Bmp-6抗体的制作方法
【专利说明】BMP-6抗体
[0001] 本发明涉及医药领域。更具体而言，本发明涉及结合人BMP-6且可用于治疗慢性 疾病的贫血（ACD)诸如癌症的贫血或慢性肾病的贫血（CKD)的抗体或其抗原结合片段。
[0002] BMP-6是骨形态发生蛋白（BMP)家族的成员；在BMP家族中存在多于20个成员。 BMP家族成员是起始SMAD途径中的信号传导从而导致细胞中的转录调节的配体。BMP-6敲 除小鼠被报导为活的且可育的，并且显示正常骨和软骨发育，而密切相关的BMP-7的敲除 小鼠在出生后即死亡且伴随肾、眼和骨缺陷。已显示，BMP-6或BMP-7的单独敲除不改变心 脏生成，但BMP-6和BMP-7的双敲除确实显示心脏的几种缺陷和延迟，且胚胎由于心功能不 全而死亡。也已显示，小鼠模型中BMP-7的存在在防止与纤维化相关的慢性心脏病的进展 中是重要的。因此，当用BMP-6抗体抑制人BMP-6时，针对BMP-7的交叉反应性可能并不期 望。
[0003] 当过度活化的炎性细胞因子引起铁稳态失调、红细胞生成减少和红细胞寿命减少 时，某些慢性疾病诸如癌症、肾病和自体免疫病症可导致ACD。已将铁调素（Hepcidin)鉴定 为参与铁稳态的关键激素；高水平的铁调素与见于ACD中的铁限制性红细胞生成相关。已 显示BMP-6增加铁调素表达。
[0004] WO 2010/056981公开在小鼠中施用针对人BMP-6产生的小鼠抗体；已报道，在使 用可购自R&D Systems的该小鼠抗体MAB507的三天方案后的一个时间点，铁调素的减少 和铁的增加。还公开针对BMP的选择性，且显示施用某些剂量的BMP-6抗体MAB507抑制 BMP-7。然而，迄今为止，没有靶向BMP-6的抗体经批准用于治疗应用。
[0005] 仍需要提供替代性BMP-6抗体。具体而言，仍需要提供对BMP-6的选择性高于对其 它BMP家族成员（包括BMP-7)的有效BMP-6抗体。也仍需要提供以下有效BMP-6抗体：其 对BMP-6的选择性高于对其它BMP家族成员（包括BMP-7)且产生延长的药效动力学反应。 也仍需要提供以下有效BMP-6抗体：其对BMP-6的选择性高于对其它BMP家族成员（包括 BMP-7)，其用于治疗A⑶。
[0006] 因此，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体或其抗原结合片段，其 包含轻链可变区（LCVR)和重链可变区（HCVR)，其中LCVR包含互补决定区（⑶R) IXDR1、 LCDR2 和 LCDR3,且 HCVR 包含 CDR HCDR1、HCDR2 和 HCDR3,其中 LCDR1 是多肽 RSSENIYRNLA (SEQ ID NO: 2)，LCDR2 是多肽 AATNLAD (SEQ ID NO: 3)，LCDR3 是多肽 QGIWGTPLT (SEQ ID NO: 4)，HCDR1 是多肽 GYTFTSYAMH (SEQ ID NO: 5)，HCDR2 是多肽 HNPYNDGTKYNENFKG (SEQ ID NO: 6)或HNPYNRGTKYNENFKG (SEQ ID NO: 7)，且HCDR3 是多肽 RPFGNAMDI (SEQ ID NO: 8)。
[0007] 在一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体或其抗 原结合片段，其包含轻链可变区（LCVR)和重链可变区（HCVR)，其中LCVR包含互补决定区 (CDR) LCDR1、LCDR2 和 LCDR3,且 HCVR 包含 CDR HCDR1、HCDR2 和 HCDR3,其中 LCDR1 是多 肽 RSSENIYRNLA (SEQ ID NO: 2)，LCDR2 是多肽 AATNLAD (SEQ ID NO: 3)，LCDR3 是多肽 QGIWGTPLT (SEQ ID NO: 4)，HCDR1 是多肽 GYTFTSYAMH (SEQ ID NO: 5)，HCDR2 是多肽 HNPYNDGTKYNENFKG (SEQ ID NO: 6)，且 HCDR3 是多肽 RPFGNAMDI (SEQ ID NO: 8)。
[0008] 在一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体或其抗 原结合片段，其包含轻链可变区（LCVR)和重链可变区（HCVR)，其中LCVR包含互补决定 区（CDR) LCDR1、LCDR2 和 LCDR3,且 HCVR 包含 CDR HCDR1、HCDR2 和 HCDR3,其中 LCDR1 是 多肽 RSSENHRNLA (SEQ ID NO: 2)，LCDR2 是多肽 AATNLAD (SEQ ID NO: 3)，LCDR3 是多 肽 QGIWGTPLT (SEQ ID NO: 4)，HCDR1 是多肽 GYTFTSYAMH (SEQ ID NO: 5)，HCDR2 是多肽 HNPYNRGTKYNENFKG (SEQ ID NO: 7)，且 HCDR3 是多肽 RPFGNAMDI (SEQ ID NO: 8)。
[0009] 在一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体或其抗原 结合片段，其包含LCVR和HCVR，其中LCVR是多肽SEQ ID NO: 9,且HCVR是多肽SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 11。在又一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1) 的抗体或其抗原结合片段，其包含LCVR和HCVR，其中LCVR是多肽SEQ ID NO: 9,且HCVR是 多肽SEQ ID NO: 10。在另一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1) 的抗体或其抗原结合片段，其包含LCVR和HCVR，其中LCVR是多肽SEQ ID NO: 9,且HCVR 是多肽 SEQ ID NO: 11。
[0010] 在一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体，其包含 LCVR 和 HCVR，其中 LCVR 是多肽 SEQ ID NO: 9,且 HCVR 是多肽 SEQ ID NO: 10 或 SEQ ID NO: 11。在又一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体，其包 含LCVR和HCVR，其中LCVR是多肽SEQ ID NO: 9,且HCVR是多肽SEQ ID NO: 10。在另一 个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体，其包含LCVR和HCVR， 其中 LCVR 是多肽 SEQ ID NO: 9,且 HCVR 是多肽 SEQ ID NO: 11。
[0011] 在一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体，其包含 轻链（LC)和重链（HC)，其中LC是多肽SEQ ID NO: 12,且HC是多肽SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 14。在又一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体，其 包含LC和HC，其中LC是多肽SEQ ID NO: 12,且HC是多肽SEQ ID NO: 13。在另一个实施 方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体，其包含LC和HC，其中LC是多 肽 SEQ ID NO: 12,且 HC 是多肽 SEQ ID NO: 14。
[0012] 在一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体，其包含 两条轻链和两条重链，其中每条轻链是多肽SEQ ID NO: 12,且每条重链是多肽SEQ ID NO: 13。在一个实施方案中，本发明提供结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体，其包含两条 轻链和两条重链，其中每条轻链是多肽SEQ ID NO: 12,且每条重链是多肽SEQ ID NO: 14。
[0013] 本发明还涉及编码上述本发明抗体或其抗原结合片段的多核苷酸，所述多核苷酸 可呈RNA形式或呈DNA形式，该DNA包括cDNA和合成DNA。DNA可以是双链或单链。编码 本发明的抗体或其抗原结合片段的编码序列可由于遗传密码的冗余度或简并性而变化。
[0014] 在一个实施方案中，本发明提供包含编码重链多肽的多核苷酸序列的DNA分子， 该重链多肽具有氨基酸序列SEQ ID NO: 13或氨基酸序列SEQ ID NO: 14。在一个实施方 案中，本发明提供包含编码轻链多肽的多核苷酸序列的DNA分子，所述轻链多肽具有氨基 酸序列 SEQ ID NO: 12。
[0015] 在一个实施方案中，本发明提供了 DNA分子，其包含编码重链多肽的多核苷酸序 列，该重链多肽具有氨基酸序列SEQ ID NO: 13;且包含编码轻链多肽的多核苷酸序列，该 轻链多肽具有氨基酸序列SEQ ID NO: 12。在一个实施方案中，本发明提供了 DNA分子，其 包含编码重链多肽的多核苷酸序列，该重链多肽具有氨基酸序列SEQ ID NO: 14;且包含编 码轻链多肽的多核苷酸序列，该轻链多肽具有氨基酸序列SEQ ID NO: 12。
[0016] 在所述序列可操作地连接至表达控制序列之后，本发明的多核苷酸将在宿主细胞 中表达。表达载体通常可作为游离基因体（印isome)或作为宿主染色体DNA的组成部分而 在宿主生物体中复制。通常，表达载体将含有选择标记（例如四环素（tetracycline)、新霉 素（neomycin)和二氢叶酸还原酶），以容许检测用期望DNA序列转化的那些细胞。
[0017] 本发