体的重链和轻链组分。一种亲本抗体特异性结合hiv，例如hiv包膜蛋白env。另一亲本抗体特异性结合细胞膜蛋白，例如cd4和ccr5。在一双特异性抗体中，来自两种亲本抗体的每一抗体的重链和轻链组合，从而提供一种片段抗原结合1(fab1)和fab2具有不同结合特异性的抗体。在某些实施方案中，所述双特异性抗体为如图1中所示的crossmab格式抗体。在crossmab格式中，一条重链包括“节(knob)”结构且另一条重链包括对应的“孔(hole)”结构，且来自一种亲本抗体的恒定域(即，cl和ch1)的位置转换，一起确
保在装配期间重链和轻链的正确配对。
53.已显示各种mab通过靶向并结合hiv包膜蛋白env阻断hiv传染(图2b和10)。这些mab包括例如pgt145、pg9、pgt128、pgt121、10
‑
1074、3bnc117、vrc01、pgt151、4e10和10e8。此外，已显示单克隆抗体pro 140(“p140”)、伊巴利单抗(“imab”)和515h7通过分别靶向并结合ccr5、cd4和cxcr4人类细胞膜蛋白来阻断hiv传染(图2a)。具体来说，图2a显示imab如何靶向cd4，在人类t细胞上表现的hiv
‑
1进入的主要受体；以及pro 140如何靶向ccr5，一种通过ccr5向性hiv
‑
1的用于hiv
‑
1进入的辅受体。图2b(采自http://www.scripps.edu/news/press/2014/20140424hiv.html)说明mab pgt145如何靶向hiv病毒包膜gp120上的v1/v2表位；mab pgt128如何靶向hiv gp120的v3主干区域上的多糖；mab 3bnc117如何靶向hiv gp120的cd4结合位点；mab 10e8如何靶向hiv gp41的膜近端外区域(mper)；以及mab pgt151如何靶向hiv gp120和hiv gp41两者上的表位。在各个实施方案中，本发明双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)具有igg分子的天然架构，但是具有双特异性。
54.虽然确保讨论集中于双特异性抗体针对env和细胞膜蛋白cd4和ccr5的使用，但是应理解，这仅是出于便于呈现，且可使用针对任何hiv表位的任何合适抗体以及针对任何合适细胞膜蛋白的任何合适抗体且都在本发明的范围内。
55.因此，在各个实施方案中，本发明提供靶向并结合hiv env蛋白以及细胞膜蛋白ccr5、cd4和/或cxcr4的双特异性抗体。在某些实施方案中，该双特异性抗体包括衍生自(但不限于)pgt145、pg9、pgt128、pgt121、10
‑
1074、3bnc117、vrc01、pgt151、4e10和/或10e8抗体及其变体的序列(例如，重链和轻链序列)。
56.定义pgt145抗体的重链和轻链的氨基酸序列可分别在例如http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3u1s_h和http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3u1s_l处找到，其全部内容以引用的方式并入本文中。
57.定义pg9抗体的重链和轻链的氨基酸序列可分别在例如http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3u4e_h和http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3muh_l处找到，其全部内容以引用的方式并入本文中。
58.定义pgt128抗体的重链和轻链的氨基酸序列可分别在例如http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3tyg_h和http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/3tyg_l处找到，其全部内容以引用的方式并入本文中。
59.定义pgt121抗体的重链和轻链的氨基酸序列可分别在例如http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4fqc_h和http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4fqc_l处找到，其全部内容以引用的方式并入本文中。
60.定义10
‑
1074抗体的重链和轻链的氨基酸序列可在例如mouquet h.等人，(2012)pnas,109(47):e3268
‑
77(包括补充信息)中找到，其全部内容以引用的方式并入本文中。
61.定义3bnc117抗体的重链和轻链的氨基酸序列可分别在例如http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4lsv_h和http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4lsv_l处找到，其全部内容以引用的方式并入本文中。
62.定义vrc01抗体的重链和轻链的氨基酸序列可分别在例如http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4lst_h和http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/4lst_l处找到，其全部内容以引用的方式并入本文中。
no:2)：
75.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
76.定义145/mv1抗体的pgt145衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pgt145
‑
lc(seq id no:3)：
77.evvitqsplflpvtpgeaaslsckcshslqhstganylawylqrpgqtprllihlathrasgvpdrfsgsgsgtdftlkisrvesddvgtyycmqglhspwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
78.定义145/mv1抗体的pgt145衍生的重链的氨基酸序列
‑
pgt145
‑
hc
‑
knob(seq id no:4)：
79.qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgnsfsnhdvhwvrqatgqglewmgwmshegdktglaqkfqgrvtitrdsgastvymelrgltaddtaiyycltgskhrlrdyflyneygpnyeewgdylatldvwghgtavtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
80.117/mv1抗体：
81.定义117/mv1抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
82.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
83.定义117/mv1抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
84.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
85.定义117/mv1抗体的3bnc117衍生的轻链的氨基酸序列
‑
3bnc117
‑
lc(seq id no:5)：
86.diqmtqspsslsasvgdtvtitcqangylnwyqqrrgkapklliydgsklergvpsrfsgrrwgqeynltinnlqpediatyfcqvyefvvfgqgtkvqvdikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkv
dnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
87.定义117/mv1抗体的3bnc117衍生的重链的氨基酸序列
‑
3bnc117
‑
hc
‑
knob(seq id no:6)：
88.qvqllqsgaavtkpgasvrvsceasgynirdyfihwwrqapgqglqwvgwinpktgqpnnprqfqgrvsltrhaswdfdtfsfymdlkalrsddtavyfcarqrsdywdfdvwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
89.128/mv1抗体：
90.定义128/mv1抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
91.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
92.定义128/mv1抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
93.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
94.定义128/mv1抗体的pgt128衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pgt128
‑
lc(seq id no:7)：
95.qsaltqppsasgspgqsitisctgtsnnfvswyqqhagkapklviydvnkrpsgvpdrfsgsksgntasltvsglqtddeavyycgslvgnwdvifgggtkltvlgqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
96.定义128/mv1抗体的pgt128衍生的重链的氨基酸序列
‑
pgt128
‑
hc
‑
knob(seq id no:8)：
97.qpqlqesgptlveasetlsltcavsgdstaacnsfwgwvrqppgkglewvgslshcasywnrgwtyhnpslksrltlaldtpknlvflklnsvtaadtatyycarfggevlrytdwpkpawvdlwgrgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
98.10e8/mv1抗体：
99.定义10e8/mv1抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
100.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfs
gsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
101.定义10e8/mv1抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
102.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
103.定义10e8/mv1抗体的10e8衍生的轻链的氨基酸序列
‑
10e8
‑
lc(seq id no:9)：
104.yeltqetgvsvalgrtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgvpdrfsgsasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
105.定义10e8/mv1抗体的10e8衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8
‑
hc
‑
knob(seq id no:10)：
106.evqlvesggglvkpggslrlscsasgfdfdnawmtwvrqppgkglewvgritgpgegwsvdyaapvegrftisrlnsinflylemnnlrmedsglyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgrgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgkδ10e8/mv1抗体
107.定义δ10e8/mv1抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
108.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
109.定义δ10e8/mv1抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
110.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
111.定义δ10e8/mv1抗体的δ10e8衍生的轻链的氨基酸序列
‑
δ10e8
‑
lc(seq id no:21)：
112.yeltqetgvsvalgrtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgvpdrfsgasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
113.定义δ10e8/mv1抗体的δ10e8衍生的重链的氨基酸序列10e8
‑
hc
‑
knob(seq id no:22)：
114.evqlvesggglvkpggslrlscsasgfdfdnawmtwvrqppgkglewvgritgpgegwsvdyaapvegrftisrlnsinflylemnnlrmedsglyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgrgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
115.151/mv1抗体
116.定义151/mv1抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
117.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
118.定义151/mv1抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
119.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
120.定义151/mv1抗体的pgt151衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pgt151
‑
lc(seq id no:23)：
121.divmtqtplslsvtpgqpasiscksseslrqsngktslywyrqkpgqspqllvfevsnrfsgvsdrfvgsgsgtdftlrisrveaedvgfyycmqskdfpltfgggtkvdlkrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
122.定义151/mv1抗体的pgt151衍生的重链的氨基酸序列pgt151
‑
hc
‑
knob(seq id no:24)：
123.rvqlvesgggvvqpgksvrlscvvsdfpfskypmywvrqapgkglewvaaisgdawhvvysnsvqgrflvsrdnvkntlylemnslkiedtavyrcarmfqesgpprldrwsgrnyyyysgmdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshy
tqkslslspgk
124.145/p140抗体：
125.定义145/p140抗体的pro 140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
126.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
127.定义145/p140抗体的pro 140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
128.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdkttlsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
129.定义145/p140抗体的pgt145衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pgt145
‑
lc(seq id no:3)：
130.evvitqsplflpvtpgeaaslsckcshslqhstganylawylqrpgqtprllihlathrasgvpdrfsgsgsgtdftlkisrvesddvgtyycmqglhspwtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
131.定义145/p140抗体的pgt145衍生的重链的氨基酸序列
‑
pgt145
‑
hc
‑
knob(seq id no:4)：
132.qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgnsfsnhdvhwvrqatgqglewmgwmshegdktglaqkfqgrvtitrdsgastvymelrgltaddtaiyycltgskhrlrdyflyneygpnyeewgdylatldvwghgtavtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
133.117/p140抗体：
134.定义117/p140抗体的pro 140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
135.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
136.定义117/p140抗体的pro 140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
137.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdktt
lsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
138.定义117/p140抗体的3bnc117衍生的轻链的氨基酸序列
‑
3bnc117
‑
lc(seq id no:5)：
139.diqmtqspsslsasvgdtvtitcqangylnwyqqrrgkapklliydgsklergvpsrfsgrrwgqeynltinnlqpediatyfcqvyefvvfgqgtkvqvdikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
140.定义117/p140抗体的3bnc117衍生的重链的氨基酸序列
‑
3bnc117
‑
hc
‑
knob(seq id no:6)：
141.qvqllqsgaavtkpgasvrvsceasgynirdyfihwwrqapgqglqwvgwinpktgqpnnprqfqgrvsltrhaswdfdtfsfymdlkalrsddtavyfcarqrsdywdfdvwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
142.128/p140抗体：
143.定义128/p140抗体的pro 140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
144.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
145.定义128/p140抗体的pro 140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
146.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdkttlsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
147.定义128/p140抗体的pgt128衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pgt128
‑
lc(seq id no:7)：
148.qsaltqppsasgspgqsitisctgtsnnfvswyqqhagkapklviydvnkrpsgvpdrfsgsksgntasltvsglqtddeavyycgslvgnwdvifgggtkltvlgqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
149.定义128/p140抗体的pgt128衍生的重链的氨基酸序列
‑
pgt128
‑
hc
‑
knob(seq id no:8)：
150.qpqlqesgptlveasetlsltcavsgdstaacnsfwgwvrqppgkglewvgslshcasywnrgwtyhnpslksrltlaldtpknlvflklnsvtaadtatyycarfggevlrytdwpkpawvdlwgrgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
151.10e8/p140抗体：
152.定义10e8/p140抗体的pro 140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
153.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
154.定义10e8/p140抗体的pro 140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
155.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdkttlsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
156.定义10e8/p140抗体的10e8衍生的轻链的氨基酸序列
‑
10e8
‑
lc(seq id no:9)：
157.yeltqetgvsvalgrtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgvpdrfsgsasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
158.定义10e8/p140抗体的10e8衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8
‑
hc
‑
knob(seq id no:10)：
159.evqlvesggglvkpggslrlscsasgfdfdnawmtwvrqppgkglewvgritgpgegwsvdyaapvegrftisrlnsinflylemnnlrmedsglyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgrgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgkδ10e8/p140抗体
160.定义δ10e8/p140抗体的pro140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
161.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
162.定义δ10e8/p140抗体的pro140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
163.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdkttlsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
164.定义δ10e8/p140抗体的δ10e8衍生的轻链的氨基酸序列
‑
δ10e8
‑
lc(seq id no:21)：
165.yeltqetgvsvalgrtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgvpdrfsgasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
166.定义δ10e8/p140抗体的δ10e8衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8
‑
hc
‑
knob(seq id no:22)：
167.evqlvesggglvkpggslrlscsasgfdfdnawmtwvrqppgkglewvgritgpgegwsvdyaapvegrftisrlnsinflylemnnlrmedsglyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgrgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
168.151/p140抗体
169.定义151/p140抗体的pro140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
170.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
171.定义151/p140抗体的pro140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
172.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdkttlsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslsca
vkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
173.定义151/p140抗体的pgt151衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pgt151
‑
lc(seq id no:23)：
174.divmtqtplslsvtpgqpasiscksseslrqsngktslywyrqkpgqspqllvfevsnrfsgvsdrfvgsgsgtdftlrisrveaedvgfyycmqskdfpltfgggtkvdlkrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
175.定义151/p140抗体的pgt151衍生的重链的氨基酸序列
‑
pgt151
‑
hc
‑
knob(seq id no:24)：
176.rvqlvesgggvvqpgksvrlscvvsdfpfskypmywvrqapgkglewvaaisgdawhvvysnsvqgrflvsrdnvkntlylemnslkiedtavyrcarmfqesgpprldrwsgrnyyyysgmdvwgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
177.10e8/α
‑
her2抗体：
178.定义10e8/α
‑
her2抗体的α
‑
her2衍生的轻链的氨基酸序列
‑
抗her2
‑
vlch1(seq id no:13)：
179.divmtqshkfmstsvgdrvsitckasqdvntavawyqqkpghspklliysasfrytgvpdrftgnrsgtdftftissvqaedlavyycqqhyttpptfgggtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
180.定义10e8/α
‑
her2抗体的α
‑
her2衍生的重链的氨基酸序列
‑
抗her2
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:14)：
181.qvqlqqsgpelvkpgaslklsctasgfnikdtyihwvkqrpeqglewigriyptngytrydpkfqdkatitadtssntaylqvsrltsedtavyycsrwggdgfyamdywgqgasvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
182.定义10e8/α
‑
her2抗体的10e8衍生的轻链的氨基酸序列
‑
10e8
‑
lc(seq id no:9)：
183.yeltqetgvsvalgrtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgvpdrfsgsasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
184.定义10e8/α
‑
her2抗体的10e8衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8
‑
hc
‑
knob(seq id no:10)：
185.evqlvesggglvkpggslrlscsasgfdfdnawmtwvrqppgkglewvgritgpgegwsvdyaapvegrftisrlnsinflylemnnlrmedsglyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgrgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsnt
kvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
186.4e10/p140抗体：
187.定义4e10/p140抗体的pro 140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
188.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
189.定义4e10/p140抗体的pro 140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
190.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdkttlsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
191.定义4e10/p140抗体的4e10衍生的轻链的氨基酸序列
‑
4e10
‑
lc(seq id no:17)：
192.eivltqspgtqslspgeratlscrasqsvgnnklawyqqrpgqaprlliygassrpsgvadrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqqygqslstfgqgtkvevkrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
193.定义4e10/p140抗体的4e10衍生的重链的氨基酸序列
‑
pgt145
‑
hc
‑
knob(seq id no:18)：
194.qvqlvqsgaevkrpgssvtvsckasggsfstyalswvrqapgrglewmggviplltitnyaprfqgrititadrststaylelnslrpedtavyycaregttgagwlgkpigafahwgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
195.10e8/x19抗体：
196.定义10e8/x19抗体的x19衍生的轻链的氨基酸序列
‑
x19
‑
vlch1(seq id no:19)：
197.eivltqspatlsvspgrratlscrasqsvntnlawyqqkpgqaprlliygassratgipdrfsgsgsgtdftltisrlepedfavyycqhygsspltfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
198.定义10e8/x19抗体的x19衍生的重链的氨基酸序列
‑
x19
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:20)：
no:10)：
212.evqlvesggglvkpggslrlscsasgfdfdnawmtwvrqppgkglewvgritgpgegwsvdyaapvegrftisrlnsinflylemnnlrmedsglyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgrgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk嵌合cdr123抗体(seq id no:27)：
213.seltqdpavsvalgqtvritcrgdslrshyaswyqqkpgqapvlviygknnrpsgipdrfsgsssgntasltitgaqaedeadyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
214.嵌合fw123(seq id no:28)：
215.yeltqetgvsvalgrtvtitcqgdslrsyyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgvpdrfsgsasgnrasltisgaqaeddaeyycnsrdssgnhlvvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
216.10e8v1.0/imab抗体
217.定义10e8v1.0/mv1抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
218.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
219.定义10e8v1.0/mv1抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
220.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
221.定义10e8v1.0/imab抗体的10e8v1.0衍生的轻链的氨基酸序列
‑
10e8v1.0
‑
lc(seq id no:29)：
222.aseltqdpavsvalkqtvtitcrgdslrshyvswyqkkpgqapvlvfygknnrpsgipdrfsgsssgntasltiagaqaeddadyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
223.定义10e8v1.0/imab抗体的10e8v1.0衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8v1.0
‑
hc
‑
knob(seq id no:30)：
224.evrlvesggglvkpggslrlscsasgfnfddawmtwvrqppgkglewvgrisgpgegwsvdyaesvkgrftisrlnsinflylemnnvrtedtgyyfcartgkhydfwsgyppgeeyfqdwgqgtlvivssastkgpsvfplapss
kstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
225.10e8v1.1/imab抗体
226.定义10e8v1.1/imab抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
227.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
228.定义10e8v1.1/imab抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
229.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
230.定义10e8v1.1/imab抗体的10e8v1.1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
10e8v1.1
‑
lc(seq id no:31)：
231.aseltqdpavsvalkqtvtitcrgdslrshyvswyqkkpgqapvlvfygknnrpsgipdrfsgsssgntasltiagaqaeddadyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
232.定义10e8v1.1/imab抗体的10e8v1.1衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8v1.1 hc
‑
knob(seq id no:32)：
233.evrlvesggglvkpggslrlscsasgfnfddawmtwvrqppgkglewvgrisgpgegwsvdyaesvkgrftisrlnsinflylemnnvrtedtgyyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgqgtlvivssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
234.10e8v2.0/imab抗体
235.定义10e8v2.0/imab抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
236.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdy
fpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
237.定义10e8v2.0/imab抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
238.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
239.定义10e8v2.0/imab抗体的10e8v2.0衍生的轻链的氨基酸序列
‑
10e8v2.0
‑
lc(seq id no:33)：
240.aseltqdpavsvalkqtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgvpdrfsgsasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
241.定义10e8v2.0/imab抗体的10e8v2.0衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8v2.0
‑
hc
‑
knob(seq id no:34)：
242.evrlvesggglvkpggslrlscsasgfnfddawmtwvrqppgkglewvgrisgpgegwsvdyaesvkgrftisrlnsinflylemnnvrtedtgyyfcartgkhydfwsgyppgeeyfqdwgqgtlvivssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
243.10e8v3.0/imab抗体
244.定义10e8v3.0/imab抗体的mv1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
vlch1(seq id no:1)：
245.divmtqspdslavslgervtmnckssqsllystnqknylawyqqkpgqspklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltissvqaedvavyycqqyysyrtfgggtkleikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
246.定义10e8v3.0/imab抗体的mv1衍生的重链的氨基酸序列
‑
mv1
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:2)：
247.qvqlqqsgpevvkpgasvkmsckasgytftsyvihwvrqkpgqgldwigyinpyndgtdydekfkgkatltsdtststaymelsslrsedtavyycarekdnyatgawfaywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
248.定义10e8v3.0/imab抗体的10e8v3.0衍生的轻链的氨基酸序列
‑
10e8v3.0
‑
lc(seq id no:15)：
249.seltqetgvsvalgrtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgihdrfsgsasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
250.定义10e8v3.0/imab抗体的10e8v3.0衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8v3.0
‑
hc
‑
knob(seq id no:16)：
251.evqlvesggdlvkpggslrlscsasgfsfkntwmtwvrqapgkglewvgritgpgegwtsdyaatvqgrftisrnnmidmlylemnrlrtddtglyycvhtekyynfwggyppgeeyfqhwgrgtlvivssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
252.10e8v1.0/p140(h6l10/pro140)抗体
253.定义10e8v1.0/p140抗体的pro140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
254.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
255.定义10e8v1.0/p140抗体的pro140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
256.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdkttlsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
257.定义10e8v1.0/p140抗体的l10衍生的轻链的氨基酸序列
‑
l10
‑
lc(seq id no:29)：
258.aseltqdpavsvalkqtvtitcrgdslrshyvswyqkkpgqapvlvfygknnrpsgipdrfsgsssgntasltiagaqaeddadyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
259.定义10e8v1.0/p140抗体的h6衍生的重链的氨基酸序列
‑
h6
‑
hc
‑
knob(seq id no:30)：
260.evrlvesggglvkpggslrlscsasgfnfddawmtwvrqppgkglewvgrisgpgegwsvdyaesvkgrftisrlnsinflylemnnvrtedtgyyfcartgkhydfwsgyppgeeyfqdwgqgtlvivssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsnt
kvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
261.10e8v1.1/p140抗体
262.定义10e8v1.1/p140抗体的pro140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
263.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
264.定义10e8v1.1/p140抗体的p140衍生的重链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
hc
‑
hole
‑
cross(seq id no:12)：
265.evqlvesggglvkpggslrlscaasgytfsnywigwvrqapgkglewigdiypggnyirnnekfkdkttlsadtskntaylqmnslktedtavyycgssfgsnyvfawftywgqgtlvtvssastaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgecdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvctlppsrdeltknqvslscavkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflvskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
266.定义10e8v1.1/p140抗体的10e8v1.1衍生的轻链的氨基酸序列
‑
10e8v1.1
‑
lc(seq id no:31)：
267.aseltqdpavsvalkqtvtitcrgdslrshyvswyqkkpgqapvlvfygknnrpsgipdrfsgsssgntasltiagaqaeddadyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
268.定义10e8v1.1/p140抗体的10e8v1.1衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8v1.1 hc
‑
knob(seq id no:32)：
269.evrlvesggglvkpggslrlscsasgfnfddawmtwvrqppgkglewvgrisgpgegwsvdyaesvkgrftisrlnsinflylemnnvrtedtgyyfcartgkyydfwsgyppgeeyfqdwgqgtlvivssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
270.10e8v2.0/p140抗体
271.定义10e8v2.0/p140抗体的pro140衍生的轻链的氨基酸序列
‑
pro140
‑
vlch1(seq id no:11)：
272.divmtqsplslpvtpgepasiscrssqrllssyghtylhwylqkpgqspqlliyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycsqsthvpltfgqgtkveikssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepksc
id no:15)：
285.seltqetgvsvalgrtvtitcrgdslrshyaswyqkkpgqapillfygknnrpsgihdrfsgsasgnrasltisgaqaeddaeyycssrdksgsrlsvfgggtkltvlsqpkaapsvtlfppsseelqankatlvclisdfypgavtvawkadsspvkagvetttpskqsnnkyaassylsltpeqwkshrsyscqvthegstvektvaptecs
286.定义10e8v3.0/p140抗体的10e8v3.0衍生的重链的氨基酸序列
‑
10e8v3.0 hc
‑
knob(seq id no:16)：
287.evqlvesggdlvkpggslrlscsasgfsfkntwmtwvrqapgkglewvgritgpgegwtsdyaatvqgrftisrnnmidmlylemnrlrtddtglyycvhtekyynfwggyppgeeyfqhwgrgtlvivssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapefeggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpasiektiskakgqprepqvytlppcrdeltknqvslwclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvlhealhshytqkslslspgk
288.在各个实施方案中，衍生自pgt145、pg9、pgt128、pgt121、10
‑
1074、3bnc117、vrc01、pgt151、4e10、10e8、p140、imab(或mv1变体)、515h7抗体及其变体的重链和/或轻链序列中的至少一种是一起配对以形成双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)。在示例性实施方案中，所公开的选自seq id no:1
‑
34的重链和轻链中的至少一种是配对在一起以形成双特异性抗体(例如,hiv crossmab抗体)。
289.在各个实施方案中，该双特异性抗体((例如，hiv crossmab抗体)的氨基酸序列进一步包括氨基酸类似物、氨基酸衍生物或其它非典型氨基酸。
290.在各个实施方案中，该双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)包括与pgt145、pg9、pgt128、pgt121、10
‑
1074、3bnc117、vrc01、pgt151、4e10或10e8抗体的野生型重链或轻链序列至少60％相同的序列。在各个实施方案中，所述双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)包括与p140、imab(或mv1变体)或515h7抗体的野生型重链或轻链序列至少60％相同的序列。在示例性实施方案中，所述双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)包括与seq id no:1
‑
34至少60％相同的序列。
291.在各个实施方案中，该双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)可包括与pgt145、pg9、pgt128、pgt121、10
‑
1074、3bnc117、vrc01、pgt151、4e10或10e8抗体的野生型重链或轻链序列至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。
292.在各个实施方案中，该双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)可包括与p140、imab(或mv1变体)或515h7抗体的野生型重链或轻链序列至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约
76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。
293.在示例性实施方案中，该双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)可包括与seq id no:1
‑
34至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％相同的序列。
294.可以在本领域技术范围内的各种方式，例如，使用公众可得到的计算机软件，诸如blast、blast
‑
2、align或megalign(dnastar)软件来确定同源性或同一性。使用由程序blastp、blastn,、blastx、tblastn和tblastx所采用的算法的blast(基本局部比对搜索工具)分析(karlin等人.,(1990)proc.natl.acad.sci.usa 87,2264
‑
2268；altschul,(1993)j.mol.evol.36,290
‑
300；altschul等人.,(1997)nucleic acids res.25,3389
‑
3402，并入作为参考)适合用于序列相似性搜索。由blast程序使用的方法是首先考虑查询序列和数据库序列之间的类似片段，然后评价被识别的所有匹配的统计显著性，最后总结只有那些满足显著性的预选阈值的匹配。对于在序列数据库相似性检索方面的基本问题讨论参见altschul等人.,(1994)nature genetics 6,119
‑
129，通过引用完全并入本文。本领域技术人员可决定用于测量比对的适当参数，包括在被比较序列的全长实现最大比对所需的任何算法。直方图、描述、比对、期望(即，报告针对数据库序列的匹配的统计显著性阈值)、截止、矩阵和过滤的搜索参数是在默认设置。通过blastp、blastx、tblastn和tblastx使用的默认打分矩阵是blosum62矩阵(henikoff等人.,(1992)proc.natl.acad.sci.usa 89,10915
‑
10919，通过引用全部并入)。四个blastn参数可以如下进行调整：q＝10(空位生成罚)；r＝10(空位延伸罚)；wink＝1(沿着查询在每个wink.sup.th位置生成字命中)；和gapw＝16(设置将在其中产生空位比对的窗口宽度)。等效blastp参数设置可能是q＝9；r＝2；wink＝1；和gapw＝32。搜索者也可以使用ncbi(美国国家生物技术信息中心)blast高级选项参数(例如：
‑
g，打开空位的成本[整数]：默认＝5对于核苷酸/11对于蛋白质；
‑
e，扩大空位的成本[整数]：默认＝2对于核苷酸/1对于蛋白质；
‑
q，核苷酸错配的罚分[整数]：默认＝
‑
3；
‑
r，核苷酸匹配的奖励[整数]：默认＝1；
‑
e，预期值[真]：默认＝10；
‑
w，字长[整数]：默认＝11对于核苷酸/28对于megablast/3对于蛋白质；
‑
y，空投(x)对于blast扩展(位)：默认＝20对于blastn/7对于其它；
‑
x，空比对的x空投值(位)：默认＝15对于所有程序，不适用于blastn和
‑
z，对于孔比对的最后x空投值(位)：50对于blastn，25对于其它)进行。也可以使用逐对蛋白质比对的clustalw(默认参数可以包括，例如，blosum62矩阵和空位开放罚分＝10以及空位延伸罚分＝0.1)。在gcg软件包版本10.0可用的序列之间的最佳拟合比较使用dna参数gap＝50(空位生成罚分)和len＝3(空位延伸罚分)，并在蛋白质比较的等效设置为gap＝8和len＝2。
cloning:a laboratory manual,cold spring harbor press,plainview,n.y.,1989以及ausubel等人,current protocols in molecular biology,john wiley&sons,new york,n.y.,1989中。
[0303]
用于生产抗体，诸如那些本文中所公开的抗体的方法是本领域中所已知。例如，编码dna分子的轻链可变区和/或重链可变区可以使用本文所提供的序列信息进行化学合成。合成的dna分子可以被连接到其它合适的核苷酸序列，包括，例如，表达控制序列，以产生编码期望抗体的常规基因的表达构建体。定义的基因构建体的生产是在本技术领域的常规技能内。可替代地，本文提供的序列可通过常规的杂交技术或聚合酶链反应(pcr)技术，使用合成的核酸探针，其序列是基于关于编码重链和轻链的基因本文所提供的序列信息，或现有技术的序列信息被克隆出的杂交瘤。
[0304]
编码所需抗体的核酸可以并入(连接)至表达载体中，载体可以通过常规的转染或转化技术被引入宿主细胞。示例性的宿主细胞是大肠杆菌细胞、中国仓鼠卵巢(cho)细胞、人胚胎肾293(hek 293)细胞、hela细胞、幼仓鼠肾(bhk)细胞、猴肾细胞(cos)、人肝细胞癌细胞(例如，hep g2细胞)和不另外产生igg蛋白的骨髓瘤细胞。转化的宿主细胞可以在允许宿主细胞表达编码免疫球蛋白轻和/或重链可变区的基因的条件下生长。特异性表达和纯化条件将取决于所用的表达系统而有所不同。
[0305]
在各个实施方案中，本发明的双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)是在治疗中使用。例如，双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)可以用于中和哺乳动物(例如，人类患者)中的hiv。例如，本发明的抗体可以结合hiv，以便部分或完全地抑制该病毒的一种或多种生物活性。在一项实施方案中，双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)中和r5
‑
嗜性hiv。在另一项实施方案中，双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)中和x4
‑
嗜性hiv。在又一项实施方案中，双特异性抗体(例如，hiv crossmab抗体)中和r5x4双
‑
嗜性hiv。在一些实施方案中，使用抗体来中和哺乳动物的hiv包括给所述哺乳动物施用治疗上有效量的所述抗体。
[0306]
通常，活性组分的治疗上有效量是在以下范围内，例如约0.1mg/kg至约100mg/kg，例如约1mg/kg至约100mg/kg，例如约1m/kg至约10mg/kg患者体重。在各个实施方案中，活性组分的治疗上有效量是在约0.01mg/kg至约10mg/kg患者体重范围内，例如，约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg,1.9mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg体重，所有值包含在内以及其之间的范围。
[0307]
施用的量将取决于诸如要治疗的疾病或适应症的类型和程度、患者的整体健康状况、该抗体的体内效力、药物制剂，和施用途径的变量。初始剂量可以提高超出上水平，以便迅速地实现期望的血液水平或组织水平。可替代地，初始剂量可以小于最佳，并且剂量可在治疗过程中逐步增加。人类剂量可以例如在设计成从例如0.5mg/kg至20mg/kg运行常规的i期剂量递增研究中优化。给药频率可以不同，取决于多种因素，例如施用途径、剂量和被治疗的疾病。示例性给药频率是多于每日一次，约每天一次，约一天两次、约一天三次、约一天
四次、约一天五次、约每隔一天、约每三天、约一周一次、约每两周一次、约每月一次、约每两个月一次、约每三个月一次、约每半年一次、或约每年一次。基于抗体的药物的配制在是本领域的普通技术范围内。
[0308]
对于治疗用途，抗体可以与药用可接受的载剂相组合。如本文所用，“药用可接受的载剂”是指适用于与人类和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、或其它问题或并发症，具有合理的利益/风险比的缓冲剂、载剂和赋形剂。载剂应是在与制剂的其它成分相容且对接受者无害的意义上“可接受的”。药用可接受的载剂包括与药物施用相容的缓冲剂、溶剂、分散介质、包衣、等渗和吸收延迟剂等等。使用此类介质和试剂用于药学活性物质在本领域是公知的。
[0309]
含抗体(如本文公开的那些抗体的药物组合物)可以以剂量单位形式提供，并可以通过任何合适的方法来制备。药物组合物应配制成与施用其的预期途径相容。施用途径的实例是静脉内(iv)、皮内、吸入、经皮、局部、经粘膜和直肠施用。在一项实施方案中，施用本发明抗体的途径是iv输注。
[0310]
有用的制剂可以通过药物领域熟知的方法来制备。例如，参见remington's pharmaceutical sciences,第18版(mack publishing company,1990)。适于肠胃外施用的制剂组分包括无菌稀释剂如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂如苄醇或羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如edta；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和用于调节渗透压的试剂如氯化钠或右旋糖。对于静脉内施用，合适的载剂包括生理盐水、抑菌水、聚氧乙烯蓖麻油eltm(basf，帕西帕尼，新泽西)或磷酸缓冲盐水(pbs)。载剂应在制造和储存条件下是稳定的，且应该对抗微生物被保留。载剂可以是含有溶剂或分散介质，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)，及其合适的混合物。
[0311]
药物制剂优选是无菌的。灭菌可以通过例如通过无菌过滤膜的过滤来实现。当组合物被冻干，过滤灭菌可以在冻干和重建之前或之后进行。
[0312]
图13和14表明，一些基于imab的crossmab具有比亲本ab更大的效力和广度。除非另外声明，否则所有基于imab的双特异性抗体是使用mv1变体构建。ic80(赋予病毒感染的80％的中和抗体浓度)是一种价抗hiv的抗体效力的方法。ic80数目(在抗体浓度(μg/ml)的方面的图表的y轴表示)越低，抗体在中和特定hiv菌株或分离物时越有效。ic50(赋予病毒感染的50％的中和抗体浓度)是另一种价抗hiv的抗体效力的方法。ic50数目(在抗体浓度(μg/ml)的方面的图表的y轴表示)越低，抗体在中和特定hiv菌株或分离物时越有效。
[0313]
抗体的各种集合均对大量hiv
‑
1假病毒(118种不同的hiv病毒分离株)进行测试，由地理、分化支、取向和感染期代表hiv包膜多样性。ic80和ic50被用来评价抗病毒效力和广度的强度。在图13和14的右下图清楚地表明，相比于亲本抗体imab和10e8，两者相加的双特异性crossmab(10e8/imab)更强效地中和几乎所有的hiv病毒(每一种病毒被表示为一个点)。其它抗体集(用于制造145/imab、117/imab、128/imab和151/imab)相比于其亲本组分有时提高hiv效力，而有时不提高。
[0314]
如图15所示，抗体imab也是在细胞
‑
细胞的中和测定法相对强效。pgt145、3bnc117、10e8、pgt128和pgt151是在中和无细胞病毒感染时相对强效的，但在细胞
‑
细胞传输测定法中和病毒方面差。创建包括pgt145、3bnc117、10e8、pgt128和pgt151与imab的双特
异性抗体使得这些嵌合抗体在细胞
‑
细胞传输测定法中和病毒方面具活性。可以看出，在这些比较研究中，10e8/imab是最强效的抗体。也发现，10e8/imab在阻止活体外细胞
‑
细胞传输方面最具活性。
[0315]
如图16中所说明，10e8/imab的改进效力是统计上显著的。图3显示，改进效力需要抗体的共价键结，即，crossmab格式(由于两种亲本抗体imab和10e8的共同施用提供壁稠合且物理上键结的双特异性10e8/imab抗体更低的mpi)。图10至图14提供imab衍生的crossmab抗体优于其亲本抗体的改进的效力的进一步证据。
[0316]
总之，发现，对于基于imab的crossmab(与pgt145、3bnc117、pgt151、pgt128和10e8稠合)，117/imab改进广度而不改进效力；145/imab、151/imab和128/imab改进广度和效力；且10e8/imab显著改进广度和效力。就表位位置/可接近性和中和的可能模型来说，10e8/imab似乎展现前和后附着中和；145/imab、151/imab何117/imab似乎展现前附着中和；且117/imab可能会显示某些病毒的空间限制的迹象，并可能降低效力。10e8/imab也展现抗hiv细胞至细胞传输的强效活性。
[0317]
也如在图13和14的顶图和左下图中所显示，基于pro 140的crossmab活性有时比其亲本抗体和对应的基于imab的crossmab较弱，如由达到ic80和ic50必需的高浓度所示。这四种mab与宿主细胞受体ccr5通过被称为pro 140的另一宿主细胞受体结合抗体的锚定相比其各自亲本抗体不改进抗病毒效力或广度(如由抗大量hiv分离物的ic80测得)。这些图表明，这四个抗体的基于pro140的crossmab比其相应的基于imab的crossmab较弱(基于pro 140与基于imab的crossmab的ic50和ic80比较)。
[0318]
如在图13和14的右底图中所示，10e8/p140，第五中基于pro 140的crossmab，比其亲本抗体和10e8/imab crossmab更强效。这些图说明，亲本mab pro140(这些图中数据点的最右边列)、双特异性crossmab 10e8/p140(这些图中数据点的右列第二)，和亲本mab 10e8(这些图中数据点的中心列)抗大量hiv分离物的效力(ic80或ic50)的比较。.这些图说明，亲本mab ima(这些图中数据点的最左边列)、双特异性crossmab 10e8/imab(这些图中数据点的左列第二)、和亲本mab 10e8(这些图中数据点的中心列)抗大量hiv分离物的效力(ic80或ic50)的比较。这些图中数据点的左列第二和右列第二说明双特异性crossmab 10e8/imab和10e8/p140抗大量hiv分离物的效力(ic80或ic50)的比较。
[0319]
已知pro 140不具有抗x4 hiv病毒的活性，因为x4病毒使用cxcr4作为hiv
‑
1入口的共受体，而pro 140结合ccr5。单独10e8具有非常弱的抗x4病毒活性。然而，双特异性crossmab 10e8/pro 140可比任何亲本抗体更好地中和迄今测试的所有x4病毒。图4的图说明10e8、pro 140和10e8/p140双特异性crossmab抗体在抑制hiv的各种菌株方面的有效性。
[0320]
如图5所示，10e8/pro140 crossmab是比共同施用两种亲本抗体更强效的各种hiv菌株抑制剂，这表现出利用该特定的双特异性抗体的协同，而不仅仅是相加的效力增强。
[0321]
如图6中所示，10e8稠合到非膜结合抗体(x19)的crossmab不提供增强的效力，如可相比膜结合10e8/p140时可以看到。因此，10e8/p140 crossmab的效力似乎需要10e8锚定至细胞膜。然而，单独膜结合不提供这些crossmab的增强效力。图7显示在her2上锚定10e8不提供相比于在ccr5上锚定10e8的显著效力增强。10e8特异性地锚定至病毒受体(在这个情况下，ccr5经由pro 140或cd4经由imab)提供增强的抗病毒活性。
[0322]
δ10e8是10e8 mab在轻链fr3中具有一个氨基酸缺失的突变体版。相比于10e8，δ
10e8具有弱许多的表位结合活性，如图8a和图8b中的图a和b所说明。然而，一旦δ10e8锚定到细胞受体(在crossmab抗体中，通过组合δ10e8与imab
‑
imab特异性结合细胞受体cd4)，图8b的图c和d显示其抑制活性得到改进。这些数据表明，特异性细胞受体锚定，即锚定到病毒受体或病毒共受体上在增强此hiv抗体的活性方面的贡献。仍然，虽然δ10e8/p140 crossmab具有优于δ10e8改进的抗病毒活性，但是其仍然不如10e8/p140 crossmab强效。δ10e8/p140 crossmab在中和r5病毒方面是比其在中和x4病毒方面比较上更有效。
[0323]
4e10是已知为比抗
‑
gp41 mper mab 10e8更不强效的抗
‑
gp41mper mab。类似于δ10e8的结果，图20和21显示，在共受体ccr5上锚定4e10(在crossmab抗体中，经由pro 140)显著增强4e10的抗病毒活性。两者合计，这表明许多抗gp41 mper ab锚定至ccr5或cd4(在crossmab双特异性抗体中，通过组合mper ab与p140或imab)可大大提高各自的抗gp41的mper ab的效力和广度。
[0324]
多个参数有助于增强某些双特异性crossmab抗hiv的活性，包括亲本ab效力、亲和力、和前和后附着中和能力。特别是，10e8/pro140crossmab表示在克服精力充沛、空间和时间限制，靶向在进入过程中的顺序/相互依赖步骤、表位的位置/可达性、结合亲和力、前和后附着中和、以及结合几何方面的有效组合。如图20中所示，4e10/pro140具有比δ10e8/pro140和10e8/pro140针对mper更大的结合亲和力。图9显示10e8/pro140、δ10e8/pro140和4e10/pro140以及其亲本抗体10e8、δ10e8和4e10抗hiv的各种菌株的抑制效力。图10和13至17提供crossmab抗体相比于其个别的亲本抗体以及组合的亲本抗体更大的效力的额外证据。
[0325]
10e8/imab和10e8/pro140 crossmab的增强的抗病毒覆盖示于图10中，其描绘几种抗体抗hiv的效力和广度。x轴表示特定抗体的浓度，y轴表示在特定浓度下由特定抗体中和的大量hiv病毒分离株的百分比，以及每个线表示所评价的不同抗体。沿x轴最左边的线和那些可以紧密接近或达到y轴上100％的线指示抗hiv的高度强效的和广泛的抗体。10e8/p140 crossmab和10e8/imab crossmab是其中相对于病毒覆盖和效力两者最有效的抗体，并且显著比其亲本抗体更有效。
[0326]
图18和19示出crossmab 10e8/515h7抗体相比于其亲本抗体和先前所讨论的抗体的效力。crossmab抗体的效力似乎不直接与细胞膜蛋白质靶的密度相关联，如ccr5(pro140的靶)的密度小于cd4(伊巴利单抗的靶)的密度，但是10e8/pro140衍生的crossmab抗体的效力比10e8/imab衍生的crossmab抗体的效力更大。
[0327]
如图22所示，在尺寸排阻色谱中缺少单一，尖锐的峰表示一种不稳定性类型，其指示为10e8和10e8衍生的crossmab抗体的多种分子种类。表1引述用于解析10e8不稳定性的各种方法和制剂修饰。然而，如由sec或尺寸排阻色谱柱中的“x”所指示，修饰在提供单一尖锐峰是不成功的。
[0328]
表1：方法和制剂筛选以解析10e8不稳定性
[0329][0330]
配对10e8重链与4e10轻链解决不稳定性问题，如图23中所示，产生的功能性但较不强效的抗体。这一结果表明，10e8的不稳定性是由于轻链。在图24的中心和底图中显示的10e8轻链的各种修饰，如去除c
‑
末端丝氨酸、工程改造λ
‑
可变区和κ恒定区嵌合体、工程改造10e8重链和轻链之间的附加的二硫键或遗传接枝非10e8抗体的κ轻链区到10e8轻链上，不充分解决10e8不稳定性。如图25和26所示，不稳定性可能是由于10e8的互补决定区(“cdr”)和框架区(“fw”)的组合。使用10e8
‑
hc/4e10
‑
lc，如图25所示，每10e8轻链cdr被个别地或以小组接枝入4e10lc。10e8 lc cdr2和cdr3的加成的耐受性良好，但10e8 lc cdr1的加成会破坏单峰。当所有的10e8 cdr接枝到4e10，峰宽了。接枝10e8 cdr或框架到其生殖细胞系轻链λ导致单一峰，如图26所示，但mper结合和hiv中和的有效性降低。表2汇总所测试的10e8轻链变体和其药效。
[0331]
表2：生成的10e8 lc变体
[0332][0333]
如图27所示，通过尺寸排阻色谱，发现10e8抗体的变体h6l10为活性，非自体反应性和稳定。发现h6l10/pro140和其亲本抗体具有小鼠可比的药物动力学概况，如图28所示。然而，如图29所示，当测试抗大量hiv菌株时，10e8的h6l10变体(称为10e8
v 1.0
)与p140组合的双特异性抗体比10e8/p140实质上较不强效。10e8的h6l10变体(称为10e8
v 1.0
)与imab组合的双特异性抗体当测试抗大量hiv菌株时相比10e8/imab保留相同相对量的效力，但
10e8
v 1.0
/imab具有与10e8/imab相同的不稳定性，如通过尺寸排阻色谱法测定并在表3中由x表示。在一个实施方案中，h6l10变体可进一步包括s74w突变。
[0334]
下表3列出了示例性的变体、其活性、尺寸排阻色谱的结果和药物动力学(“pk”)的结果。
[0335]
表3：稳定同时保留抗
‑
hiv活性的示例性变体
[0336][0337]
如上所指示，10e8
v1.0
是10e8的体细胞变体，称为h6l10。作为mab，h6l10具有由sec的单一峰，但是相比于10e8减少活性。h6l10/pro140 crossmab具有单一sec峰且良好的小鼠pk，但是减少的抗
‑
hiv活性。h6l10/imab crossmab具有双sec峰且不良的小鼠pk，但是其抗hiv的活性是大约与10e8/imab相同。10e8
v1.1
包括h6l10中的单点突变。当在crossmab双特异性中与pro140配对时，此构建体具有单sec峰和良好的小鼠pk。其抗hiv活性相比于10e8v1.0/pro140得以改进，但仍稍小于10e8/pro140的活性。当在crossmab双特异性中与imab配对时，此构建体具有双sec峰和不良的小鼠pk，且其抗hiv的活性仍然大约与10e8/imab和10e8v1.0/imab相同。10e8
v2.0
是10e8的嵌合抗体变体，其中fw1、cdr1和一部分fw2是来自10e8
v1.0
且其中剩余部分fw2、cdr2、fw3、cdr3和fw4是来自10e8。当在crossmab双特异性中与pro140配对时，此构建体具有双sec峰且具有相比于10e8/pro140减少的抗hiv活性。当在crossmab双特异性中与imab配对时，此构建体具有单sec峰，良好的pk，且具有较10e8/imab改进的抗hiv活性。10e8
v3.0
是10e8的体细胞变体，称为h11l1。h11l1/pro140 crossmab具有单sec峰且比任何其它10e8/pro140构建体(包括初始识别的一种)更好的抗
‑
hiv活性，但由于自体反应性具有不良的小鼠pk。h11l1/imab crossmab具有单sec峰和比识别的初始10e8/imab更好的抗hiv活性和针对10e8v2.0/imab观察到的大致相当的活性，但由于自体反应性具有不良的小鼠pk。
[0338]
当与pro140或imab配对时，在特定crossmab双特异性的上下文中生成单sec峰的10e8变体是不同的。看来这些crossmab双特异性抗体的10e8臂的稳定性是上下文相关的，并将根据其所配对的什么抗体而变化。因此，识别一个变体(10e8
v1.1
)，当与pro140配对时，其通过sec是稳定的且具有良好的小鼠pk和良好的抗hiv活性。也识别另一种变体(10e8
v2.0
)，其通过sec为稳定的且具有良好的小鼠pk和具有比最初识别的10e8/imab更好的抗hiv活性。
[0339]
下表4描述所测试的变体的自体反应性，其中“ana”指的是抗核活性与“aca”是指抗心磷脂活性。
[0340]
表4：活体外自体反应性评估
[0341][0342]
图30描绘10e8和衍生自多个10e8变体和imab或p140的crossmab抗体在小鼠模型中的药物动力学。如图31和32所示，10e8
v1.1
/p140和10e8
v2.0
/imab改进抗hiv活性和稳定性，并在4℃下储存在pbs中时具有良好的稳定性。图33描绘10e8
v2.0
/imab(n297a)的天然质谱分析。图34比较10e8
v1.1
/p140和10e8
v2.0
/imab在hiv分化支c板上的活性，并比较了它们的ic50和ic80功效。图35和36比较10e8
v1.1
/p140、10e8
v2.0
/imab和各种单克隆抗体抗hiv的效力。
[0343]
本文中使用的术语和表达被用作描述而不是限制的术语和表达，并且没有意图，在使用这些术语和表达时，排除所显示和描述的特征的任何等效物或其部分。此外，已经描述了本发明的某些实施方案，对于本领域的普通技术人员将显而易见的是，在不脱离本发明的精神和范围下，可以使用结合本文公开的概念的其它实施方案。因此，所描述的实施方案在所有方面都被视为仅是说明性而不是限制性。