新型芽孢杆菌cjbv及含有其的抗菌组合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种对真菌类及引起食物中毒的细菌有特定抗菌活性的新型芽孢杆 菌CJBV(BacillusvelezensisCJBV)菌株、利用从所述菌株分离的芽孢菌霉素D类似物的 抗菌组合物，以及含有所述抗菌组合物并用于预防和治疗细菌感染疾病的药物组合物。
【背景技术】
[0002] 以传统方法制造发酵大豆食品时，因其属于利用微生物的食品，所以微生物中含 有的有害菌极有可能引起食物中毒，使人体处于危险之中。然而，通常的杀菌方法很难彻底 杀灭病原性真菌类及引起食物中毒的细菌等有害菌，其产生毒性物质，进而引起食物中毒。
[0003] 因此，使用化学保存剂或防腐剂，防止变质或腐烂，并长期保持所述食品等的品 质。但是，化合物本身有可能会起到环境激素的作用，或者存在引起皮肤过敏的危险性，所 以消费者对化学保存剂或防腐剂越来越反感。
[0004] 天然保存剂作为能够阻碍腐败菌生长的微生物或其代谢产物，越来越受到人们的 关注。其中，细菌素（Bacteriocin)或类细菌素（Bacteriocin-likesubstances)作为能够 用于保存剂的天然抗菌物质之一，备受人们的关注。细菌素是一种天然无毒防腐剂，是一种 抗菌蛋白，由革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌产生的蛋白质或蛋白质和碳水化合物组成。尤 其，随着美国食品药品监督管理局于1998年批准涂抹型再制干酪食品中使用作为细菌素 的乳酸链球菌肽（nisin)，细菌素被认为是一种可以在食品工业中使用的抗菌剂。
[0005] 人们对芽孢杆菌属或乳酸菌生成的所述抗菌物质的研究非常活跃，芽孢杆菌菌株 产生的细菌素与能够抑制革兰氏阳性菌生长的乳酸菌细菌素不同，其抗菌活性范围广，具 有多种特性。
[0006]具体而言，芽孢杆菌属能够产生多种抗菌物质（Sholbergetal.，1995Can. J.Microbio. 41，247-252)，已有报告的抗菌物质有抗霉枯草菌素（mycosubtilin)、抗 真菌素（eumycin)、芽孢菌霉素（baciIlomycin)、表面活性素（surfactin)、伊枯草菌 素（iturin)家族、aminopolyol物质、脂蛋白（lipoprotein)等，已有报告的同时具有 抗细菌和抗真菌活性的物质有枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis)产生的杆菌溶素 (bacilysin)〇
[0007] 有关的先前技术文献，S卩，据韩国专利10-2013-0008673记载，芽孢菌霉素Dl为 解淀粉芽孢杆菌菌株（BacillusamyloliquefaciensGYL4)产生的抗菌物质，对植物病原 真菌有广泛的活性。
[0008] 另外，据韩国专利10-2013-0025453记载，新型抗菌物质UV254-B为枯草芽孢杆菌 产生的抗菌物质，其完全不同于含有芽孢菌霉素的伊枯草菌素物质，只对引起食物中毒的 细菌一一蜡样芽胞杆菌及单核细胞增多性李斯特氏菌表现出特定的抗细菌活性。
[0009] 但是，根据已有报告，只有关于细菌素对特定微生物抗菌活性的报告，暂时没有对 引起各种作物的病害以及包括食物中毒在内的细菌感染疾病在内的各种病原菌有关的报 告。而且，所述文献中记载的解淀粉芽孢杆菌为发酵食品中对酱类发酵有益的细菌，在将细 菌素应用于发酵大豆食品时，很难认为其只对引起食物中毒的真菌类及细菌类具有特定的 活性，因此存在很难直接用于发酵食品的问题。
[0010] 因此，本发明人致力于研究一种既对人体无害，同时又能抑制各种真菌类及细菌 类的方法，经过不懈努力，确认传统酱曲中分离的芽孢杆菌CJBV不仅对病原性霉菌、酵母 等一种以上的各种真菌类具有抗菌活性，而且对酱类发酵细菌不具有抗菌活性，只对引起 食物中毒的细菌等食品中主要有害细菌具有特定的抑制作用和抗菌活性，据此完成本发 明。
【发明内容】
[0011] (要解决的技术问题）
[0012] 本发明的主要目的在于，提供一种新分离的芽孢杆菌CJBV菌株，其对真菌类及引 起食物中毒的细菌具有特定抗菌活性。
[0013] 本发明的另一目的在于，提供一种所述芽孢杆菌CJBV菌株产生的芽孢菌霉素D类 似物。
[0014] 本发明的另一目的在于，提供一种利用所述芽孢杆菌CJBV菌株及所述芽孢菌霉 素D类似物的抗菌组合物。
[0015] 本发明的另一目的在于，提供一种含有所述抗菌组合物的食品组合物。
[0016] 本发明的另一目的在于，提供一种含有所述抗菌组合物的饲料组合物。
[0017] 本发明的另一目的在于，提供一种含有所述抗菌组合物的植物及作物用抗菌剂。
[0018] 本发明的另一目的在于，提供一种植物病原性真菌防治方法，其包括使用抗菌剂 对植物体或土壤进行处理的步骤。
[0019] 本发明的另一目的在于，提供一种预防和治疗细菌感染疾病的药物组合物，其含 有所述抗菌组合物。
[0020] 本发明的另一目的在于，提供一种预防和改善细菌感染疾病的保健食品，其含有 所述抗菌组合物。
[0021] 本发明的另一目的在于，提供一种含有所述抗菌组合物的准药品。
[0022] (解决问题的手段）
[0023] 作为实现所述目的的本发明的一个方面，本发明提供一种新分离的芽孢杆菌 CJBV(BacillusvelezensisCJBV)菌株，其对真菌类及引起食物中毒的细菌具有特定抗菌 活性，保藏号为KCCM11528P。
[0024] 在本发明中，术语--芽孢杆菌是一种自然界中分布广泛的好氧性或兼性厌氧性 革兰氏阳性杆菌属，芽孢杆菌属的细菌有芽孢杆菌等。本发明人通过如下方法查明对真菌 类及引起食物中毒的细菌具有特定抗菌活性的新型菌株，其作为芽孢杆菌属的细菌，属于 芽孢杆菌。
[0025] 首先，从传统酱曲中分离芽孢杆菌菌株后，对病原性霉菌、酵母等真菌类及引起食 物中毒的细菌类进行验证，从中筛选具有很强的抗菌活性的菌株，然后进行16SrDNA及 gyrA基因序列分析，对筛选的菌株进行鉴别。将所述筛选菌株的16SrDNA基因序列标记 为序列号1，其表现出了与芽孢杆菌99%的同源性。另外，将所述筛选菌株的gyrA基因序 列标记为序列号2,其与芽孢杆菌表现出了 100%同源性（实施例1)。据此，将所述菌株鉴 别为芽孢杆菌（Bacillusvelezensis)，命名为芽孢杆菌CJBV，并于2014年4月17日，在 隶属于布达佩斯条约的国际保藏机构一一韩国微生物保藏中心（KCCM)保藏，其保藏号为 KCCM11528P(实施例 1)。
[0026] 因此，所述芽孢杆菌CJBV具有标记为序列号1的16srDNA序列。
[0027] 根据本发明的一个方面，所述新分离的芽孢杆菌CJBV不仅对植物病原性霉菌及 酵母等真菌具有优秀的抗菌活性，还能抑制引起食物中毒的细菌，表现出了对各种真菌类 及引起食物中毒的细菌同时起作用的抗菌活性（实施例3,图3及图4)。
[0028] 作为一个具体实施例，所述真菌类是选自由炭疽病菌（Colletotrichum orbiculare)、尖抱镜刀菌（Fusariumoxysporum、白色念珠菌（Candidaalbicans)及拜耳 接合酵母（Zygosaccharomycesbailii)组成的组的病原性真菌，但并不限于此。
[0029] 在本发明中，术语一一炭疽病菌是指对黄瓜、香瓜、西瓜等萌芦科作物引起炭疽病 (Anthracnose)的真菌。
[0030] 在本发明中，术语一一尖孢镰刀菌是指对黄瓜、香瓜、西瓜等萌芦科作物引起枯萎 病（Fusariumwilt)的病原性真菌。
[0031] 本发明人已确认新分离的芽孢杆菌CJBV对所述炭疽病菌及尖孢镰刀菌具有抗菌 效果，所述新型菌株抑制黄瓜、香瓜、西瓜等萌芦科作物的炭疽病及枯萎病等植物传染病， 可以用于制造防治植物病的微生物制剂。
[0032]因此，作为环保无公害的生物农药使用芽孢杆菌CJBV时，有利于解决有机合成农 药导致的生态破坏和毒性问题，减轻农户的经济负担。而且，由于微生物的可持续特性，能 够长期受益。
[0033]另外，所述生物农药可以定义为，为了防治植物病原菌而从自然环境中分离采集 微生物并实现产品化的农药。
[0034] 在本发明中，术语一一白色念珠菌是属于半知菌类的真菌的属名，引起皮肤真菌 病、念珠菌性口腔炎、肠道疾病、念珠菌性阴道炎（Candidavaginitis)等疾病。尤其，念珠 菌性阴道炎是一种常见疾病，约75%的女性一生中阴道和外阴部至少感染一次，约45%的 女性每年复发2次以上，大部分都是因为白色念珠菌而引起。当女性荷尔蒙分泌紊乱或免 疫力极度降低时，健康人体的口腔、肠道、阴道等正常拥有的白色念珠菌容易受到感染。
[0035] 本发明人已确认新分离的芽孢杆菌CJBV对所述白色念珠菌具有抗菌效果，利用 所述新型菌株，能够有效预防和治疗皮肤真菌病、念珠菌性阴道炎、细菌感染性口腔炎以及 肠道疾病。
[0036] 在本发明中，术语一一拜耳接合酵母是一种属于酵母属的酵母，其作为腐败性酵 母，在饮料产品及淀粉加工产品中发生酒精发酵的同时产生大量的二氧化碳气体，降低食 品的品质。
[0037] 本发明人已确认新分离的芽孢杆菌CJBV对所述拜耳接合酵母具有抗菌效果，利 用所述新型菌株，能够提高饮料产品及淀粉加工产品等食品的保质期，预防和治疗由此可 能引起的食物中毒等细菌感染疾病。
[0038] 作为另一个具体实施例，所述引起食物中毒的细菌可以是蜡样芽胞杆菌 (Bacilluscereus)或单核细胞增多性李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes)，但并不限 于此。
[0039] 在本发明中，术语一一蜡样芽胞杆菌是一种革兰氏阳性菌，形成耐热孢子，感染时 引起腹泻和呕吐。作为好氧性细菌，存在于土壤、谷物等，自然界中分布广泛。该菌株的孢 子相比于其他菌株的孢子，其表面粘附性强，具有很难清洗和消毒的特点。而且，所述蜡样 芽胞杆菌在料理后放置数小时的肉菜、蔬菜、米饭及面食中因孢子发芽而繁殖，而在低温杀 菌后的牛奶、奶酪等中同样有可能发芽产生耐热性肠毒素，并且对高温表现出抗性，极难抑 制。