一种猪血降血压肽的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种猪血降血压肽的制备方法。
【背景技术】
[0002]猪血易于获得，成本低，并且通过血液开发出的产品有各种功能性，因此猪血有着保健品开发的前景，尤其在国外一些发达国家如欧洲一些国家及日本，猪血的利用率已达50%以上，他们主要是开发肽类试剂、肽类药物以及功能食品和食品添加剂。这些功能性肽类，比人工合成添加剂更安全，更卫生，迎合了社会发展的需要。因此，以猪血为底物开发生物活性肽，可以提高生猪屠宰加工企业产品附加值，显示出巨大的市场前景。
[0003]降血压肽(ACEIP)又称ACE抑制肽，是一类具有显著降血压功效的多肽短链物质，可竞争性地与ACE结合达到降压效果。
[0004]天然食品中的降血压肽通常是由蛋白质水解酶在温和条件下水解蛋白质而获得的一类多肽，具有降压效果且无副作用。研究表明，猪血中具有较强降血压肽，因此开发研究一种从猪血中提取、纯化降血压肽的成熟方法，可以一举多得。目前从猪血中提取降血压肽的技术方法和产品尚未见报道。
【发明内容】
[0005]针对现有技术中存在的不足之处，本发明提供一种成本低、效果好的利用猪血蛋白制取降血压肽的方法。
[0006]本发明为达到以上目的，是通过这样的技术方案来实现的:提供一种猪血降血压肽的制备方法，包括以下步骤:
(1)采集新鲜猪血，以5g/ L的梓檬酸钠抗凝，在4°C、8000r / min离心lOmin，收集下层沉淀，以获得红血球；将红血球加入同等体积的生理盐水冲洗并离心两次后加入2倍体积的蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4°C、4000r / min离心lOmin，得到血红蛋白溶液，于4°C保存备用；
(2)取血红蛋白溶液，加入适量的胰蛋白酶酶解，搅拌，2mol/LNaoH溶液维持体系PH8.0,45-50°C，6-10h ;将酶解反应产物迅速升温至85°C并保持此温度10?15分钟，再迅速冷却至50°C以下，调节pH值至5.0左右，8000r / min离心15min，获得上清酶解液，4°C冷减备用；
(3)活性炭用量为酶解液总重的5-30%，温度55°C，搅拌脱色20-30min;再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1?0.2Mpa的工作压力和O?45°C的工作温度下，采用截留分子质量为5kD-2kD超滤膜进行超滤处理，截留5kD-2kD蛋白肽酶解液，得降血压肽酶解液，_20°C保存。
[0007]以上所述的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步骤(2)中胰蛋白酶是酶比活力25\10411/^;胰蛋白酶加酶量是20001] / g。
[0008]本发明的一种猪血降血压肽的制备方法，具有如下优点: 1.本发明所制备的降血压肽是猪血红蛋白经生物酶水解而得，属于天然提取物，具有天然、无毒、无污染、无残留、无副作用、高效等特点，是一种新型的绿色降血压药物。
[0009]2.本发明所采用的原料来源广泛，价格低廉，经过本发明的技术转化可以有效的提高猪血副产物的附加值，对继续促进生猪产业的发展有重要的意义。
[0010]3.本发明的产品可以作为药品、保健食品、食品、食品添加剂等，工艺科学合理，操作简单，具有较强的工业实施性。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
(I)采集新鲜猪血100L，以5g / L的梓檬酸钠抗凝，在4°C、8000r / min离心lOmin，收集下层沉淀，以获得红血球约45L (固含30%);在红血球中加入45L生理盐水蒸馏水冲洗并离心两次后加入90体积的蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4°C、4000r /min离心lOmin，得到血红蛋白溶液135L。
[0012](2)取适量血红蛋白溶液，加入IlOg胰蛋白酶酶解(酶比活力为25X 104u/g)，搅拌，2mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0，50°C，5h ;将酶解反应产物迅速升温至85°C并保持此温度15分钟，再迅速冷却至O?30°C以终止酶解反应，调节pH值至7.0左右，8000r /min离心15min，获得上清酶解液130L。
[0013](3)酶解液中加入活性炭用量20kg，温度55°C，搅拌脱色30min ;再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1?0.2Mpa的工作压力和O?45°C的工作温度下，采用截留分子质量为5kD及2KD超滤膜进行处理，收集截留5kD-2kD蛋白肽(降血压肽)酶解液 65L，-20°C保存。
[0014]检测结果，所得降血压肽对血管紧张素转化酶的抑制率为76.68%，降血压作用明显。
[0015]实施例2
(I)采集新鲜猪血50L，以5g / L的梓檬酸钠抗凝，在4°C、8000r / min离心lOmin，收集下层沉淀，以获得红血球约23L (固含30%);在红血球中加入23L生理盐水蒸馏水冲洗并离心两次后加入46体积的蒸馏水，，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4°C、4000r /min离心lOmin，得到血红蛋白溶液69L。
[0016](2)取适量血红蛋白溶液，加入55g胰蛋白酶酶解(酶比活力为25X 104u/g)，搅拌，2mol/LNaoH溶液维持体系pH8.0，50°C，5h ;将酶解反应产物迅速升温至85°C并保持此温度15分钟，再迅速冷却至50°C以下，调节pH值至7.0左右，8000r / min离心15min，获得上清酶解液67L。
[0017](3)酶解液中加入活性炭用量10kg，温度55°C，搅拌脱色30min ;再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1?0.2Mpa的工作压力和O?45°C的工作温度下，采用截留分子质量为5kD及2KD超滤膜进行处理，收集截留5kD-2kD蛋白肽(降血压肽)酶解液 33L，-20°C 保存。
[0018]检测结果，所得降血压肽对血管紧张素转化酶的抑制率为76.42%，降血压作用明显。
【主权项】
1.一种猪血降血压肽的制备方法，其特征是包括以下步骤: (1)采集新鲜猪血，以5g/ L的梓檬酸钠抗凝，在4°C、8000r / min离心lOmin，收集下层沉淀，以获得红血球；将红血球加入同等体积的生理盐水冲洗并离心两次后加入2倍体积的蒸馏水，超声波细胞破碎辅助溶血20min，然后在4°C、4000r / min离心lOmin，得到血红蛋白溶液，于4°C保存备用； (2)取血红蛋白溶液，加入适量的胰蛋白酶酶解，搅拌，2mol/LNaoH溶液维持体系PH8.0,45-50°C，6-10h ;将酶解反应产物迅速升温至85°C并保持此温度10?15分钟，再迅速冷却至50°C以下，调节pH值至7.0左右，8000r / min离心15min，获得上清酶解液，4°C冷减备用； (3)活性炭用量为酶解液总重的5-30%，温度55°C，搅拌脱色20-30min;再进行粗滤处理后得粗滤酶解液；将粗滤酶解液在0.1?0.2Mpa的工作压力和O?45°C的工作温度下，采用截留分子质量为5kD-2kD超滤膜进行超滤处理，截留5kD-2kD蛋白肽酶解液，得降血压肽酶解液，_20°C保存。2.根据权利要求1所述的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步骤(2)中胰蛋白酶是酶比活力25X 104u/g。3.根据权利要求1所述的一种利用猪血红蛋白制取抗菌肽的方法，其特征是:所述步骤(2)中胰蛋白酶加酶量是2000U / go
【专利摘要】本发明公开了一种猪血降血压肽的制备方法，包括以下步骤：将猪全血分离得猪血球，再将猪血球溶血、酶解、脱色、超滤，即得降血压肽；所述胰蛋白酶的加酶量是2000U／g，在pH8、温度45℃～50℃条件下，酶解反应时间6～10h，此条件下降血压肽酶解液对血管紧张素转化酶的抑制率为75%以上，具有显著的降血压作用。
【IPC分类】C07K1/34, C12P21/06
【公开号】CN105112485
【申请号】CN201510620518
【发明人】宁发子, 王玉峰, 邓军
【申请人】重庆都好生物科技有限公司
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月26日