长，表示无生长
[0050] 根据《酵母菌的特征与鉴定手册》（己尼特JA.酵母菌的特征与鉴定手册[M].胡 瑞卿，译.青岛：青岛海洋大学出版社，1991 :7-197.)，比对碳源与氮源的利用情况，BD1002 菌株属于马克思克鲁维酵母。
[0051] 4、代谢特征
[0052] 挑取PDA平板培养的的马克斯克鲁维酵母抓1002菌株2-3环接入30ml酵母培养 基中，置于30°C下，ISOr/min振荡培养18h。无菌条件下1200化pm离屯、lOmin收集菌体。 用生理盐水0. 9% (w/v)化C1洗涂2次，重悬于1ml碳源同化基础培养基或者氮源同化基础 培养基。 阳05引取ISOmmX16mm的试管，每试管中加糖发酵肉汤基础培养基，高压灭菌，分别加入 0. 22ym的膜过滤的糖，使其终浓度为50mM。往上述试管中接种10yL的抓1002,25°C培养 2地，4化观察菌株的生长状况。结果见表3。
[0054] 表3菌株糖发酵鉴定结果阳化引
[0057] " + "表示利用糖产酸，表示不产酸。
[005引实施例3本发明菌株的18S系统发育学特征
[0059] 酵母中的核糖体小亚基18SrRNA全长约为ISOOnt，由基因畑N18编码，位于5' 端外转录间隔区ETS与内转录间隔区ITS1之间（按5' - 3'方向）。在长期的进化过程 中，分子功能几乎保持恒定，而且含有保守序列、中等变异序列W及高变异速率区段，因此 可用来区分亲缘关系不同的类群。
[0060] 利用生理学特征指标和18SrRNA基因两种分类依据相互佐证，建立起的分类体系 可信度较高。
[0061] 挑取PDA平板培养的马克斯克鲁维酵母抓1002菌株2-3环接入30ml酵母培养基 中，ISOr/min振荡培养1化后取菌液5ml，1200化pm离屯、lOmin，弃除上清液，收集的菌体按 酵母菌基因组提取试剂盒说明书上的方法提取基因组DNA，于-20°C保存，W防降解。 阳06引将上述制备的基因组DNA作为PCR扩增的模板，采用25微升反应体系，对18S rRNA区段进行扩增。反应体系：KODpluslOX缓冲液（不含氯化儀）2.5^^1拆〇4 1. 5yL，KODplus0. 5yL，2mMdNTP2. 5yL、（1地2〇 16yL、10yM引物ITSl1yL、10yM 引物口S4lyL模板DNAlyL。反应条件 94°C2min，30 个循环（94°C30s，53°C30s， 68°C30s)，68°ClOmin。所述的引物对序列为；[TSl:5，tccgtaggtgaacctgcgg3，，]；TS4 : 5>tcctccgcttattgatatgc3>。
[0063] 将PCR产物送测序，测序的结果如SEQIDNo. 1所示。测序结果与GenBank数据 库中的序列进行BLAST比对，发现马克斯克鲁维酵母PMM08-3491-AL与本发明抓1002菌株 序列最接近，两者序列相似性为99%。
[0064] 本发明的马克思克鲁维酵母抓1002,已于2014年11月26日保藏在中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（CGMCC)，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3 号，邮编：100101，保藏编号为：CGMCC No. 10060,培养物名称是抓1002,分类命名是马克思 克鲁维酉奉母Kluyveromyces marxianus。 W65] 实施例4本发明抓1002菌株水解乳糖的特性
[0066] 在PDA培养基里加入5mM的IPTG，倒平板，然后接种菌株。能产乳糖酶的菌落呈绿 色。
[0067] 同时接入5株菌：1、2、6、7与抓1002菌株（3个平行），其中1与2为马克思克鲁 维酵母抓1588,6与7为酿酒酵母抓0390。结果如图1所示。由结果可知，抓1002菌株产 乳糖酶，能够水解IPTG显绿色。菌株1、2、6、7不产乳糖酶，无法水解IPTG显绿色。 W側实施例5本发明菌株在制备红茶菌蛋白饮料中的应用W例 1、菌粉制作
[0070] 挑取如实施例1所述在PDA培养基上培养24-4化后的马克斯克鲁维酵母抓1002 菌株2-3环接入酵母培养基中，置于30°C下，180r/min振荡培养1化后按1% (v/v)的接种 量转接入400ml酵母培养基中，180r/min振荡培养48h。挑取活化后的嗜酸乳杆菌NCFM和 干酪乳杆菌LC2W2-3环分别接入MRS培养基，37°C下厌氧静置培养1化后按1% (v/v)的 接种量转接入400mlMRS培养基中，37 °C下，厌氧静置培养48h。
[0071] 将培养得到的发酵液无菌条件下1200化pm离屯、lOmin收集菌体。用生理盐水 0. 9% (w/v)化C1洗涂2次，重悬于10% (w/v)20ml115°C杀菌15min脱脂乳中，-80°C冰箱 预冻，冷冻干燥后获得菌粉。
[0072] 2、红茶菌的发酵
[0073] 红茶菌蛋白发酵基料：果葡糖浆lOg、红茶粉0.2g、脱脂牛乳2g，并补足水至 100血，115°C，杀菌 15min。
[0074] 用生理盐水0.9% (w/v)化Cl重溶菌粉，测定各自的吸光度值0〇58。（生理盐水为参 比）。根据S种菌的浓度a〇8c化/mL)与ODss。的线性关系及S种菌的实际ODss。，计算接种 量。 阳0巧]500血瓶中装入200血红茶菌蛋白发酵基料，根据马克斯克鲁维酵母抓1002菌 株：嗜酸乳杆菌NCFW:干酪乳杆菌LC2W=1 : 1 : 1(活菌数）接入，S种菌的浓度均为 108c化/mU置于30°C静止培养20h。发酵液经过85°C，Imin杀菌即得到红茶菌蛋白饮料。 阳076] 该饮料抑值为4. 3,具有酸甜相宜、清香爽口的风味。
[0077]效果实施例1
[007引对实施例5的红茶菌蛋白饮料进行品尝，采用不记名打分制，分别从产品的稳定 性、风味、总体口感、总体口感、回味来评价产品并打分，每项满分10分，分数高则效果好， 并对是否喜欢产品程度进行总体评价。评分标准见表4,实验结果记录见表5所示。
[0079] 表4评分标准
[0080]
阳〇8引效果实施例2
[0084] 将实施例5中的脱脂牛乳，选择不同批次生产的3批脱脂牛乳，其他同实施例5。 阳0化]批次1饮料抑值为4. 3,具有酸甜相宜、清香爽口的风味。 阳086] 批次2饮料抑值为4. 31，具有酸甜相宜、清香爽口的风味。
[0087] 批次3饮料抑值为4. 29,具有酸甜相宜、清香爽口的风味。
[0088] 批次1-3生产得到的红茶菌蛋白饮料的感官评定结果如表6所示。
[0089] 表6用不同批次脱脂牛乳生产的红茶菌蛋白饮料感官评定结果
[0090]
[0091] 根据表6所示的结果，用不同批次的脱脂牛乳所制得的红茶菌蛋白饮料在稳定 性、风味、口感和回味几个指标上都变化不大，非常稳定。 阳〇9引效果实施例3
[0093] 选择不同批次活化的3批发酵菌种：马克思克鲁维抓1002菌株、嗜酸乳杆菌NCFM 菌株和干酪乳杆菌LC2W菌株，其他同实施例5。
[0094] 批次1饮料抑值为4. 3,具有酸甜相宜、清香爽口的风味。 阳0巧]批次2饮料抑值为4. 32,具有酸甜相宜、清香爽口的风味。
[0096] 批次3饮料抑值为4. 31，具有酸甜相宜、清香爽口的风味。
[0097] 批次1-3生产得到的红茶菌蛋白饮料的感官评定结果如表7所示。
[0098] 表7用不同批次发酵菌种生产的红茶菌蛋白饮料感官评定结果
[0099]
[0100] 根据表7所示的结果，用不同批次的发酵菌种马克思克鲁维BD1002菌株、嗜酸乳 杆菌NCFM菌株和干酪乳杆菌LC2W菌株所制得的红茶菌蛋白饮料在稳定性、风味、口感和回 味几个指标上都变化不大，非常稳定。 阳101] 应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可W对本发明的相关 条件作各种改动或修改，运些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
【主权项】
1. 一种马克思克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus)，其特征在于，其保藏编号为 CGMCC No. 10060。2. -种培养如权利要求1所述马克思克鲁维酵母的方法，其特征在于，其包括下述步 骤：将马克思克鲁维酵母CGMCC No. 10060接种于培养基中培养。3. 如权利要求2所述方法，其特征在于，所述培养的温度为30°C。4. 如权利要求2所述方法，其特征在于，所述培养为振荡培养。5. 如权利要求4所述方法，其特征在于，所述振荡培养的转速为180转/分钟。6. 如权利要求2所述方法，其特征在于，所述培养的时间为18-48小时。7. 如权利要求2所述方法，其特征在于，所述培养基为酵母培养基。8. 马克思克鲁维酵母CGMCC No. 10060在制备乳糖酶中的应用。9. 马克思克鲁维酵母CGMCC No. 10060在食品中的应用。10. 如权利要求9所述应用，其特征在于，所述食品为红茶菌蛋白饮料。
【专利摘要】本发明公开了一种马克思克鲁维酵母(Kluyveromyces？marxianus)及其培养方法和应用。所述马克思克鲁维酵母保藏编号为CGMCC？No.10060。使用本发明马克思克鲁维酵母制备的红茶菌蛋白饮料避免了杂菌污染，保证了不同批次产品的稳定性，有利于工业化生产，不仅具有酸甜相宜、清香爽口的风味，而且含有多种功效成分。CGMCC No. 1006020141126
【IPC分类】C12N1/16, C12N9/24, A23L2/52, C12R1/645, A23L2/38
【公开号】CN105002102
【申请号】CN201510527940
【发明人】高彩霞, 吴正钧, 刘振民, 韩瑨, 鄢明辉
【申请人】光明乳业股份有限公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年8月25日