、PCold质粒载体等。其中，从蛋白的生产性的观点考虑，优选使用pET22b(+)质 粒载体。作为所述宿主，可使用例如动物细胞、植物细胞、微生物等。
[0034] 当本发明的掺入液作为100质量％时，介质（源自天然蜘蛛丝蛋白的多肽）的浓 度优选为3~50质量％，更优选为3. 5~35质量％，特别优选为4. 2~15. 8质量％。
[0035] 除去杂质和气泡，掺入液的粘度优选为15~SOcP (厘泊），掺入液的粘度更优选 为20~70cP。使用该粘度的掺入液进行薄膜流延成型。即，优选地在形成有离型层的PET 薄膜基板上流延所述掺入液，使用涂布器、刀式涂布机、棒式涂布机等的膜厚度的控制方法 制成一定厚度的湿膜，干式的情况下使溶剂干燥，通过真空干燥、热风干燥、风干等进行干 燥和/或脱溶剂。湿式的情况下将流延薄膜浸渍于脱溶剂槽（或也称为凝固槽。）脱离溶 剂。之后，可如上述那样进行拉伸。
[0036] 在本发明中可制成彩色薄膜。首先，将染料等的着色剂预先溶解或分散于DMS0， 作为DMSO着色液。着色剂易于溶解或分散于DMS0。将该着色液加入至掺入液中或在掺入 液中加入着色液并进行混合，与上述相同地进行薄膜流延成型。之后，进行干燥和/或脱溶 剂，作为未拉伸着色薄膜、或者还可进行拉伸。彩色薄膜可应用于反射板、标志、防紫外线 膜、狭缝线等。 实施例
[0037] 下面通过实施例对本发明进行详细说明。需要说明的是，本发明并不局限于以下 实施例
[0038] <各测定方法> (1)透光度 使用岛津制作所社制、紫外可见近红外分光光度计。 (2) 热分析 使用Seiko Instruments Inc.制，示差热热重量同时测定装置（TG-DTA)装置。 (3) 折射率 按照JIS K 7142,使用ATAGO社制的阿贝折光仪2T，测定温度为23°C，光源为Na灯（D 线/589nm)，测定数为3,接触液：二碘甲烷。 (4) 粘度 使用KEM社制、EMS装置。 (5) 拉伸试验 使用岛津制作所社制、拉伸试验装置。 (6) 薄膜的厚度测定 使用新泻精机社制，数字式外径千分尺。 (7) 溶剂残量测定 准备浓度为3100ppm(0. 00310mg/ml)的1，2_二氯乙烷-甲酸溶液作为内标。蛋白质溶 液（IOml的甲酸中溶解了 0.1 g蛋白薄膜的溶液）500 μ 1与内标溶液500 μ 1混合。进而，为 了 H-NMR测定，加入同量程度的氘代乙腈溶剂，稀释成约2倍，进行了 H-NMR测定（NMR的机 器种类：JEOL社制JNM-ECX 100)。对于内标样品1，2-二氯乙烷的H-NMR积分强度与DMSO 的H-NMR积分强度进行了比较。对于校准曲线而言，通过制作3ppm~3000ppm的DMSO-甲酸 溶液，并根据上述操作而制成校准曲线。从与校准曲线的比较计算出了蛋白质溶液中DMSO 的浓度。DMSO浓度的测定使用JEOL社制，核磁共振仪（NMR)。
[0039] (实施例1~4,比较例1) 1.源自蜘蛛丝蛋白的多肽的准备 <基因合成> (l)ADF3Kai的基因的合成 通过NCBI的网络数据库取得作为十字园蛛的2个主要的牵引丝蛋白之一的 ADF3 (GI: 1263287)的部分氨基酸序列，委托GenScript社合成编码向上述序列的N末端附 加由起始密码、HislOTAG和HRV3C蛋白酶（Human rhinovirus3C蛋白酶）识别位点构成的 氨基酸序列（序列编号4)而得到的氨基酸序列（序列编号2)的基因。其结果，获得了导 入了由以序列编号5表示的碱基序列组成的ADF3Kai基因的pUC57载体（在基因的5'末 端上游具有Nde I位点及在5'末端下游具有Xba I位点）。之后，通过Nde I和EcoR I将 上述基因进行限制性内切酶处理，并重组于pET22b (+)表达载体。
[0040] (2)ADF3Kai_Large 的基因的合成 以ADF3Kai为模板使用T7启动子引物（序列编号8)和R印Xba I引物（序列编号9) 进行PCR反应，扩增ADF3Kai的基因序列中的5'侧一半的序列（以下，表示为序列A。）， 使用Mighty Cloning Kit (Takara Bio株式会社制），将上述片断重组于预先通过Nde I 和Xba I进行了限制性内切酶处理的pUC118载体。同样地，以ADF3Kai为模板使用Xba I R印引物（序列编号10)和17终止子引物（序列编号11)进行PCR反应，扩增ADF3Kai的 基因序列中的3'侧一半的序列（以下，表示为序列B。），使用Mighty Cloning Kit(Takara Bio株式会社制），将上述片断重组于预先通过Xba I，EcoR I进行了限制性内切酶处理的 PUC118载体。将导入了序列A的pUC118载体用Nde I、Xba I进行限制性内切酶处理，导入 了序列B的pUC118载体用Xba I、EcoR I进行限制性内切酶处理，通过将凝胶切出而精制 了序列A和序列B的目的DNA片断。使DNA片断A、B与预先通过NdeI和EcoR I进行了限 制性内切酶处理的pET22b(+)进行连接反应，转化至大肠杆菌DH5a。通过使用T7启动子 引物和T7终止子引物的菌落PCR，确认目的DNA片断插入后，从得到了目的大小（3. 6kbp) 的条带的菌落中提取质粒，通过使用3130x1 Genetic Analyzer (Applied Biosystems)进 行的序列反应确认了全碱基序列。其结果，确认了由序列编号6所示的ADF3Kai-Large基 因的构建。需要说明的是，ADF3Kai-Large的氨基酸序列如序列编号3所示。
[0041] (3)ADF3Kai-Large-NRSHl 的基因的合成 将导入了在上述中得到的ADF3Kai-Large的基因的pET22M+)载体作为模板，通 过使用PrimeStar Mutagenesis Basal Kit(Takara Bio株式会社制）的部位特异的 变异导入，使与ADF3Kai-Large的氨基酸序列（序列编号3)中的第1155位的氨基酸 残基甘氨酸（Gly)相对应的密码子GGC变异为终止密码子TAA，并将由序列编号7所示 的ADF3Kai-Large-NRSHl的基因构建于pET22b(+)上。对于变异导入的正确性而言，通 过使用3130x1基因分析仪（应用生物系统）的序列反应进行了确认。需要说明的是， ADF3Kai-Large-NRSHl的氨基酸序列如序列编号1所示。
[0042] <蛋白的表达> 将含有在上述中得到的ADF3Kai-Large-NRSHl的基因序列的pET22b(+)表达载体转化 至大肠杆菌Rosetta (DE3)。将得到的单一菌落在含有氨比西林2mL的LB培养基下培养15 小时后，将此培养液I. 4ml添加至含有氨比西林HOmL的LB培养基中，在37°C，200rpm的 条件下进行培养，直至培养液的〇D_变为3. 5。其次，将OD _为3. 5的培养液和50%葡萄 糖HOmL -起加入至含有氨比西林的7L的2XYT培养基中，以OD6c?变为4. 0的方式进行 了培养。之后，向得到的OD6c?为4. 0的培养液中，以最终浓度成为0. 5mM的方式添加异丙 基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG)并诱导了蛋白表达。在添加 IPTG并经过2小时后，离心分 离培养液并回收了菌体。使由IPTG添加前和IPTG添加后的菌体所制备的蛋白质溶液在聚 丙烯酰胺凝胶中电泳，依赖于IPTG添加观察到目的大小（约101. IkDa)的条带，确认了目 的蛋白的表达。
[0043] < 精制 > (1) 向离心管（1000 ml)中添加表达了 ADF3K