br>[0076] 采用上述方法即制得本发明所述的一种小分子牛骨胶原肽，小分子牛骨胶原肽的 平均分子量为200道尔顿-1000道尔顿。
[0077] 实施例5
[0078] 本实施例的一种小分子牛骨胶原肽的制备方法，具体包括以下步骤：
[0079] 1)粉碎：将新鲜的牛骨头先人工除去骨头上的杂质后，再利用碎骨机粉碎至 2. 5cm的骨块。
[0080] 2)提取分离：所述提取分离过程为：将经过粉碎后的牛骨清洗干净后，放入蒸煮 罐中进行蒸煮，牛骨与水的体积比为1:3. 5,蒸煮压力为2MPa，蒸煮温度为120°C，蒸煮时间 为4h。提取分离后得到牛骨胶原蛋白提取液，采用波美计或凯氏定氮法对牛骨胶原蛋白提 取液中的牛骨胶原蛋白含量进行检测。
[0081] 3)酶解：在牛骨胶原蛋白提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温 度为50°C，一次酶解时间为lh，骨胶原蛋白酶的加入量为牛骨胶原蛋白质量的0. 1% ;
[0082] 骨胶原蛋白酶解后，用混合酸调节一次酶解液的pH值至6,然后加入脯氨酸蛋 白酶进行二次酶解，二次酶解时间为2 h，脯氨酸蛋白酶的加入量为牛骨胶原蛋白质量的 0. 1% ；
[0083] 将经过二次酶解的牛骨胶原蛋白酶解液加热至90°C，并保持5min，进行灭酶处 理。
[0084] 本实施例根据牛骨胶原蛋白的特殊性，首次采用脯氨酸蛋白酶和骨胶原蛋白酶进 行复合酶解，使得到的产品实用性强，小分子活性肽的得率很高，得率高达90%。
[0085] 4)复合过滤：复合过滤包括活性碳过滤和膜过滤，所述活性碳过滤为将灭酶处理 后的牛骨胶原蛋白酶解液中加入活性碳，活性碳的加入量为牛骨胶原蛋白质量的2%，将牛 骨胶原蛋白酶解液升温至80°C，并保温5min ;然后降温至70°C，静置I. 5h ;
[0086] 膜过滤为将经过活性碳过滤后的牛骨胶原肽溶液依次经过桶式过滤器、棉饼过滤 器和孔径为〇. 1 μ m的多层膜过滤器进行过滤，膜过滤压力为0.1 MPa。
[0087] 本实施例利用活性碳的吸附作用以及膜设备过滤作用，能有效去除有害重金属， 使最终得到的小分子骨胶原肽产品安全无毒。
[0088] 5)浓缩：将经过过滤的牛骨胶原肽溶液进入蒸发器中浓缩至固形物含量为30%， 浓缩温度控制在55°C，浓缩压力为-0· 6MPa。
[0089] 6)干燥：将经过浓缩的牛骨胶原蛋白浓缩液经干燥塔干燥，干燥过程中的进口温 度为190 °C，出口温度为95 °C。
[0090] 采用上述方法即制得本发明所述的一种小分子牛骨胶原肽，小分子牛骨胶原肽的 平均分子量为200道尔顿-1000道尔顿。
[0091] 采用GB/T 22729-2008对本实施例3方法制得的小分子牛骨胶原肽的分子量分布 进行检测，检测结果如表1所示。
[0092] 表1小分子牛骨胶原肽的分子量分布表
[0094] 由表1可知，采用实施例3所述方法制得的小分子牛骨胶原肽的平均分子量主要 分布在180道尔顿-1000道尔顿之间，该分子量区间的小分子牛骨胶原肽粉水溶性好，更有 利于牛骨胶原肽活性成分的吸收和利用。
[0095] 采用GB 5009. 5-2010对本实施例3方法制得的一种小分子牛骨胶原肽的肽含量、 酸溶蛋白含量、总氮含量和干燥失重进行检测，检测结果如表2所示。
[0096] 表2小分子牛骨胶原肽粉的肽含量、酸溶蛋白含量、总氮含量和干燥失重检测结 果
[0097]
[0098] 由表2可知，采用实施例3所述方法制取小分子牛骨胶原肽的得率为90%以上，其 中酸溶蛋白含量占大多数，有利于人体胃的消化吸收，具有抗肿瘤、提高机体免疫能力、抗 氧化等多种生理功能。
[0099] 以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和 原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种小分子牛骨胶原肽的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：粉碎、提取分 离、酶解、复合过滤、浓缩和干燥； 所述酶解过程是：向提取分离后获得的牛骨胶原蛋白提取液中加入骨胶原蛋白酶进行 一次酶解，一次酶解温度为50°C -55°C，一次酶解时间为lh-2h，骨胶原蛋白酶的加入量为 牛骨胶原蛋白质量的0. 1% -0. 3%，一次酶解结束后进行灭酶处理； 一次酶解后，用混合酸调节一次酶解液的PH值至6-7,然后加入脯氨酸蛋白酶进 行二次酶解，二次酶解时间为2h-4h，脯氨酸蛋白酶的加入量为牛骨胶原蛋白质量的 0. 1% -0. 3%，二次酶解结束后进行灭酶处理。2. 根据权利要求1所述一种小分子牛骨胶原肽的制备方法，其特征在于，所述复合过 滤包括活性碳过滤和膜过滤步骤，所述活性碳过滤步骤是向灭酶处理后的牛骨胶原蛋白酶 解液中加入活性碳，活性碳的加入量为牛骨胶原蛋白质量的2% -4%，将牛骨胶原蛋白酶 解液升温至80°(：-80100°(：，并保温5111111-10111111;然后降温至70°(：-80°(：，静置30111111-211 ; 所述膜过滤步骤是将经过活性碳过滤后的牛骨胶原肽溶液依次经过桶式过滤器、棉饼 过滤器和孔径为0.1 ym的多层膜过滤器进行过滤，膜过滤压力为0.1 MPa-O. 3MPa。3. 根据权利要求1所述一种小分子牛骨胶原肽的制备方法，其特征在于，所述浓缩过 程为：将经过过滤的牛骨胶原肽溶液在蒸发器中浓缩至固形物含量为25% -35%，浓缩温 度控制在55°C -65°C，浓缩压力为-0? 4MPa至-0? 6MPa。4. 根据权利要求1所述一种小分子牛骨胶原肽的制备方法，其特征在于，所述干燥过 程为：将经过浓缩的牛骨胶原肽浓缩液经干燥塔进行喷雾干燥，干燥过程中的进口温度为 180°C _190°C，出口温度为 85°C -95°C。5. 根据权利要求1所述一种小分子牛骨胶原肽的制备方法，其特征在于，所述提取分 离过程为：将经过粉碎后的牛骨清洗干净后，放入蒸煮罐中进行蒸煮，牛骨与水的体积比为 1:3-5,蒸煮压力为0? 15MPa-2MPa，蒸煮温度为100°C _120°C，蒸煮时间为2h-4h。6. 根据权利要求1所述一种小分子牛骨胶原肽的制备方法，其特征在于，所述粉碎过 程为：将新鲜的动物骨头先人工除去骨头上的杂质后，再利用碎骨机粉碎至2cm-3cm的骨 块。7. 根据权利要求1所述一种小分子牛骨胶原肽的制备方法，其特征在于，所述灭酶处 理过程为：将经过一次酶解或二次酶解获得的牛骨胶原蛋白酶解液加热至90°C _100°C，并 保持5min-10min，进行灭酶处理。8. -种小分子牛骨胶原肽，其特征在于，采用如权利要求1-6任一项所述方法即制 得本发明所述的一种小分子牛骨胶原肽，小分子牛骨胶原肽的平均分子量为200道尔 顿-1000道尔顿。
【专利摘要】本发明涉及一种小分子牛骨胶原肽及其制备方法，所述制备方法依次包括以下步骤：粉碎、提取分离、酶解、复合过滤、浓缩和干燥；所述酶解过程为：在牛骨胶原蛋白提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解；一次酶解后，用混合酸调节一次酶解液的pH值至6-7，然后加入脯氨酸蛋白酶进行二次酶解，二次酶解时间为2h-4h，脯氨酸蛋白酶的加入量为牛骨胶原蛋白质量的0.1％-0.3％。本发明根据牛骨胶原蛋白的特殊性，首次采用脯氨酸蛋白酶和骨胶原蛋白酶进行复合酶解，使得到的产品实用性强，小分子活性肽的得率很高，得率高达90％。
【IPC分类】C07K1/34, C12P21/06
【公开号】CN105018554
【申请号】CN201510459962
【发明人】李俊伟
【申请人】北京天肽生物科技有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月30日