ARDN.FIELDS等人，VIROLOGY,第2卷，第69章（第 4版，Lippincott-RavenPublishers)。已鉴定出许多另外的AAV血清型和分化枝（参见 例如Gao等人，（2004)JKiroi78:6381-6388和表1)，其也包括在术语"AAV"中。
[0036] 各种AAV和自主细小病毒的基因组序列，以及ITR、Rep蛋白、和衣壳亚基的序列是 本领域已知的。这些序列可在文献或公用数据库，例如GenBank?数据库中找到。参见例如 GenBank? 检索号NC002077、NC001401、NC001729、NC001863、NC001829、NC001862、 NC000883,NC00170UNC001510,AF063497,U89790,AF043303,AF028705,AF028704, J02275、J01901、J02275、X01457、AF288061、AH009962、AY028226、AY028223、NC001358、 NC001540、AF513851、AF513852、AY530579、AY631965、AY631966 ;其公开内容以其整体结 合到本文中。也参见例如Srivistava等人，（1983)J 45:555;Chiorini等人， (1998) 乂 71:6823;Chiorini等人，（1999) 7； 73:1309 ;Bantel-Schaal 等人，（1999) 7； 73:939;Xiao等人，（1999) 7； 73:3994;Muramatsu 等人，（1996) 221:208;Shade等人，（1986) 7；Virol.58:921;Gao等 人，（2002) /￥oc. JcatZ5bi. 99:11854 ;国际专利公开TO00/28061、 TO99/61601、WO98/11244;美国专利号6, 156, 303;其公开内容以其整体结合到本文 中。也参见表UAAV1、AAV2和AAV3末端重复序列的早期描述由下文提供：Xiao，X.， (1996),"CharacterizationofAdeno-associatedvirus(AAV)DNAreplication andintegration(腺伴随病毒（AAV)DNA复制和整合的表征）"Ph.D.Dissertation, UniversityofPittsburgh,Pittsburgh,PA(以其整体结合到本文中）。
[0037]表1
【主权项】
1. 编码AAV衣壳的核酸，所述核酸包含与以下序列具有至少90%同一性的AAV衣壳编 码序列： (a) SEQIDNO: 1的核苷酸序列；或 (b) 编码SEQIDNO:2-4之一的核苷酸序列。
2. 权利要求1的核酸，其中所述AAV衣壳编码序列与（a)或（b)的核苷酸序列具有至 少95%同一性。
3. 权利要求1的核酸，其中所述AAV衣壳编码序列包含（a)或（b)的核苷酸序列。
4. 权利要求1-3中任一项的核酸，其中所述核酸是质粒、噬菌体、病毒载体、细菌人工 染色体、或酵母人工染色体。
5. 权利要求1-4中任一项的核酸，其中所述核酸是包含所述编码序列的AAV载体。
6. 权利要求1-5中任一项的核酸，其中所述核酸进一步包含AAVrep编码序列。
7. 体外的细胞，其包含稳定地并入基因组的权利要求1-6中任一项的核酸。
8. 病毒颗粒，其包含权利要求1-6中任一项的核酸。
9. 权利要求8的病毒颗粒，其中所述病毒颗粒是AAV颗粒、腺病毒颗粒、疱瘆病毒颗 粒、或杆状病毒颗粒。 10. AAV衣壳，其包含与SEQIDNO: 2-4之一具有至少96%同一性的氨基酸序列。
11. 权利要求10的AAV衣壳，其包含与SEQIDNO: 2-4之一具有至少99%同一性的氨 基酸序列。
12. 权利要求10的AAV衣壳，其包含SEQIDNO: 2-4之一的氨基酸序列。
13. 权利要求10-12中任一项的AAV衣壳，其与选自以下的化合物共价连接、结合或将 所述化合物壳体化：DNA分子、RNA分子、多肽、碳水化合物、脂质和有机小分子。 14. AAV颗粒，其包含： AAV载体基因组；和 权利要求10-12中任一项的AAV衣壳，其中所述AAV衣壳将所述AAV载体基因组壳体 化。
15. 权利要求14的AAV颗粒，其中所述AAV载体基因组包含异源核酸。
16. 权利要求14的AAV颗粒，其中所述异源核酸编码反义RNA、微RNA、或RNAi。
17. 权利要求14的AAV颗粒，其中所述异源核酸编码多肽。
18. 权利要求17的AAV颗粒，其中所述异源核酸编码治疗性多肽。
19. 权利要求17的AAV颗粒，其中所述异源核酸编码生长因子或分化因子。
20. 权利要求17的AAV颗粒，其中所述异源核酸编码胰岛素生长因子-1、神经胶质衍 生的神经营养因子、神经营养蛋白-3、artemin、转化生长因子a、血小板衍生的生长因子、 白血病抑制因子、催乳素、单羧酸转运蛋白1或核因子1A。
21. 权利要求17的AAV颗粒，其中所述异源核酸编码报告蛋白。
22. 权利要求15-21中任一项的AAV颗粒，其中所述异源核酸与组成型启动子操作性 关联。
23. 权利要求15-21中任一项的AAV颗粒，其中所述异源核酸与少突胶质细胞特异性 或少突胶质细胞优选的启动子操作性关联。
24. 权利要求23的AAV颗粒，其中所述少突胶质细胞特异性或少突胶质细胞优选的 启动子是选自以下的启动子：髓磷脂碱性蛋白、环状核苷酸磷酸二酯酶、蛋白脂质蛋白、Gtx或SoxlO0
25. 产生包含AAV衣壳的重组AAV颗粒的方法，所述方法包括： 在体外向细胞提供权利要求1-6中任一项的核酸、AAVrep编码序列、包含异源核酸的AAV载体基因组和用于产生生产性AAV感染的辅助功能；和 允许包含AAV衣壳和将AAV载体基因组壳体化的重组AAV颗粒的装配。
26. 通过权利要求25的方法制备的AAV颗粒。
27. 药物制剂，其在制药上可接受的载体中包含权利要求1-6中任一项的核酸，权利 要求8或9中任一项的病毒颗粒，权利要求10-13中任一项的AAV衣壳，或权利要求14-24 或26中任一项的AAV颗粒。
28. 将目的核酸递送到少突胶质细胞的方法，所述方法包括使所述少突胶质细胞接触 权利要求14-24或26中任一项的AAV颗粒。
29. 在哺乳动物受试者中将目的核酸递送到少突胶质细胞的方法，所述方法包括： 将有效量的权利要求14-24或26中任一项的AAV颗粒或权利要求27的药物制剂给予 哺乳动物受试者。
30. 权利要求29的方法，其中所述哺乳动物受试者是人类受试者。
31. 权利要求29或30的方法，其中所述AAV颗粒被递送到中枢神经系统（CNS)。
32. 权利要求31的方法，其中所述AAV颗粒通过鞘内、脑内、心室内、鼻内、耳内、眼内 或眼周围递送或其任何组合直接递送到CNS。
33. 权利要求31的方法，其中所述受试者具有受累的血脑屏障并且所述AAV颗粒通过 静脉内给予而递送到CNS。
34. 在哺乳动物受试者中将目的核酸递送到与受累的血脑屏障区域毗邻的CNS区的 方法，所述方法包括： 将有效量的权利要求14-24或26中任一项的AAV颗粒或权利要求27的药物制剂经静 脉内给予哺乳动物受试者。
35. 在有需要的哺乳动物受试者中治疗少突胶质细胞功能失调的相关病症的方法，所 述方法包括将治疗有效量的权利要求14-24或26中任一项的AAV颗粒或权利要求27的药 物制剂给予哺乳动物受试者。
36. 权利要求35的方法，其中所述少突胶质细胞功能失调的相关病症是脱髓鞘疾病。
37. 权利要求35的方法，其中所述少突胶质细胞功能失调的相关病症是多发性硬化、 佩利措伊斯-梅茨巴赫病、克拉伯病、异染性脑白质营养不良、肾上腺脑白质营养不良、卡 纳万病、亚历山大病、正染脑白质营养不良、Zellweger病、18q_综合征、脑麻痹、脊髓损伤、 创伤性脑损伤、中风、苯丙酮尿或病毒感染。
38. 制备具有目的向性特征的AAV衣壳的方法，所述方法包括修饰权利要求10-12中 任一项的AAV衣壳以插入提供目的向性特征的氨基酸序列。
39. 权利要求38的方法，其中所述目的向性特征是选自以下的组织：骨骼肌、肝、心 肌、膈、肾、肝、胰腺、脾、胃肠道、肺、关节组织、舌、卵巢、睾丸、生殖细胞、癌细胞或其组合。
【专利摘要】本发明涉及靶向少突胶质细胞的嵌合AAV衣壳、包含该嵌合AAV衣壳的病毒载体、和使用所述载体以靶向少突胶质细胞的方法。
【IPC分类】A61P25-00, C12N7-04, C12N15-864, C12N5-10, C12N15-35, C07K14-015, A61K48-00
【公开号】CN104797593
【申请号】CN201380061946
【发明人】T.麦考恩, S.格雷
【申请人】北卡罗来纳-查佩尔山大学
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2013年9月27日
【公告号】CA2885544A1, EP2900686A1, US20150238550, WO2014052789A1