一种用于动物组织基因组dna和rna快速提取试剂盒及提取方法和应用_2

%的乙醇，pH 7. 0。
[0020] 用该试剂盒提取动物组织如心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏等，这些动物组织需要先 研磨成糊状，然后进行提取，提取步骤如下： (1) 取研磨后的动物组织20mg，加500 μL裂解液，70°C水浴2 min，12000 rpm 30 S， 分离出上清液； (2) 将上清液转入离心管中，加500 μ 1无水乙醇，分次转到DNA和RNA纯化柱上， 12000 rpm离心30 S ;得到粗提的DNA和RNA，倒掉收集管中的废液； (3) 用500 μ 1冲洗液1冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (4) 用600 μ 1冲洗液2冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (5) 用500 μ 1冲洗液2冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (6) 再次12000离心30 S，得到基因组DNA和RNA ; (7) 将DNA和RNA纯化柱转到另一离心管，加50 μ 1 1%的DEPC水溶液，12000 rpm离 心30 S，即可得到高纯度的病毒及组织基因组的DNA和RNA，于-20 °C保存备用。
[0021] 实施例2:-种用于动物组织基因组DNA和RNA快速提取试剂盒及提取方法，与例 1基本相同，不同之处在于： 试剂盒试剂：包括裂解液、冲洗液1、冲洗液2和无水乙醇和0. 5% (重量比)的焦碳酸二 乙酯水溶液。
[0022] 各试剂成分： (1) 裂解液：EDTA 30 mM，重量比1%的聚乙二醇辛基苯基醚，IM的异硫氰酸酯，0.5 M的 氯化钠； (2) 冲洗液I :5 mM的EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7. 0 ; (3) 冲洗液2 :含有65mM Tris-HCl，体积比80%的乙醇，pH 7. 0。
[0023] 实施例3:-种用于动物组织基因组DNA和RNA快速提取试剂盒及提取方法 (1)试剂盒包括裂解液、冲洗液1、冲洗液2、无水乙醇和0. 5~1. 5% (重量比）的焦碳酸 二乙酯水溶液。
[0024] 各试剂成分： 裂解液：EDTA 40禮，2%聚乙二醇辛基苯基醚，异硫氰酸酯2 M，0. 7 M氯化钠； 冲洗液1 :10 mM EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7. 0 ; 冲洗液2 :含有75 mM Tris-HCl，体积比80%的乙醇，pH 7. 0。
[0025] 按以下程序提取动物组织（心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏)、全血、血浆、血清、动物 分泌物(乳液、鼻液）的基因组DNA和RNA : (1) 取以上动物组织50 μL，加500 μL裂解液，70°C水浴2 min，12000 rpm 30 S，分 离出上清液； (2) 将上清液转入离心管中，加500 μ 1无水乙醇，分次转到DNA和RNA纯化柱上， 12000 rpm离心30 S ;得到粗提的DNA和RNA，倒掉收集管中的废液； (3) 用500 μ 1冲洗液1冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (4) 用600 μ 1冲洗液2冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (5) 用500 μ 1冲洗液2冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (6) 再次12000 rpm离心30 S，得到基因组DNA和RNA ; (7) 将DNA和RNA纯化柱转到另一离心管，加50 μ 1 1%的DEPC水溶液，12000离心 30 S，即可得到高纯度的病毒及组织基因组的DNA和RNA，于-20 °C保存备用。
[0026] 实施例4:一种用于动物组织基因组DNA和RNA快速提取试剂盒及提取方法，和例 1基本相同，不同之处在于：采用〇. 5% (重量比）的焦碳酸二乙酯水溶液； 裂解液：EDTA 50禮，3%聚乙二醇辛基苯基醚，异硫氰酸酯3 M，0.9 M氯化钠； 冲洗液1 :15 mM EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7. 0 ; 冲洗液2 :含有85 mM Tris-HCl，体积比80%的乙醇，pH 7. 0。
[0027] 按以上实施例的方法提取的基因组DNA浓度结果，见下表1.
【主权项】
1. 一种用于动物组织基因组DNA和RNA的快速提取试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括 以下试剂：裂解液、冲洗液1、冲洗液2、无水乙醇和重量比为0. 5~1. 5%的焦碳酸二乙酯水溶 液，其中裂解液、冲洗液1、冲洗液2的组成分别为： (1) 裂解液：EDTA 30~50 mM，重量比1~3%的聚乙二醇辛基苯基醚，异硫氰酸酯1~3 M， 0. 5~0. 9 M氯化钠； (2)冲洗液I :5~15 mM EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7. 0 ; (3) 冲洗液2 :含有65~85 mM Tris-HCl，体积比80%的乙醇，pH 7. 0。
2. 根据权利要求1所述的用于动物组织基因组DNA和RNA的快速提取试剂盒，其特征 在于，其中：焦碳酸二乙酯水溶液的浓度为1% ; 裂解液：EDTA 40禮，重量比2%的聚乙二醇辛基苯基醚，异硫氰酸酯2 M，0.7 M氯化 钠； 冲洗液I :10 mM EDTA，体积比70%的乙醇，pH 7. 0 ; 冲洗液2 :含有75 mM Tris-HCl，体积比80%的乙醇，pH 7. 0。
3. -种利用权利要求1或2所述的DNA和RNA快速提取试剂盒提取动物组织基因组的 方法，其特征在于，该方法包括以下步骤： (1)将固体状的动物组织先进行研磨处理，液体状的动物组织直接用于提取； (1) 取液体状动物组织20 y 1~100 y 1，或取研磨后的固体状动物组织20mg~100 mg， 加500 yl裂解液，70°C水浴3-5 min，12000 rpm 30 S，分离出上清液； (2) 将上清液转入离心管中，加500 yl无水乙醇，分次转到DNA和RNA纯化柱上， 12000 rpm离心30 S ;得到粗提的DNA和RNA，倒掉收集管中的废液； (3) 用500 yl冲洗液1冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (4) 用600 yl冲洗液2冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (5) 用500 y 1冲洗液2冲洗纯化柱，12000 rpm离心30 S，倒掉收集管中的废液； (6) 再次12000离心30 S ; (7) 将DNA和RNA纯化柱转到另一离心管，加50 y 1焦碳酸二乙酯水溶液，12000 rpm 离心30 S，即可得病毒及组织基因组的DNA和RNA，于-20 °C保存备用。
4. 根据权利要求3的所述DNA和RNA快速提取试剂盒提取动物组织基因组的方法，其 特征在于，所述固体状的动物组织为心脏、肝脏、肺脏、脾脏或肾脏；所述液体状的动物组织 为全血、血浆、血清或动物分泌物。
5. 权利要求1所述的试剂盒在用于动物组织基因组DNA和RNA快速提取中的应用。
【专利摘要】本发明涉及一种用于动物组织基因组DNA和RNA的快速提取试剂盒，包括裂解液、冲洗液1、冲洗液2、无水乙醇和焦碳酸二乙酯水溶液；提取时先将固体状动物组织研磨，液体状动物组织直接提取；样品经过裂解后，基因组DNA和RNA被分别吸附在DNA和RNA吸附柱上，然后用焦碳酸二乙酯水冲洗即可得到全基因组DNA和RNA。本试剂盒可用于动物组织的基因组DNA、RNA同时提取和纯化；该方法整个提取过程只需5分钟；提取效率高、检测灵敏度高，为早期诊断各类DNA和RNA细菌或病毒病原体感染和早期诊断提供可靠的实验依据；本发明适用于所有科研单位、临床病原检测、分子遗传学研究、临床基因诊断及动物疾病诊断和疾病控制中心使用，具有广阔的市场前景和较大的经济效益。
【IPC分类】C12N15-10
【公开号】CN104862305
【申请号】CN201510333776
【发明人】李海利, 朗利敏, 徐引弟, 杨宁, 徐照学, 郑万录, 盛卫东, 王李辉
【申请人】河南省农业科学院畜牧兽医研究所
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年6月17日