产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及微生物发酵领域，特别是一种产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法。
【背景技术】
[0002]酵母菌为单细胞微生物，属真菌类。酿酒酵母是最常见的一种酵母，具有安全性好，高产量和高的抑制剂耐受性等优点，故一直在生物乙醇工业中有重要作用。繁殖方式为出芽繁殖。繁殖速度较霉菌快，与原生动物不同，有坚韧的细胞壁，菌体比细菌大且形态复杂。其形态因培养基种类及培养时间的长短而异，常见形态为球形或卵形，直径为5-10 μ m,内有细胞核、液泡和颗粒物质。
[0003]因酿酒酵母的发酵繁殖相对成熟，故常被用到基因工程中，基因工程是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质-DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新技术。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种设计更为合理的产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法，可以实现达到最大的生物产量。
[0005]本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案还实现的。本发明是一种产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法，其特点是:其步骤如下:
(1)一级菌种制备:将产干扰素的酿酒酵母菌种进行活化，首先在麦芽汁培养基平板上进行划线培养，培养温度为28°c，培养时间为32h ;挑选单菌落，接种到IL麦芽汁培养基中，4瓶，共计4L，培养温度28°C，培养时间16h ；
(2)种子罐空消:空消时，将罐上的接种口、排气阀及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13?0.15Mpa ;空消过程中，维持蒸汽温度121°C左右，先开排污水阀和进气阀，排空夹套水，在对管路、滤器和种子罐发酵罐灭菌，空消时间为30分钟；
(3)配置70L培养基:培养基组成为磷酸，氯化钙，硫酸钾，氢氧化钾，葡萄糖，硫酸镁，酵母浸膏，配比依次为2L 2: 4: 12.3: 2.8: 27: 10.1: 22.6 ;按上述比例配制培养基10kg，加入空消后的种子罐，再加水至70L左右，利用lmol/L的NaOH调节pH在4.0-4.5范围内；种子罐体积为100L，液体适宜量为70-75L ；
(4)种子罐实消:实消先利用夹套通蒸汽对培养基进行预热，保持夹套压力<0.1Mpa，待培养基温度到达100°C后，关闭夹套蒸汽，改为直接向罐内通入蒸汽；当罐压升至
0.12Mpa，温度升到12f 123°C时，控制蒸汽阀门开度，保持罐压不变，30分钟后停止供汽；打开冷却水的进排阀门，在夹套内通水冷却； (5)种子罐接种培养:按照5%的接种量，将3.5L 一级菌种接种到含有70L液体培养基的种子罐中，调节培养温度在27-29°C，压力0.05 Mpa, pH4.0-4.5之间，培养24h。
[0006]本发明中所用菌株即是将干扰素利用基因工程技术导入到酿酒酵母细胞中，通过细胞的繁殖，从而获得大量含有干扰素的酿酒酵母细胞，进而进行提取、分离获得干扰素。
【具体实施方式】
[0007]实施例1，一种产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法，包括如下步骤:
1、一级菌种制备:将产干扰素的酿酒酵母菌种进行活化，首先在麦芽汁培养基平板上进行划线培养，培养温度为28°C，培养时间为32h ;挑选单菌落，接种到IL麦芽汁培养基中，4瓶，共计4L，培养温度28°C，培养时间16h。
[0008]2、种子罐空消
空消时，将罐上的接种口、排气阀及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13?0.15Mpa。空消过程中，维持蒸汽温度121°C左右，先开排污水阀和进气阀，排空夹套水，在对管路、滤器和种子罐发酵罐灭菌，空消时间为30分钟。
[0009]3、配置70L培养基
培养基组成为磷酸，氯化钙，硫酸钾，氢氧化钾，葡萄糖，硫酸镁，酵母浸膏，配比依次为21.2: 4: 12.3: 2.8: 27: 10.1: 22.6。按上述比例配制培养基10kg，加入空消后的种子罐，再加水至70L左右，利用lmol/L的NaOH调节pH在4.0-4.5范围内。种子罐体积为100L，液体适宜量为70-75L。
[0010]4、种子罐实消
实消先利用夹套通蒸汽对培养基进行预热，保持夹套压力< 0.1 Mpa，待培养基温度到达100°C后，关闭夹套蒸汽，改为直接向罐内通入蒸汽。当罐压升至0.12Mpa，温度升到12fl23°C时，控制蒸汽阀门开度，保持罐压不变，30分钟后停止供汽。打开冷却水的进排阀门，在夹套内通水冷却。
[0011]5、种子罐接种培养
按照5%的接种量，将3.5L 一级菌种接种到含有70L液体培养基的种子罐中，调节培养温度在 270C，压力 0.05 Mpa, PH4.0-4.5，培养 24h。
[0012]实施例2，一种产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法，包括如下步骤:
1、一级菌种制备
将产干扰素的酿酒酵母菌种进行活化，首先在麦芽汁培养基平板上进行划线培养，培养温度为28°C，培养时间为32h ;挑选单菌落，接种到IL麦芽汁培养基中，4瓶，共计4L，培养温度28 °C，培养时间16h。
[0013]2、种子罐空消
空消时，将罐上的接种口、排气阀及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13?0.15Mpa。空消过程中，维持蒸汽温度121°C左右，先开排污水阀和进气阀，排空夹套水，在对管路、滤器和种子罐发酵罐灭菌，空消时间为30分钟。
[0014]3、配置70L培养基
培养基组成为磷酸，氯化钙，硫酸钾，氢氧化钾，葡萄糖，硫酸镁，酵母浸膏，配比依次为21.2: 4: 12.3: 2.8: 27: 10.1: 22.6。按上述比例配制培养基10kg，加入空消后的种子罐，再加水至70L左右，利用lmol/L的NaOH调节pH在4.0-4.5范围内。种子罐体积为100L，液体适宜量为70-75L。
[0015]4、种子罐实消
实消先利用夹套通蒸汽对培养基进行预热，保持夹套压力< 0.1 Mpa，待培养基温度到达100°C后，关闭夹套蒸汽，改为直接向罐内通入蒸汽。当罐压升至0.12Mpa，温度升到12fl23°C时，控制蒸汽阀门开度，保持罐压不变，30分钟后停止供汽。打开冷却水的进排阀门，在夹套内通水冷却。
[0016]5、种子罐接种培养
按照5%的接种量，将3.5L 一级菌种接种到含有70L液体培养基的种子罐中，调节培养温度在28。。，压力0.05 Mpa, PH4.0-4.5之间，培养24h。
[0017]实施例3，一种产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法，包括如下步骤:
1、一级菌种制备
将产干扰素的酿酒酵母菌种进行活化，首先在麦芽汁培养基平板上进行划线培养，培养温度为28°C，培养时间为32h ;挑选单菌落，接种到IL麦芽汁培养基中，4瓶，共计4L，培养温度28 °C，培养时间16h。
[0018]2、种子罐空消
空消时，将罐上的接种口、排气阀及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13?0.15Mpa。空消过程中，维持蒸汽温度121°C左右，先开排污水阀和进气阀，排空夹套水，在对管路、滤器和种子罐发酵罐灭菌，空消时间为30分钟。
[0019]3、配置70L培养基
培养基组成为磷酸，氯化钙，硫酸钾，氢氧化钾，葡萄糖，硫酸镁，酵母浸膏，配比依次为21.2: 4: 12.3: 2.8: 27: 10.1: 22.6。按上述比例配制培养基10kg，加入空消后的种子罐，再加水至70L左右，利用lmol/L的NaOH调节pH在4.0-4.5范围内。种子罐体积为100L，液体适宜量为70-75L。
[0020]4、种子罐实消
实消先利用夹套通蒸汽对培养基进行预热，保持夹套压力< 0.1 Mpa，待培养基温度到达100°C后，关闭夹套蒸汽，改为直接向罐内通入蒸汽。当罐压升至0.12Mpa，温度升到12fl23°C时，控制蒸汽阀门开度，保持罐压不变，30分钟后停止供汽。打开冷却水的进排阀门，在夹套内通水冷却。
[0021]5、种子罐接种培养
按照5%的接种量，将3.5L 一级菌种接种到含有70L液体培养基的种子罐中，调节培养温度在29。。，压力0.05 Mpa, ρΗ4.0-4.5之间，培养24h。
[0022]对实施例1、2、3中种子罐的24h发酵液进行检测吸光度值及干重，结果为:实施例1中24h发酵液吸光度为2.425，干重为35.lg/L ;实施例2中24h发酵液吸光度为2.457，干重为35.9g/L ;实施例3中24h发酵液吸光度为2.429，干重为35.3g/L。
【主权项】
1.一种产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法，其特征在于:其步骤如下: (1)一级菌种制备:将产干扰素的酿酒酵母菌种进行活化，首先在麦芽汁培养基平板上进行划线培养，培养温度为28°c，培养时间为32h ;挑选单菌落，接种到IL麦芽汁培养基中，4瓶，共计4L，培养温度28°C，培养时间16h ； (2)种子罐空消:空消时，将罐上的接种口、排气阀及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13?0.15Mpa ;空消过程中，维持蒸汽温度121°C左右，先开排污水阀和进气阀，排空夹套水，在对管路、滤器和种子罐发酵罐灭菌，空消时间为30分钟； (3)配置70L培养基:培养基组成为磷酸，氯化钙，硫酸钾，氢氧化钾，葡萄糖，硫酸镁，酵母浸膏，配比依次为21.2: 4: 12.3: 2.8: 27: 10.1: 22.6 ;按上述比例配制培养基1kg,加入空消后的种子罐，再加水至70L左右，利用lmol/L的NaOH调节pH在4.0-4.5范围内；种子罐体积为100L，液体适宜量为70-75L ； (4)种子罐实消:实消先利用夹套通蒸汽对培养基进行预热，保持夹套压力<0.1Mpa，待培养基温度到达100°C后，关闭夹套蒸汽，改为直接向罐内通入蒸汽；当罐压升至.0.12Mpa，温度升到12f 123°C时，控制蒸汽阀门开度，保持罐压不变，30分钟后停止供汽；打开冷却水的进排阀门，在夹套内通水冷却； (5)种子罐接种培养:按照5%的接种量，将3.5L 一级菌种接种到含有70L液体培养基的种子罐中，调节培养温度在27-291:，压力0.05 Mpa, ρΗ4.0-4.5之间，培养24h。
【专利摘要】本发明是一种产干扰素酿酒酵母菌株在种子罐水平的发酵方法，其步骤如下：将产干扰素的酿酒酵母菌种进行活化，制得一级菌种制备；将罐上的接种口、排气阀及料路阀门微微打开，使蒸汽通过这些阀门排出，同时保持罐压为0.13～0.15Mpa；进行空消；配置70L培养基：培养基组成为磷酸，氯化钙，硫酸钾，氢氧化钾，葡萄糖，硫酸镁，酵母浸膏；再进行种子罐实消；最后种子罐接种培养：按照5%的接种量，将3.5L一级菌种接种到含有70L液体培养基的种子罐中，调节培养温度在27-29℃，压力0.05Mpa，pH4.0-4.5之间，培养24h。本发明方法设计更为合理，可以实现达到最大的生物产量。
【IPC分类】C12R1-865, C12N1-19
【公开号】CN104877924
【申请号】CN201410070586
【发明人】萧国顺
【申请人】雨润慕德生物科技（连云港）有限公司
【公开日】2015年9月2日
【申请日】2014年2月28日