谷胱甘肽废液在微生物生产中的应用及应用方法_4

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出;外观、气味具有酸香 味的深棕色液体。
[0150] 制备实施例六:
[0151]【原料】
[0152] 同制备实施例五。
[0153]【菌种来源】
[0154] 苏云金芽孢杆菌(提供形式:安瓿管冻干粉)购买至中国工业微生物菌种保藏管 理中心,编号CICC21298。
[0155]【发酵液制备】
[0156] 1)苏云金芽孢杆菌菌种活化
[0157] 斜面培养基制备:酵母提取物0?5g,甘露醇20. 0g,KH2P040. 2g,K2HP040. 8g, MgS04 ? 7H20 0? 2g,CaS04 ? 2H200.lg,FeC13 微量,Na2Mo04 ? 2H20 微量,琼脂 15.Og,蒸馏 水I.OL,pH7. 2,121°C,0. 103MPa,灭菌30min,无菌条件下制备斜面试管。
[0158] 活化方法:无菌条件下,将冷冻保藏管中的苏云金芽孢杆菌菌种接种到斜面中, 36°C条件下活化32h,得到斜面菌种或菌种斜面。
[0159] 2)苏云金芽孢杆菌三角瓶种子液制备
[0160] 三角瓶液体培养基制备:酵母提取物0. 5g,甘露醇20. 0g,KH2P040. 2g, K2HP040. 8g,MgS04 ? 7H20 0? 2g,CaS04 ? 2H200.lg,FeC13 微量,Na2Mo04 ? 2H20 微量,蒸馏 水I. 0L,pH7. 2,121。(:,0? 103MPa,灭菌 30min。
[0161] 三角瓶种子液制备方法:无菌条件下,取I~2环经步骤I)活化的地衣芽胞杆菌 斜面菌种,接入装量为IOOmL液体培养基的500mL三角瓶中,置于170r/min中摇床中,控制 pH7. 2, 36°C恒温培养32h,得到苏云金芽孢杆菌三角瓶种子液。
[0162] 3)苏云金芽孢杆菌种子罐培养
[0163]种子罐液体培养基制备:谷胱甘肽废液用纯水稀释10倍,pH控制在7. 2,121°C, 0. 103MPa,灭菌lh,降温至30°C,备用。
[0164] 种子罐培养过程:种子罐的体积为250L,种子罐的装料量控制在种子罐公称容积 的60%,即种子罐的装料量为150L,在无菌条件下,取经步骤2)制备的苏云金芽孢杆菌三 角瓶种子液(30个三角瓶的种子液共3L)接入种子罐中,即接入的种子液体积为种子罐装 料量体积的2%,发酵温度控制在36°C,发酵过程中pH控制在7. 2,搅拌转速控制在150r/ min,通气量控制在I. 5Wm,培养24h,得到苏云金芽孢杆菌种子罐培养液,培养结束时,测 得芽孢形成率为80 %,活菌数为9. 42X10sCFU/mL,杂菌污染率为0. 43 %。
[0165] 4)发酵罐发酵
[0166]发酵罐液体培养基制备:谷胱甘肽废液用纯水稀释10倍,pH7. 2,121°C, 0? 103MPa,灭菌0? 5h,降温至36°C,备用。
[0167] 发酵罐培养方法:发酵罐的体积为3m3,发酵罐实际装料量为I.8m3,在无菌条件 下,取经步骤3)制备的苏云金芽孢杆菌种子罐培养液全部接入发酵罐中,经计算,即接入 的种子液体积为发酵罐装料量体积的8. 5%,发酵温度控制在36°C,发酵过程中pH控制在 7. 2,搅拌转速控制在150r/min,通气量控制在I. 5Wm,保持发酵32h,得到发酵液。
[0168] 发酵液指标:pH7. 18 ;苏云金芽孢杆菌含菌量11. 27X10sCFU/mL;芽孢含量 76. 3%,重金属3mg/Kg;霉菌数6CFU/mL;大肠杆菌5CFU/100mL;沙门氏菌无检出。
[0169] 制备实施例七:
[0170]【原料】
[0171] 同制备实施例五。
[0172]【菌种来源】
[0173] 解淀粉芽孢杆菌(提供形式:安瓿管冻干粉)购买至中国农业微生物菌种保藏管 理中心,编号ACCC19745。
[0174]【发酵液制备】
[0175] 1)解淀粉芽孢杆菌菌种活化
[0176] 斜面培养基制备:蛋白胨5. 0g,牛肉浸取物3. 0g,NaC15. 0g,琼脂15. 0g,蒸馏水 1. 0L,pH7. 0,121°C,0? 103MPa,灭菌30min,无菌条件下制备斜面试管。
[0177] 活化方法:无菌条件下,将冷冻保藏管中的解淀粉芽孢杆菌菌种接种到斜面中, 36°C条件下活化32h,得到斜面菌种或菌种斜面。
[0178] 2)解淀粉芽孢杆菌三角瓶种子液制备
[0179] 三角瓶液体培养基制备:蛋白胨5. 0g,牛肉浸取物3. 0g,NaC15. 0g,琼脂15. 0g,蒸 馏水I. 0L,pH7. 0,121。(:,0? 103MPa,灭菌 30min。
[0180] 三角瓶种子液制备方法:无菌条件下,取1~2环经步骤1)活化的地衣芽胞杆菌 斜面菌种,接入装量为60mL液体培养基的250mL三角瓶中,置于155r/min中摇床中,控制 pH7. 0, 36°C恒温培养32h,得到解淀粉芽孢杆菌三角瓶种子液。
[0181] 3)解淀粉芽孢杆菌种子罐培养
[0182]种子罐液体培养基制备:谷胱甘肽废液用纯水稀释10倍,pH控制在7. 0,121°C, 0. 103MPa,灭菌lh,降温至36°C,备用。
[0183] 种子罐培养过程:种子罐的体积为300L,种子罐的装料量控制在种子罐公称容积 的60%,即种子罐的装料量为180L,在无菌条件下,取经步骤2)制备的解淀粉芽孢杆菌三 角瓶种子液(30个三角瓶的种子液共I. 8L接入种子罐中,即接种量体积为种子罐装料量体 积的1 %,发酵温度控制在36°C,发酵过程中pH控制在7. 0,搅拌转速控制在155r/min,通 气量控制在I. 5Wm,培养32h,得到解淀粉芽孢杆菌种子罐培养液,培养结束时,测得芽孢 形成率为80 %,活菌数为8.36X10sCFU/mL,杂菌污染率为0. 54 %。
[0184] 4)发酵罐发酵
[0185]发酵罐液体培养基制备:谷胱甘肽废液用纯水稀释10倍,pH7. 0,121°C, 0? 103MPa,灭菌0? 5h,降温至36°C,备用。
[0186] 发酵罐培养方法:发酵罐的体积为5m3,发酵罐实际装料量为3m3,在无菌条件下, 取经步骤3)制备的解淀粉芽孢杆菌种子罐培养液全部接入发酵罐中,经计算,接种量为发 酵罐装料量体积的6%,发酵温度控制在36°C,发酵过程中pH控制在7. 0,搅拌转速控制在 155r/min,通气量控制在I. 5Wm,保持发酵32h,得到发酵液。
[0187] 发酵液指标:pH7. 04 ;解淀粉芽孢杆菌含菌量10. 02X10sCFU/mL;芽孢含量 81. 2%,重金属4. 3mg/Kg;霉菌数9CFU/mL;大肠杆菌8CFU/100mL;沙门氏菌无检出。
[0188] 制备实施例八(复合型液体微生物菌肥的制备)
[0189]1)发酵液的混合
[0190] 将实施例一、实施例七步骤4)制备的地衣芽孢杆菌发酵液、解淀粉芽孢杆菌发酵 液进行1:1等体积混合;
[0191] 2)复合型微生物菌肥的制备
[0192] 将1)混合后的发酵液打入储存罐,加入纯水,稀释10倍,经过滤后,最后通过全自 动灌装生产线(洗灌装机120桶/min,5L/桶,10桶/箱),历时1小时45分钟,获得液体 型桶装功能微生物产品1250箱,产品活菌数浓度为2. 3X10sCFU/mL,保质期为1年,6个月 时检验菌种存活率为85. 79%,1年时检验菌种存活率81. 34%。
[0193]制备实施例九(复合型液体微生物饲料添加剂的制备):
[0194] 1)发酵罐发酵
[0195]发酵罐液体培养基制备:谷胱甘肽废液用纯水稀释10倍,pH6. 2,121°C, 0. 103MPa,灭菌lh,降温至30°C,备用。
[0196] 发酵罐培养方法:发酵罐的体积为15m3,装料量为9000L,即装料量的体积占发酵 罐体积的60%,在无菌条件下,取制备实施例二、三、四步骤3)制备的嗜酸乳杆菌种子罐 培养液150L、产肮假丝酵母菌种子罐培养液150L、枯草芽孢杆菌种子罐培养液150L、共计 450L接入发酵罐中,即三个种子罐培养液的总体积占发酵罐装料量体积的5%,发酵温度 控制在30°C,pH控制在6. 2。在发酵开始时,同时关闭搅拌和所有阀门,24h后打开放气阀, 调节放气阀的开关幅度控制发酵罐罐压〇. 〇25MPa,以后每4小时同时开启搅拌和通气,搅 拌和通气时间为30min,放气阀一直为打开状态,通过调节放气阀的开关幅度,将发酵罐罐 压保持在〇. 〇25MPa,通气量控制在I. 5VVm,搅拌转速控制在200r/min,保持发酵36h,得到 发酵液。发酵液指标:pH5. 72 ;嗜酸乳杆菌含菌量26.OlX108CFU/mL;产朊假丝酵母菌含菌 量 8. 07X108CFU/mL;枯草芽孢杆菌含菌量 12. 84X108CFU/mL;总活菌数 46. 92X108CFU/ mL;重金属0. 5mg/Kg;霉菌数8CFU/mL;大肠杆菌4CFU/100mL;沙门氏菌无检出;外观、气味 具有酸香味的深棕色液体;
[0197] 2)经1)发酵好的复合菌液打入储存罐中,用纯水稀释20倍,得到18. 9吨稀释后 的菌液,通过调配混匀、过滤后经全自动灌装生产线(洗灌装机150瓶/min,2L/瓶,12瓶/ 箱),获得液体型瓶装功能微生物产品总活菌数为2. 4X108CFU/mL,保质期为1年,6个月时 检验菌种存活率为86. 14%,1年时检验菌种存活率82. 67%。
[0198]制备实施例十(复合型粉剂微生物饲料添加剂的制备):
[0199] 1)卧式双轴桨叶混合机型号SSHJ-4,全体积4m3,每批混合量为2吨,其中装填的 麸皮(含水量8. 5% ) 1. 7吨,发酵液0. 3吨(制备实施例九步骤一所得),混合时间60s, 从混合机出来的物料水分为22%,枯草芽孢杆菌含菌量2. 69X10sCFU/mL;产朊假丝酵母菌 含菌量2. 88X10sCFU/mL;嗜酸乳杆菌含菌量4. 61X10sCFU/mL;总活菌数10. 18XIO8CFU/
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