一种铜绿假单胞菌及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物领域，特别涉及一种铜绿假单胞菌，还涉及该铜绿假单胞菌在 防治植物病害中的应用。
【背景技术】
[0002] 真菌是引起植物病害的重要病原菌，其侵染寄主后，作物根、茎、叶、花、果实和种 子会产生变色、坏死、腐烂、萎蔫或畸形症状。目前玉米、豇豆和京葱等农作物病害主要还是 依靠化学杀菌剂进行防治，这些药剂一方面对环境和人的健康有着潜在的危害，一方面会 导致病原真菌的抗性增强，因此，单一的依靠化学杀菌剂来防治真菌病害并不是长久环保 之计。
[0003] 拮抗细菌可以通过分泌产生一系列代谢产物抑制病原菌的生长，如细菌素、蛋白 酶、有机酸、几丁质酶和过氧化氢酶等。假单胞菌作为一种生防菌，广泛活跃于植物根际中， 是植物根际促生菌（PlantGrowth-PromotingRhizobacteria,PGPR)的重要组成部分。
[0004] 研究表明，其中铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa)、恶臭假单胞菌 (Pseudomonasputida)和焚光假单胞菌（PseudomonasfIuorescens)等可产生活性物质或 代谢产物等抑制或阻碍病原真菌地生长，主要有抗生素类、相关酶类、嗜铁素、脂肽类等。而 铜绿假单胞菌作为假单胞菌的一种，其可产生吩嗪-1-羧酸，藤黄绿脓素菌素等多种活性 物质，对水稻纹枯病、油菜菌核病、辣椒疫霉病等多种植物病原菌具有抑制作用。而作物轮 作障碍或重茬现象中，病原真菌是其一个重要原因，因此拮抗细菌在作物轮作障碍或重茬 中也有重要的开发前景。
[0005] 随着人们环保意识的不断增强以及对无公害农产品的需求增大，植物病害的生物 防治迫在眉睫，拮抗细菌有着分布广泛、数量众多，作用方式多样、安全无污染而备受关注。 因此，本研究中具有对多种植物病原菌有着较广抑制谱的T1-3菌株在玉米多种病害、班豆 锈病和京葱锈病等病害中具有较广应用前景，此项工作具有重要的意义
【发明内容】
[0006] 发明目的：本发明的第一目的在于提供一种对玉米大斑病、玉米圆斑病、玉米茎基 腐病、玉米纹枯病、包菜锈病、豇豆锈病、辣椒叶腐、京葱锈病和京葱叶斑病菌具有拮抗作用 的铜绿假单胞菌。
[0007] 本发明的第二目的在于提供一种铜绿假单胞菌在防治玉米大斑病、玉米圆斑病、 玉米茎基腐病、玉米纹枯病、包菜叶腐病、豇豆锈病、辣椒叶腐、京葱锈病和京葱叶斑病菌植 物病害中的应用。
[0008] 技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：一种铜绿假单 胞菌，其分类命名为铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3,保藏在中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院 微生物研究所，邮编为100101，保藏编号为：CGMCCNo. 10433,保藏日期为2015年01月23 曰。
[0009] 铜绿假单胞菌的16SrDNA序列如SEQIDNo. 1所示。将所测16SrDNA序列通过 BLAST比对，鉴定其为铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa)。
[0010] 所述的铜绿假单胞菌是在防治玉米大斑病中的应用。
[0011] 所述的铜绿假单胞菌是在防治玉米圆斑病中的应用。
[0012] 所述的铜绿假单胞菌是在防治玉米茎基腐病中的应用。
[0013] 所述的铜绿假单胞菌是在防治玉米纹枯病中的应用。
[0014] 所述的铜绿假单胞菌是在防治包菜叶腐病中的应用。
[0015] 所述的铜绿假单胞菌是在防治豇豆锈病中的应用。
[0016] 所述的铜绿假单胞菌是在防治辣椒叶腐病中的应用。
[0017] 所述的铜绿假单胞菌是在防治京葱锈病中的应用。
[0018] 所述的铜绿假单胞菌是在防治京葱叶斑病中的应用。
[0019] 有益效果：本发明提供的铜绿假单胞菌对玉米、班豆、辣椒、包菜和京葱等多种植 物病害有很好的防治效果，抑菌谱广；该菌繁殖速度快，可人工培育，培养条件简单，抗逆性 强，利于生产应用；该菌对人畜无致病性，安全有效，具有良好的开发前景。
[0020] 具体而言，本发明相对于现有技术，具有以下突出的优势：
[0021] (1)本发明提供的铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3菌剂抑制谱较 广，对玉米纹枯病、大斑病、圆斑病、叶枯等病害、辣椒炭疽病、包菜叶腐病、豇豆锈病、京葱 锈病和叶斑病病原菌有较广抑制谱；弥补了化学药剂防效欠佳的不足，为此类真菌病害的 综合防治增加了一种手段；
[0022] (2)本发明铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3菌剂为生物制剂，且菌 株本身分离自玉米的根际土，因此它的使用不会带来一系列的环境问题，有利于玉米等作 物的无公害生产；
[0023] (3)作物轮作障碍或重茬现象中，病原真菌种类变多、数量变大是其一个重要原 因，因此拮抗细菌在作物轮作障碍或重茬中也有重要开发前景。
【附图说明】
[0024] 图1为铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3分别对玉米大斑菌病（A)、 辣椒叶腐菌病（B)、玉米茎基腐菌病（C)、豇豆锈病（D)的拮抗实验结果。
[0025] 图2为铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa)T1-3生理生化分析结果。
[0026] 图3为对照组和处理组在液体培养基中培养结果。
[0027] 图4为对照组和处理组在马丁氏平板培养基上培养中培养结果。
【具体实施方式】
[0028] 实施例1铜绿假单胞菌菌株的分离筛选
[0029]1.培养基：
[0030]马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂15-20g， 自然PH，定容至1L。
[0031] 牛肉膏蛋白胨培养基（LB培养基）：胰蛋白胨10g、酵母浸粉5g、氯化钠10g，pH偏 中性，定容至1L。
[0032] 2?铜绿假单胞菌菌株的分离筛选
[0033] A)称取玉米大斑病发病较严重区域附近未有该病害发生的健康玉米植株的根际 土壤l〇g，加入90ml无菌水中，得10 1稀释液，于30°C摇床中130r/min，培养2_3h，继续加 入无菌水稀释，分别得到10 5, 10 6, 10 7,10 8的稀释液，分别取200ml上述稀释液于LB平板 上涂布，30°C培养48h，挑取单菌落接种于LB固体培养基斜面上保存；
[0034]B)将活化于PDA平板的真菌病害用直径5mm的打孔器打取同样大小的菌碟接种 于PDA平板中央，降至24h后，将LB斜面活化的步骤A)得到的菌株接种于90mm平板的 一侧，28°C培养3-5d，观察抑菌能力，并记录抑菌带的宽度；以无菌的接种真菌的PDA平板 作为对照，初步筛选出具有拮抗真菌的菌株；再用相同方法进行复筛，得到铜绿假单胞菌 (Pseudomonasa