个平行实验，取平行实验结果的平均值， 结果如图1所不。
[0026] 对比例3 :设置不加菌的对照实验，即培养液中不加菌，其余与实验例1相同，定 时取样测定菲残留量，每个实验设两个平行实验，取平行实验结果的平均值，结果如图1所 不〇
[0027] 菲的残留量采用紫外分光光度法测定，其前处理步骤如下：待测样品中加入等体 积的环己烷萃取，萃取液浓缩后过无水硫酸钠，定容后以环己烷作参比，用UV1200分光光 度计在254nm处测定其吸光值OD254。
[0028] 纳米竹炭对鞘氨醇单胞菌GY2B降解菲的影响如图1所示。由图可知，添加200mg/ L纳米竹炭后的实验中，菌株GY2B降解菲的速率显著加快：4h菲降解接近40%，8h菲降解 约80% (而同期不添加纳米竹炭的样品中菲的降解率不足20% )，18h时只剩6%，48h后 菲几乎完全降解。
[0029] 本实施例说明200mg/L的纳米竹炭可大大促进菌株GY2B对菲的降解效率，缩短菲 在水中的停留时间。
[0030] 实施例2纳米竹炭浓度对多环芳烃菲生物降解的影响
[0031] 实验例2 :将活化后的GY2B菌悬液离心，离心之后倒去上清液，保留下层菌体，然 后菌体用磷酸盐缓冲溶液洗涤，之后再离心，然后倒去上清，下层菌体再洗涤，重复三次。
[0032] 并用无机盐培养基重悬。取2mL上述菌液到18mL无机盐培养基中，所述无机盐 培养基中添加有菲和纳米竹炭，接种后培养液中初始菌浓度为9X106个/mL、菲浓度为 10011^/1、纳米竹炭的浓度分别为20、50、20011^/1。同时设不加纳米竹炭只加菌的对照实验。 定时取样测定菲的残留量，每个实验设两个平行实验，取平行实验结果的平均值，结果如图 2所示。
[0033] 实验例3 :接种后的培养液纳米竹炭的浓度为50mg/L，其余与实验例2相同，定 时取样测定菲残留量，每个实验设两个平行实验，取平行实验结果的平均值，结果如图2所 不〇
[0034] 对比例4 :接种后的培养液纳米竹炭的浓度为20mg/L，其余与实验例2相同，定 时取样测定菲残留量，每个实验设两个平行实验，取平行实验结果的平均值，结果如图2所 不〇
[0035] 对比例5 :接种后的培养液不添加纳米竹炭，其余与实验例2相同，定时取样测定 菲残留量，每个实验设两个平行实验，取平行实验结果的平均值，结果如图2所示。
[0036] 不同纳米竹炭浓度对多环芳烃菲生物降解的影响如图2所示。由图可知，添加了 纳米竹炭的实验组菲的去除率明显快于对照组，且从整体上看，纳米竹炭浓度越高，菲的去 除越快。添加50mg/L、200mg/L纳米竹炭的实验组，其在24h的去除率已达到90%，48h几 乎完全去除。而不添加纳米竹炭的对照组，其24h菲的去除率还不到75%。
[0037] 本实施例说明添加的纳米竹炭越多，对多环芳烃菲生物降解的促进作用越明显， 其中添加50-200mg/L纳米竹炭的促进作用显著。
[0038] 实施例3纳米竹炭促进原油的生物降解
[0039] 实验例4:取lmL活化后的GY2B菌悬液到lOmL的无机盐培养液中，无机盐培养 液中添加有原油和纳米竹炭，其中原油预先在30°C、150r/min恒温振荡培养箱中振荡挥发 48h，接种后培养液中初始菌浓度约为7. 5X106个/mL、原油浓度为500mg/L、纳米竹炭的浓 度分别为50和200mg/L。同时设不加纳米竹炭只加菌的对照实验，每组实验设两个平行。 30°C、150r/min培养72h后取样用环己烷萃取测定原油的残留量。
[0040] 原油的残留量采用紫外分光光度法测定，以环己烷作参比，用UV2550分光光度计 在波长229nm处测定其吸光值0D229，实验结果见表1所示。结果显示，随着纳米竹炭添加量 (0、50、500mg/L)的增加，培养液中原油的残留浓度逐渐减少，说明纳米竹炭对菌株GY2B降 解原油具有明显的促进作用。
[0041] 表1纳米竹炭对GY2B降解原油的影响
[0042]
【主权项】
1. 一种降解石油组分的降解液，其特征在于：所述降解液包括鞘氨醇单胞菌和纳米竹 炭，所述鞘氨醇单胞菌是鞘氨醇单胞菌GY2B菌株，该菌株已于2006年2月24日在中国典 型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC No. M206019。
2. 如权利要求1所述的降解石油组分的降解液，其特征在于：所述纳米竹炭的浓度为 50-200 mg/L〇
3. 如权利要求1或2所述的降解石油组分的降解液，其特征在于：所述鞘氨醇单胞菌 接种至降解液中的初始菌量达到IO6个/ml以上。
4. 一种如权利要求1-3任一项所述的降解石油组分的方法，其特征在于：用海藻酸钠 固定法将纳米竹炭与功能微生物进行固定化，制备出固定化微生物制剂，将所述固定化微 生物制剂用于石油组分的降解中。
5. -种如权利要求1-3任一项所述的降解石油组分的方法，其特征在于：所述降解液 用于降解的石油组分包括原油。
6. -种如权利要求1-3任一项所述的降解石油组分的方法，其特征在于：所述降解液 用于降解的石油组分包括多环芳烃菲。
7. 如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述多环芳烃菲的浓度为不高于100 mg/L。
8. 如权利要求5所述的方法，其特征在于：原油的浓度为不高于500 mg/L。
9. 如权利要求4所述的方法，其特征在于：在含石油组分废水的生物处理及石油污染 水体生物修复中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种利用纳米竹炭强化功能微生物降解石油组分的方法及应用，所述功能微生物为鞘氨醇单胞菌（Sphingomonas sp.）GY2B，所述石油组分包括多环芳烃（菲）和原油，在添加50-200mg/L纳米竹炭的情况下，可显著提高功能菌株GY2B对水中石油组分的降解能力，用海藻酸钠包埋法将纳米竹炭与功能微生物GY2B进行固定化后可应用于含石油组分废水的生物处理和石油污染水体的生物修复。
【IPC分类】C12R1-01, C12N11-14, C02F3-34, C02F101-32
【公开号】CN104651346
【申请号】CN201410723019
【发明人】陶雪琴, 佘博嘉, 卢桂宁, 邹梦遥, 杜建军
【申请人】仲恺农业工程学院
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2014年12月4日