余的溶液，保证其在静置下 没有溶液流出，然后再烘箱中于60°C下干燥2~3小时，再在pH = 9~10的碳酸钠溶液中 浸泡20~30分钟，壳聚糖去质子化后形成不溶性的薄膜覆盖在骨架表面，材料用清水洗涤 后再浸泡于10~12wt. %的乙二醇二缩水甘油醚的乙醇溶液中常温下反应1~2小时，然 后用95%乙醇洗涤1~2次，再浸泡于12~15wt. %的二乙胺的乙醇溶液中，在常温下反 应2~3小时，悬挂的环氧基团转化成叔胺基团，再用95%乙醇洗涤1~2次，然后将样品 浸泡于10~12wt. %的硫酸二乙酯乙醇溶液中3~4小时，在常温下发生季铵化反应，最后 用8~IOwt. %的氯化钠水溶液洗涤2~3次，用离心方法甩掉材料内部多余的液体。
[0018] 肝素的提取按以下操作步骤进行：
[0019] a.提取，将新鲜的猪小肠黏膜移入不锈钢提取锅中，按肠粘膜量加入4~5 %的粗 盐，加热搅拌，用30~40%氢氧化钠溶液调pH至9. 0,待锅内温度升到50°C时停止加热，搅 拌下保温（55°C )2h，然后升温到85°C左右，这时停止搅拌，在90°C下保温15min，趁热除去 大的杂物，最后用100目尼龙布过滤提取液，滤液供吸附使用；
[0020] b.吸附与清洗，待液体温度冷却至40°C以下时，将滤液通过由阳离子化骨架聚合 物制成的整体柱（IOcmX 100cm，由5块圆柱状样品叠加而成），滤液的体积与柱子的体积与 之比应为1 : 2~1 : 2. 5,流速控制在50~80mL/min，然后用柱子体积2倍量的去离子 水洗涤柱子，再用柱子体积1倍量的7%精盐水洗涤；
[0021] c.洗脱，先用柱子体积1倍量的25wt. %的精盐水洗脱柱子，再用柱子体积1倍量 的18wt. %精盐水洗脱柱子，收集肝素洗脱液；
[0022] d.乙醇沉淀，将洗脱液倾入搪瓷缸中，然后加入95%乙醇，使洗脱液中乙醇的质 量分数达到35~40%，搅匀过夜，然后虹吸出上层乙醇清液，回收后再用；
[0023] e.脱水与干燥，把下层沉淀滤干或用白布吊干，将吊干的粗品放在真空烘箱中常 温干燥24小时；
[0024] f.脱色精制，用2wt. %氯化钠水溶液将粗品配成IOwt. %肝素钠溶液，用盐酸将 pH调至1~2,然后迅速过滤，再用氢氧化钠溶液调pH为10~12,按3%的量加入30%的 过氧化氢，25下放置2天，并随时矫正pH为10~12,过滤后收集滤液，再用盐酸条绿叶pH 为6~7,加入等量的95%乙醇沉淀，次日滤去清液，沉淀用丙酮脱水，干燥后得白色的肝素 钠精品，效价大于145U/mg。
[0025] 肝素钠效价测定：肝素钠效价测定采用羊血浆法，即将肝素钠标准品和供试品加 入柠檬酸羊血浆中，钙化一定时间后观察两者的凝固程度，如标准品和供试品配成相同的 浓度又得到相同的凝固程度，则说明两者效价相同，以此来对比测定未知样品的效价，具体 操作如下：取管径均匀、洁净干燥的小试管9支，分别加入血浆0. 5m L，置（37±5) °C恒温水 浴中预热5~10分钟后，依次每管加入一种浓度（质量百分浓度）的标准品或供试品稀释 液（1%、0.5%、0.2%)及氯化钙溶液（每种浓度3管，各浓度的试管支数相等），加入氯化 钙溶液后，立即混匀，并开始计算时间，注意观察并计算各管凝结时间.将各管凝结时间换 成对数参照生物检定统计法（中国药典附录XIV)中的量反应平行线测定法计算效价及实 验误差。
[0026] 材料吸附能力评估：阴离子骨架材料的干态密度一般为0. 04~0. 05g/mL，整体 柱的体积为7. 85L，其质量为314~393g，平均值为353g，整体柱经过充分吸附后，经过洗 脱、提纯后每次获得的肝素钠精品量为43~52g，因此每克材料能吸附肝素的量在122~ 147mg范围，而一般的离子交换树脂的吸附能力只有16~25mg/g，所以，本发明提供的材料 在吸附能力上有明显优势，这主要归功于其大孔径和高孔隙率（低密度）的特点。
【主权项】
1. 一种阳离子骨架聚合物，其特征在于骨架之间通过共同点联接，构成三维连续网络 结构，骨架的尺寸最小处为5 Ii m左右，骨架之间包含约100 Ii m的互相连通的孔道。2. 根据权利要求1所述的阳离子骨架聚合物，其特征在于所述的聚合物表面含有悬挂 的季铵阳离子。3. 根据权利要求1或2所述的三维骨架聚合物，其特征在于所述的三维骨架聚合物能 以整体性柱子的方式通过离子交换原理吸附带负电荷的肝素大分子，使其吸附能力与速率 明显提商。4. 一种权利要求1所述的阳离子三维骨架聚合物的制备方法，其特征在于步骤依次 为： (1) 将密胺海绵浸泡在壳聚糖溶液中，取出后用真空吸掉多余的溶液，保证其在静置下 没有溶液流出，然后再烘箱中于60°C下干燥2~3小时，再在pH = 9~10的碳酸钠溶液中 浸泡20~30分钟，壳聚糖去质子化后形成不溶性的薄膜覆盖在骨架表面； (2) 上述材料用清水洗涤后再浸泡于10~12wt. %的二甘醇二缩水甘油醚的乙醇溶液 中常温下反应1~2小时，然后用95%乙醇洗涤1~2次； ⑶再浸泡于12~15wt. %的二乙胺的乙醇溶液中，在常温下反应2~3小时，悬挂的 环氧基团转化成叔胺基团，再用95%乙醇洗涤1~2次； (4)再将样品浸泡于1〇~12wt. %的硫酸二乙酯乙醇溶液中3~4小时，在常温下发 生季铵化反应，最后用8~IOwt. %的氯化钠水溶液洗涤2~3次，用离心方法甩掉材料内 部多余的液体。5. 根据权利要求4所述的聚阳离子的合成方法，其特征在于壳聚糖溶液的浓度与其本 身的粘度有关：粘度大于400mPa的配成1~2wt. %的浓度，粘度在200~400mPa范围的 配成2~3wt. %的浓度。
【专利摘要】本发明是关于一种阳离子骨架聚合物和其制备方法及在肝素提取中的应用。利用现有的密胺海绵特有的三维骨架结构，将壳聚糖涂层包覆在骨架上，再通过二甘醇二缩水甘油醚与壳聚糖涂层反应，使其交联并在表面携带大量的环氧基团，然后利用环氧基团与二乙胺反应生成叔胺基团，再用硫酸二乙酯进行季铵化反应，使骨架表面因带有悬挂的阳离子而强亲水化，并通过与肝素大分子上硫酸负离子的静电相互作用，实现高效吸附，在从猪小肠黏膜中提取肝素的过程中发挥关键作用。使用这种材料的优点是：吸附能力强，操作简化，材料能多次循环使用，降低成本，提高生产效率。
【IPC分类】C08J9/36, C08J9/42, B01J20/26, B01J20/30
【公开号】CN105017557
【申请号】CN201410166794
【发明人】尚传洋, 张瑞丰, 李伟逊, 梁云霄, 江峰, 肖通虎, 龙能兵
【申请人】宁波大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月17日