微生物的检查方法及其装置的制造方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物的检查方法及其装置，尤其涉及适合检测包含于压舱水等并在其中生存的浮游生物等微生物的微生物的检查方法及其装置。
【背景技术】
[0002]未载运行李的船舶，为了使该船舶稳定而搭载压舱水航行，在载运行李的海域中将所搭载的该压舱水排出。
[0003]压舱水一般而言，因在与搭载的海域不同的海域排出，因此该压舱水所含有的浮游生物或细菌等微生物被载运至原本的栖息地以外的海域，有引起破坏生态系统等的问题的疑虑。
[0004]为了处理这种问题，策划关于压舱水的管制的国际性规则，采纳“用于控制及管理船舶的压舱水及沉淀物的国际条约(压舱水管理条约)”。
[0005]关于上述压舱水管理条约的“对于压舱水采样的指引(G2) ”，在“压舱水排出基准(D — 2) ”中，将自船舶排出的压舱水所含有而生存于其中的微生物的容许个体数，以该微生物的最小尺寸加以区分规定。例如以如下方式规定:对于最小尺寸为50 μm以上的微生物(以下称作“L尺寸生物”)为10个/m3以下，对于最小尺寸为10 μπι以上未满50 μπι的微生物(以下称作“s尺寸生物”)为10个/mL以下。
[0006]至今为止，作为测量在上述压舱水等水中栖息的微生物细胞的方法，已知有专利文献I记载的方法。
[0007]上述专利文献I记载的方法为一种微生物细胞的活细胞的测量方法:首先，使与存在于微生物的活细胞的酶或辅酶反应并在细胞内产生荧光物质的化学物质，与含有微生物的测定对象试样作用。其次，进行一定时间的混合接触，对试样照射激发细胞内产生的荧光物质所必须的波长的光线。之后将试样中自各个微生物发出的光以点的数量加以测量。
[0008]由此，将以往的洋菜培养方法中必须的10小时?数十小时的测定时间显着地提早为10分钟以内。此外，将活菌发出的光作为点通过建立光学性地、电性地检测测量的手段而可将活菌直接自动计数，具有可使杀菌装置的控制、制品质量的迅速管理快速地进行的优点。
[0009]然而，上述专利文献I记载的方法，因水的种类、温度、染色剂的种类、浓度、染色时间等的不同而有测定值产生差异的情形。
[0010]作为其他方法，已知有:为了确认将上述压舱水排出时是否满足上述排出基准，使以送水泵汲取的海水在流通槽流通并进行影像量测的方法(例如专利文献2);使以送水泵汲取的海水在孔隙不同的过滤单元流通，使滤网上的微生物发光并计算微生物数量(例如专利文献3)等的微生物检查装置。
[0011]上述专利文献2记载的微生物检查装置具备:染色部，使液体的试样流动并将存在于该试样中的具有活细胞的生物染色；浓缩部，使施加该染色的检测体流动并浓缩以使该生物的浓度提高；个体量测部，取得该浓缩的检测体中的含有该生物的个体的影像信息；以及控制机构，通过以该个体量测部输出的该个体的影像信息进行该生物的测定。
[0012]由此，由于可将检测体的液体中的生物的染色步骤、液体中的生物的浓缩步骤、液体中的生物的信息取得步骤等一连串地进行，因此与个别进行各方式的手法相比，可将结束一个步骤试样的一部分前进至下一步骤为止的待机时间大幅地缩短，或使其为0，在防止待机时间的染色状态的劣化的意味下具有可获得稳定的生物死活的信息等优点。
[0013]然而，上述专利文献2记载的微生物检查装置，为了使以送水泵汲取的海水于各种步骤依序流通，因此装置大型化，制造成本变高。并且测定结束有至少花费数小时的情形。
[0014]此外，上述专利文献3记载的微生物检查装置，其特征为具备如下步骤:使海水在将孔隙不同的3种滤网直列地配置而构成的过滤单元流通的步骤；使补集于滤网而生存的微生物产生的发色、发光及荧光中的任一项发生的步骤；以及检测发色、发光及荧光中的任一项并通过影像解析计算压舱水或海水中的微生物数的步骤。
[0015]由此，可实现阶段性的各尺寸的微生物的捕捉，其结果，可迅速地测定是否满足各尺寸的基准所限制的容许残存基准。
[0016]然而，专利文献3记载的微生物检查装置，与专利文献I同样地使以送水泵汲取的海水于各种步骤依序流通，有装置大型化、制造成本变高的情形。
[0017]现有技术文献
[0018]专利文献
[0019]专利文献1:日本特开平3-43069
[0020]专利文献2:日本特开2009-85898
[0021]专利文献3:日本特开2007-135582
【发明内容】
[0022]发明所要解决的课题
[0023]鉴于上述问题，本发明的技术课题在于提供一种能够将压舱水中的微生物的量简便、短时间、且高精度地测定的微生物的检查方法及其装置。
[0024]用于解决课题的方法
[0025]为了解决上述问题，本发明提供一种技术手段，是用于测定试样溶液中的微生物量的微生物的检查装置；具备:搅拌混合机构，具有以透光材质形成的试样容器，在该试样容器内进行试样溶液的搅拌.混合；激发光源，对上述试样容器照射激发光；光接收机构，检测光线并转换为电气信号；以及控制机构，计算该试样容器中的试样所含有的微生物量，上述试样溶液通过在试样添加对微生物染色的荧光染色试剂而构成，上述光接收机构检测来自上述激发光源的上述激发光的照射所产生的、来自上述试样溶液的荧光发光；上述控制机构基于来自上述接收机构的电气信号检测发光数，计算上述试样容器中的试样所含有的微生物量。
[0026]由此，在试样容器添加试样、将微生物染色的荧光染色试剂，通过搅拌混合机构进行试样容器的搅拌.混合，接着搅拌试样溶液并使激发光入射至试样容器，进一步，由于以光接收机构接收微生物的荧光发光，因此若与未加搅拌而静置量测的方法比较，则在极短时间微生物明亮地发光，可简便并短时间地量测压舱水中的微生物的量。此外，因本发明的装置并非为流通式因此可将装置小型化，制造成本也变得低廉。
[0027]此外，方案2的发明，其特征为:在上述光接收机构与上述控制机构之间具备滤波机构；上述滤波机构过滤来自上述光接收机构的电气信号中的、低频成分的干扰及高频成分的干扰。
[0028]由此，将电气信号导入控制机构前，以滤波机构过滤扰动，因此可明确地区别和微生物的荧光发光的光接收量相对应的电气信号与扰动。由此，可不产生微生物量的测定误差，也不产生测定值产生差异的问题地稳定测定。
[0029]方案3的发明，其特征为:上述滤波机构为连结高通滤波器与低通滤波器的带通滤波器。
[0030]方案4的发明，其特征为:上述激发光源配置为以与上述试样容器正交的方式照射激发光；上述光接收机构配置为以与上述激发光源的激发光正交的角度接收上述荧光发光。
[0031]由此，来自激发光源的激发光不直接入射至光接收机构，此外，由于荧光发光的厚度部分变薄(例如，如同图2，发光部分的宽度虽过去为20mm?30mm，但如宽度M(3mm)地变窄，厚度部分变薄)，因此背景与微生物的荧光发光的光量的差异变得极为明确，提高微生物的荧光发光的检测精度。
[0032]此外，方案5的发明，其特征为:在上述光接收机构与上述试样容器之间设置狭缝构件。
[0033]由此，由于使成为干扰的背景的荧光发光的面积缩窄，因此提升对于背景的荧光发光的微生物的荧光发光的信号的比，提高微生物的荧光发光的检测精度。
[0034]进一步，方案6的发明，其特征为:在上述激发光源与上述试样容器之间设置将来自上述激发光源的光线转换为平行光的平行光转换机构。
[0035]由此，抑制来自激发光源的激发光的扩散，因以平行光照射试样容器的被照射面，因此背景的荧光发光的厚度部分变薄，提升对于背景的荧光发光的微生物的荧光发光的信号的比，提高微生物的荧光发光的检测精度。
[0036]方案7的发明，其特征为:上述平行光转换机构通过在平板穿设螺纹孔而形成。
[0037]由此，通过低价的材料使来自激发光源的激发光受螺纹孔限制角度，可使从螺纹孔照射的光线的定向角缩窄。因此，由于使背景的荧光发光的厚度部分变薄，因此提升对于背景的荧光发光的微生物的荧光发光的信号的比，提高微生物的荧光发光的检测精度。
[0038]此外，方案8的发明，其特征为:上述平行光转换机构由凸透镜形成。
[0039]由此，可通过低价的材料将来自激发光源的激发光的定向角缩窄。因此，背景的荧光发光的厚度部分变薄，提升对于背景