化学治疗引起的贫血。
[0040] 除非另有说明，否则如本文关于BMP-6抗体或其抗原结合片段对人BMP-6的亲和 力所使用的〃结合"欲指如通过本领域已知的常用方法所测量的K D小于约1 x 1(T8M，优选 小于约1 x 1(T9 M，所述方法包括基本上如本文所述在37°C下使用表面等离子共振（SPR) 生物传感器来测量。本文关于本发明抗体使用的术语"选择性"是指抗体结合人BMP-6的 K D比所述抗体结合至少一个BMP家族成员（包括，但不限于人BMP-5或人BMP-7)的KD低约 1000-、500-、200-、100-、50-、10-或约5-倍，如在371：下通过表面等离子共振所测量。此 外或可替代地，在通过本文下文实施例2-3中所述的方法测定时，本发明的BMP-6选择性抗 体或其抗原结合片段结合人BMP-6,但不结合或仅最小水平结合至人BMP家族的至少一个 成员，包括但不限于人BMP-5或人BMP-7。
[0041]"有效量"意指将对组织、系统、动物、哺乳动物或人引发研宄者、医师或其它临床 医师所寻求的生物或医学反应或期望治疗效应的本发明抗体或包含本发明抗体的药物组 合物的量。抗体的有效量可根据诸如以下的因素而变化：个体的疾病状态、年龄、性别和体 重以及抗体在该个体中引发期望反应的能力。有效量也是治疗有益效应胜过抗体的任何毒 性或有害效应的量。
[0042] 术语"治疗（treatment、treat、treating) "等意欲包括减慢或逆转病症的进展。 这些术语还包括缓解、改善、减弱、消除或减轻病症或病况的一种或多种症状，即使实际上 并不消除所述病症或病况且即使所述病症或病况本身的进展并没有减慢或逆转。患者是指 患有将受益于抑制BMP-6活性的疾病、病症或病况的哺乳动物，优选人。
[0043] 本发明抗体或其抗原结合片段或包含其的药物组合物可通过肠胃外途径（例如， 皮下、静脉内、腹膜内、肌内或经皮）来施用。本发明抗体或其抗原结合片段可单独或与药 学上可接受的载体和/或稀释剂组合以单一或多剂量施用于患者。本发明的药物组合物 可通过本领域众所周知的方法来制备（例如，以〇/?.? 〇/ Pharmacy,19th ed. (1995)，A. Gennaro等人，Mack Publishing Co.)，且包含如本文所 公开的抗体和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0044] 实施例1:抗体表达和纯化 重链和轻链可变区的多肽、抗体I和抗体II的完全重链和轻链氨基酸序列以及编码其 的核苷酸序列列于下文标题为"氨基酸和核苷酸序列"的部分中。此外，轻链和重链CDR 多肽显示于表1中。
[0045] 本发明抗体或其抗原结合片段（包括，但不限于，抗体I和抗体II)可基本上如 下制备和纯化。可使用最佳预定HC :LC载体比率或编码HC和LC二者的单一载体系统，由 用于分泌抗体的表达系统瞬时或稳定转染适宜宿主细胞，诸如HEK 293 EBNA或CH0。可使 用许多常用技术中的任一者来纯化抗体已经被分泌到其中的澄清培养基。例如，可将培养 基方便地施加至已经用相容缓冲液诸如磷酸盐缓冲盐水（pH 7.4)平衡的针对Fab片段的 MabSelect 柱（GE Healthcare)或 KappaSelect 柱（GE Healthcare)。可以洗绦所述柱以 去除非特异性结合组分。可例如通过pH梯度（诸如20mM Tris缓冲液（pH 7)至10mM柠 檬酸钠缓冲液（pH 3. 0)或磷酸盐缓冲盐水（pH 7. 4)至100mM甘氨酸缓冲液（pH 3. 0))来 洗脱所结合抗体。可诸如通过SDS-PAGE检测抗体级分，且然后可合并。根据预期用途，进 一步纯化是任选的。可使用常用技术将抗体浓缩和/或无菌过滤。可通过常用技术有效地 去除可溶性聚集物和多聚物，所述技术包括体积排阻、疏水性相互作用、离子交换、多模式 (multimodal)或轻磷灰石层析。在这些层析步骤后抗体的纯度大于95%。可将产物立即冷 冻于-70°C下或可冻干。
【主权项】
1. 结合至人BMP-6 (SEQ ID NO: 1)的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区 (LCVR)和重链可变区（HCVR)，其中所述LCVR包含互补决定区（⑶R) IXDRl、IXDR2和 LCDR3,且所述 HCVR 包含 CDR HCDR1、HCDR2 和 HCDR3,其中所述 LCDRl 是多肽 RSSENIYRNLA (SEQ ID NO: 2)，所述LCDR2是多肽MTNLAD (SEQ ID NO: 3)，所述LCDR3是多肽QGIWGTPLT (SEQ ID NO: 4)，所述 HCDRl 是多肽 GYTFTSYAMH (SEQ ID NO: 5)，所述 HCDR2 是多肽 HNPYNDGTKYNENFKG (SEQ ID NO: 6)或 HNPYNRGTKYNENFKG (SEQ ID NO: 7)，且所述 HCDR3 是多肽 RPFGNAMDI (SEQ ID NO: 8)。
2. 权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其中所述IXDRl是多肽RSSENHRNLA (SEQ ID NO: 2)，所述 LCDR2 是多肽 AATNLAD (SEQ ID NO: 3)，所述 LCDR3 是多肽 QGIWGTPLT (SEQ ID NO: 4)，所述 HCDRl 是多肽 GYTFTSYAMH (SEQ ID NO: 5)，所述 HCDR2 是多肽 HNPYNDGTKYNENFKG (SEQ ID NO: 6)，且所述 HCDR3 是多肽 RPFGNAMDI (SEQ ID NO: 8)。
3. 权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其中所述IXDRl是多肽RSSENHRNLA (SEQ ID NO: 2)，所述 LCDR2 是多肽 AATNLAD (SEQ ID NO: 3)，所述 LCDR3 是多肽 QGIWGTPLT (SEQ ID NO: 4)，所述 HCDRl 是多肽 GYTFTSYAMH (SEQ ID NO: 5)，所述 HCDR2 是多肽 HNPYNRGTKYNENFKG (SEQ ID NO: 7)，且所述 HCDR3 是多肽 RPFGNAMDI (SEQ ID NO: 8)。
4. 权利要求1的抗体或其抗原结合片段，其包含LCVR和HCVR，其中所述LCVR是多肽 SEQ ID NO: 9,且所述 HCVR 是多肽 SEQ ID NO: 10 或 SEQ ID NO: 11。
5. 权利要求4的抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR是多肽SEQ ID NO: 9,且所述 HCVR 是多肽 SEQ ID NO: 10。
6. 权利要求4的抗体或其抗原结合片段，其中所述LCVR是多肽SEQ ID NO: 9,且所述 HCVR 是多肽 SEQ ID NO: 11。
7. 权利要求1或4的抗体，其包含轻链（LC)和重链（HC)，其中所述LC是多肽SEQ ID NO: 12,且所述 HC 是多肽 SEQ ID NO: 13 或 SEQ ID NO: 14。
8. 权利要求7的抗体，其中所述LC是多肽SEQ ID NO: 12,且所述HC是多肽SEQ ID NO: 13〇
9. 权利要求7的抗体，其中所述LC是多肽SEQ ID NO: 12,且所述HC是多肽SEQ ID NO: 14。
10. 权利要求1、4或7中任一项的抗体，其包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是 多肽SEQ ID NO: 12,且每条重链是多肽SEQ ID NO: 13。
11. 权利要求1、4或7中任一项的抗体，其包含两条轻链和两条重链，其中每条轻链是 多肽SEQ ID NO: 12,且每条重链是多肽SEQ ID NO: 14。
12. 药物组合物，其包含权利要求1-11中任一项的抗体或其抗原结合片段，和可接受 的载体、稀释剂或赋形剂。
13. 治疗贫血的方法，其包括向有此需要的患者施用有效量的权利要求1-11中任一项 的抗体或其抗原结合片段。
14. 根据权利要求13的方法，其中所述贫血是慢性疾病的贫血。
15. 根据权利要求14的方法，其中所述慢性疾病的贫血选自癌症的贫血和慢性肾病的 贫血。
16. 增加血清铁水平、网状红细胞计数、红细胞计数、血红蛋白和/或血细胞比容的方 法，其包括施用有效量的权利要求1-11中任一项的抗体或其抗原结合片段。
17. 权利要求1-11中任一项的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗中。
18. 权利要求1-11中任一项的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗贫血。
19. 权利要求18的抗体或其抗原结合片段，其中所述贫血是慢性疾病的贫血。
20. 权利要求19的抗体或其抗原结合片段，其中所述慢性疾病的贫血选自癌症的贫血 和慢性肾病的贫血。
【专利摘要】本发明涉及结合至人BMP-6的抗体或其抗原结合片段、包含此类抗体或其抗原结合片段的组合物，和使用它们治疗慢性疾病的贫血的方法。
【IPC分类】C07K16-22, A61K39-395, A61P7-06
【公开号】CN104870473
【申请号】CN201380066174
【发明人】S.M.E.特鲁拉, 徐能善
【申请人】伊莱利利公司
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2013年12月5日
【公告号】CA2892911A1, US8795665, US8980582, US20140170161, US20140309404, WO2014099391A1