一种用于检测食品中难培养型乳酸菌的培养基以及检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及微生物领域，尤其设及一种用于检测食品中难培养型乳酸菌的培养基W及检测方法。
【背景技术】
[0002] 乳酸菌是能够发酵碳水化合物，并产生大量乳酸的一类细菌的总称。目前，该类微 生物因为产酸、合成乳酸菌素等特性，对提高食品保藏性、食品风味、营养附加值W及调节 人体肠道菌群具有重要作用。越来越多的乳酸菌正被视为人体益生菌而得到广泛应用。但 是实际环境中，诸如酒类饮料、畜禽水产品等食品因为污染乳酸菌，导致食品酸败、异味，感 官品质严重劣化。因此，对于非特定乳酸菌发酵食品或灭菌后的食品环境，我们有必要对酸 性、厌氧包装等适合乳酸菌生长的环境及食品基质进行乳酸菌风险监控。
[0003] 目前，MRS、MC和莫匹罗星裡盐改良的MRS等培养基常用于乳酸菌的检测，一些分 子生物学、免疫学方法则见于某些特定乳酸菌的检测。实际正常样品中，污染的潜在乳酸菌 的浓度往往较低，因此无论哪种检测方法，均需对菌体进行培养富集，但是常见培养基难W 模拟实际生长环境，缺乏必要的生长促进因子，导致一些特殊的乳酸菌，存在不能检出、固 体培养基难W培养或检出周期较长等问题，例如利用MRS琼脂培养基监测啤酒中常污染的 典型腐败乳酸菌Lactobacillusparacollinoides和LactobacillusIin化eri等，在固体 培养基上很难生长，培养周期在10天W上，不利于该类微生物的风险控制。
[0004] 目前也有利用液体培养基替代固体培养基进行食品中乳酸菌检测的方法，例如 CN104278086A公开了一种发酵乳制品中乳酸菌的检测方法。该检测方法中，在培养阶段用 到的是MRS培养基，其组分为：葡萄糖20重量份，牛肉膏20重量份，琼脂15重量份，蛋白 腺10重量份，酵母提取物5重量份、乙酸钢5重量份、巧樣酸二锭2重量份，憐酸氨二钟2 重量份，硫酸儘水合物0. 8-1重量份，加蒸馈水至比，加抑调节剂至抑为6. 2-6. 5,高压灭 菌备用。CN102803504A公开了可用于检测样品中的产酸菌的方法。所述方法还提供对产气 产酸菌的检测，其中用到的培养基为MRS培养基、APT培养基、膜蛋白腺葡萄糖牛肉浸膏培 养基、膜蛋白腺葡萄糖酵母浸膏培养基、番茄汁琼脂和Kan重量份-Fun重量份培养基。虽 然运些文献中采用了液体培养基，然而，其对于特定乳酸菌，例如啤酒中常污染的典型腐败 乳酸菌Lactobacillusparacollinoides和LactobacillusIin化eri等，很难实现快速培 养，从而很难被检出。 阳0化]万岩松等研究了一种检测与鉴定啤酒腐败乳酸菌（LAB)的微菌落法。在该方 法中，细菌细胞经聚碳酸醋膜过滤处理后，置于对啤酒腐败乳酸菌具有高度特异检测能 力的A抓培养基中，经短期培养后，由活细胞形成的微菌落用簇基二乙酸巧光染色，利用 yFinder检测系统计数。其中A抓培养基的组成为：MRS肉汤培养基粉末2. 61重量份、乙 酸钢0. 5重量份、环乙酷亚胺15. 0重量份、琼脂1000血，调节最终抑值为5. 0 (参见万岩 松等，"微菌落法快速检测与鉴定啤酒腐败乳酸菌"，啤酒科技，第3期，2010年3月10日）。 张颖等研究了用改良MRS培养基检测啤酒中乳酸菌的方法，通过用补充麦芽糖和清酒的改 良MRS培养基来检测啤酒中的乳酸菌，对生成的菌落进行观察和镜检，并通过KOH试验和过 氧化氨酶试验进一步证实（参见张颖等，用改良MRS培养基检测啤酒中乳酸菌的方法，安徽 大学学报（自然科学版），1999年12月25日）。虽然运些文献中重点研究了啤酒中常污染 的典型腐败乳酸菌，但并不能很好地模拟微生物实际生长环境，从而实现乳酸菌的较快地 培养富集。
[0006]因此，如何采用液体培养基来模拟微生物的实际生长环境并实现难培养型乳酸菌 的快速培养，从而快速、准确地判断出腐败乳酸菌是否存在已成为目前亟待解决的问题。
【发明内容】
[0007]为解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种用于检测食品中难培养型 乳酸菌的培养基及检测方法。本发明所提供的培养基能够更好地模拟微生物实际生长环 境，同时添加了代谢促进因子，能够实现固体难培养型乳酸菌的快速培养，通过该培养基的 培养发酵能够更加简便、快速地判断腐败乳酸菌是否存在，从而实现对食品中难培养型乳 酸菌的快速检测。
[000引为达此目的，本发明采用了W下技术方案：
[0009]第一方面，本发明提供了一种用于检测食品中难培养型乳酸菌的培养基，所述培 养基配方为： 阳010] 糖类物质10-40重量份，蛋白腺5-15重量份，酵母膏粉2-6重量份，牛肉膏粉5-15 重量份，憐酸氨二钟1-3重量份，巧樣酸=锭1-3重量份，乙酸钢2. 5-7. 5重量份，硫酸儀 0. 1-0. 3重量份，硫酸儘0. 02-0. 06重量份，吐溫-800. 5-1. 5重量份，可溶性淀粉0. 5-1. 5 重量份，产酸代谢促进因子0. 2-2重量份（屯水合硫酸亚铁或六水合氯化儀的一种或两种 混合），未受污染的样品过滤清液100-500重量份，补加蒸馈水至1000重量份，抑值调节为 4-5. 5。
[0011] 本发明所述培养基中，所述未受污染的样品过滤清液指的是没有受污染的该样品 过滤后的液体，比如说要检测料酒，所述未受污染的样品过滤清液就是指没有变质的料酒。
[0012] 本发明通过在所述培养基中添加正常样品过滤清液，能够更好地模拟微生物实际 生长环境；同时添加屯水合硫酸亚铁或六水合氯化儀作为产酸代谢促进因子，从而有效实 现难培养型乳酸菌的快速生长产酸，使检测时间至少缩短1倍W上。
[0013]本发明中所述糖类物质的添加量为10-40重量份，例如可W是10重量份、12重量 份、13重量份、15重量份、16重量份、18重量份、20重量份、22重量份、25重量份、28重量 份、30重量份、32重量份、35重量份、40重量份，优选为20-35重量份，进一步优选为30重 量份。本发明中所述糖类物质可W是葡萄糖、薦糖、麦芽糖或乳糖中的至少一种，在此不作 特别限定。
[0014]本发明所述蛋白腺的添加量为5-15重量份，例如可W是5重量份、6重量份、8重 量份、9重量份、10重量份、11重量份、12重量份、13重量份、14重量份、15重量份，优选为 10-15重量份，进一步优选为10重量份。
[0015]本发明所述酵母膏粉的添加量为2-6重量份，例如可W是2重量份、2. 1重量份、 2. 2重量份、2. 3重量份、2. 5重量份、2. 8重量份、3重量份、3. 2重量份、3. 3重量份、3. 5重 量份、3. 8重量份、4重量份、4. 2重量份、4. 5重量份、4. 8重量份、4. 9重量份、5重量份，优选 为2-4重量份，进一步优选为4重量份。 阳016] 本发明所述牛肉膏粉的添加量为5-15重量份，例如可W是5重量份、6重量份、8 重量份、9重量份、10重量份、11重量份、12重量份、13重量份、14重量份、15重量份，优选为 10-15重量份，进一步优选为10重量份。
[0017] 本发明所述憐酸氨二钟的添加量为1-3重量份，例如可W是1重量份、1. 1重量份、 1. 2重量份、1. 3重量份、1. 5重量份、1. 7重量份、1. 8重量份、2重量份、2. 2重量份、2. 5重 量份、2. 6重量份、2. 7重量份、2. 8重量份、3重量份，优选为1-2重量份，进一步优选为2重 量份。
[0018] 本发明所述巧樣酸立锭的添加量为1-2重量份，例如可W是1重量份、1. 1重量份、 1. 2重量份、1. 3重量份、1. 4重量份、1. 5重量份、1. 6重量份、1. 7重量份、1. 8重量份、1. 9 重量份、2重量份、2. 2重量份、2. 5重量份、2. 6重量份、2. 7重量份、2. 8重量份、3重量份，优 选为1-2重量份，进一步优选为2重量份。
[0019] 本发明所述乙酸钢的添加量为2. 5-7. 5重量份，例如可W是2. 5重量份、2. 6重量 份、2. 7重量份、2. 8重量份、2. 9重量份、3重量份、3. 2、3. 5重量份、4重量份、4. 5重量份、5 重量份、5. 5重量份、6重量份、6. 5重量份、7重量份、7. 5重量份，优选为2. 5-5重量份，进一 步优选为5重量份。
[0020] 本发明所述硫酸儀的添加量为0. 1-0. 3重量份，例如可W是0. 1重量份、0. 12重量 份、0. 15重量份、0. 18重量份、0. 2重量份、0. 22重量份、0. 25重量份、0. 26重量份、0. 28重 量份、0. 3重量份，优选为0. 1-0. 2重量份，进一步优选为0. 2重量份。
[0021] 本发明所述硫酸儀的添加量为0. 02-0. 06重量份，例如可W是0. 02重量份、0. 025 重量份、0. 03重量份、0. 035重量份、0. 04重量份、0. 045重量份、0. 05重量份、0. 055重量 份、0. 06重量份，优选为0. 02-0.