引葡萄糖lOg，薦糖20g，蛋白腺lOg，酵母膏粉4g，牛肉膏粉5g，憐酸氨二钟2g，巧樣 酸=锭Ig,乙酸钢5g，硫酸儀0.Ig,硫酸儘0. 04g，吐溫-801g，可溶性淀粉Ig,六水合氯化 儀0. 2g，未受污染的嘘油与水（1:1)稀释过滤清液200mU蒸馈水SOOmU煮沸，调节抑值为 4. 5,分装10mT,于无菌试管中，115°C，15min灭菌。 柳64] 似接种、培养、检测 W65] 待测样品摇匀后，每个样品接种4管，每管分别接种ImL。随机取其中2管测定总 酸（W乳酸计），取其平均值作为总酸初始值X。，每个稀释度剩余的2管于30 ±TC培养。培 养3天后，对剩余2管测定总酸（W乳酸计），取其平均值作为培养后总酸值Xi,计算培养 前后的总酸变化值AX。同时WGB4789. 35-2010规定的乳酸菌总数的检测方法作为对照。 [0066] (3)结果如表3-4所示，其中表3为本实施例的检测方法得到的检测结果，表4为 WGB4789. 35-2010规定的乳酸菌总数的检测方法得到的检测结果。
阳071] 注：乳酸菌菌落总数单位：CFU/mL
[0072] 嘘油中腐败乳酸菌属难培养的一类乳酸菌，本发明方案对疑似变质的嘘油中的腐 败乳酸菌的检出较GB4789. 35-2010提供的方法要快，检出速率较国标方法提高了近两 倍，同时对阴性样品，本发明方案检测结果与国标法一致，未出现假阴性情况。
[0073] 实施例3
[0074] 检测啤酒：样品1、样品2中腐败乳酸菌的存在 [00巧](1)培养基组成成分：
[0076] 葡萄糖lOg，乳糖20g，蛋白腺lOg，酵母膏粉4g，牛肉膏粉lOg，憐酸氨二钟2g，巧 樣酸=锭2g，乙酸钢5g，硫酸儀0. 2g，硫酸儘0. 04g，吐溫-801g，可溶性淀粉0. 5g，屯水合 硫酸亚铁0. 5g，六水合氯化儀0. 5g，蒸馈水600血，煮沸，115°C，15min灭菌。
[0077] 将未受污染的啤酒过滤清液400血用孔径0. 22 ym滤膜除菌后加入上述已灭菌培 养基中，调节抑值为5. 5,分装10血于无菌试管中。 阳〇7引 似接种、培养、检测
[0079] 待测样品摇匀后，每个样品接种4管，每管分别接种ImL。随机取其中2管测定总 酸（W乳酸计），取其平均值作为总酸初始值X。，每个稀释度剩余的2管于30 ±TC培养。培 养4天后，对剩余2管测定总酸（W乳酸计），取其平均值作为培养后总酸值Xi,计算培养 前后的总酸变化值AX。同时WGB4789. 35-2010规定的乳酸菌总数的检测方法作为对照。
[0080] (3)结果如表5-6所示，其中表5为本实施例的检测方法得到的检测结果，表6为 WGB4789. 35-2010规定的乳酸菌总数的检测方法得到的检测结果。
阳0化]注：乳酸菌菌落总数单位：CFU/mL
[0086] 通过表5、表6可W看出，采用本实施例的检测方法对疑似变质的啤酒中的腐败乳 酸菌的检出较GB4789. 35-2010提供的方法要快，检测时间从10-12天可W缩短至4天， 检出速率提高了 2倍W上，同时对于阴性样品，采用实施例3的检测方法得到的结果与GB 4789. 35-2010提供的方法结果一致，未出现假阴性的情况。
[0087] 申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的工艺方法，但本发明并不局 限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的 技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的 添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
【主权项】
1. 一种用于检测食品中难培养型乳酸菌的培养基，其特征在于，所述培养基的配方 为： 糖类物质10-40重量份，蛋白胨5-15重量份，酵母膏粉2-6重量份，牛肉膏粉5-15 重量份，磷酸氢二钾1-3重量份，柠檬酸三铵1-3重量份，乙酸钠2. 5-7. 5重量份，硫酸镁 0. 1-0. 3重量份，硫酸锰0. 02-0. 06重量份，吐温-800. 5-1. 5重量份，可溶性淀粉0. 5-1. 5 重量份，产酸代谢促进因子〇. 2-2重量份，未受污染的样品过滤清液100-500重量份，补加 蒸馏水至1000重量份，pH值调节为4-5. 5。2. 如权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基的配方为： 糖类物质20-35重量份，蛋白胨10-15重量份，酵母膏粉2-4重量份，牛肉膏粉5-10 重量份，磷酸氢二钾1-2重量份，柠檬酸三铵1-2重量份，乙酸钠2. 5-5重量份，硫酸镁 0. 1-0. 2重量份，硫酸锰0. 02-0. 04重量份，吐温-800. 5-1重量份，可溶性淀粉0. 5-1重量 份，产酸代谢促进因子〇. 2-0. 5重量份，未受污染的样品过滤清液200-400重量份，补加蒸 馏水至1000重量份，pH值调节为4-5. 2。3. 如权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述培养基的配方为： 葡萄糖20重量份，麦芽糖15重量份，蛋白胨10重量份，酵母膏粉4重量份，牛肉膏粉 10重量份，磷酸氢二钾2重量份，梓檬酸三铵2重量份，乙酸钠5重量份，硫酸镁0. 2重量 份，硫酸锰0. 04重量份，吐温-801重量份，可溶性淀粉1重量份，七水合硫酸亚铁0. 3重量 份，六水合氯化镍〇. 2重量份，未受污染的样品过滤清液200重量份，补加蒸馏水至1000重 量份，pH值调节为4. 2。4. 如权利要求1或2所述的培养基，其特征在于，所述培养基的配方为： 葡萄糖10重量份，乳糖20重量份，蛋白胨10重量份，酵母膏粉4重量份，牛肉膏粉5 重量份，磷酸氢二钾2重量份，梓檬酸三铵1重量份，乙酸钠5重量份，硫酸镁0. 1重量份， 硫酸锰0. 04重量份，吐温-801重量份，可溶性淀粉1重量份，七水合硫酸亚铁0. 3重量份， 六水合氯化镍〇. 2重量份，未受污染的样品过滤清液400重量份，补加蒸馏水至1000重量 份，pH值调节为5。5. -种食品中难培养型乳酸菌的检测方法，其特征在于，所述方法采用如权利要求 1-4任一项所述的培养基进行检测。6. 如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： 将待测样品的原液接种于含有所述培养基的发酵管中，在30土1°C条件下培养2-5天 后，以乳酸计，根据发酵液总酸值增幅是否大于〇. 20g/100mL，定性判断是否存在乳酸菌污 染风险。7. 如权利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤： (1) 待测样品的原液的制备：将液体待测样品经过滤除杂后备用；或将固体或半固体 待测样品，按照1重量份样品加1-2重量份水搅拌均质，过滤除杂后备用； (2) 配制总体积为1L的培养基：糖类物质10-40重量份，蛋白胨5-15重量份，酵母膏 粉2-6重量份，牛肉霄粉5-15重量份，磷酸氢二钾1-3重量份，梓檬酸三铵1-3重量份，乙 酸钠2. 5-7. 5重量份，硫酸镁0. 1-0. 3重量份，硫酸锰0. 02-0. 06重量份，吐温-800. 5-1. 5 重量份，可溶性淀粉〇. 5-1. 5重量份，产酸代谢促进因子0. 2-2重量份，未受污染的样品过 滤清液100-500重量份，补加蒸馏水至1000重量份，加热煮沸溶解，pH值调节为4-5. 5 ; (3) 分装灭菌：将所述培养基分装10重量份于试管中，灭菌条件为115°C，15min; (4) 将待测样品的原液接种于含有所述培养基的发酵管中，在30±1°C条件下培养2-5 天后，以乳酸计，根据发酵液总酸值增幅是否大于0. 20g/100mL，定性判断是否存在乳酸菌 污染风险。8.如权利要求1-4任一项所述的培养基在检测食品中难培养型乳酸菌的用途。
【专利摘要】本发明涉及一种用于检测食品中难培养型乳酸菌的培养基以及检测方法，所述培养基的配方为：糖类物质10-40重量份，蛋白胨5-15重量份，酵母膏粉2-6重量份，牛肉膏粉5-15重量份，磷酸氢二钾1-3重量份，柠檬酸三铵1-3重量份，乙酸钠2.5-7.5重量份，硫酸镁0.1-0.3重量份，硫酸锰0.02-0.06重量份，吐温-80？0.5-1.5重量份，可溶性淀粉0.5-1.5重量份，产酸代谢促进因子0.2-2重量份(七水合硫酸亚铁和/或六水合氯化镍)，未受污染的样品过滤清液100-500重量份，补加蒸馏水至1000重量份，pH值调节为4-5.5；本发明提供的培养基能够更好地模拟微生物实际生长环境，同时由于添加了代谢促进因子，能实现固体难培养型乳酸菌的快速培养，通过该培养基的培养发酵能够更加简便、快速地判断腐败乳酸菌是否存在，从而实现对食品中难培养型乳酸菌的快速检测。
【IPC分类】C12R1/225, C12Q1/04
【公开号】CN105296591
【申请号】CN201510837513
【发明人】章志超, 童星, 周其洋, 邹谋勇
【申请人】佛山市海天(高明)调味食品有限公司, 佛山市海天调味食品股份有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月26日