garviea)种子液按体积比为1 %的接种量接种于发酵培养基中发酵培养144h，培养温度为32°C，转速为240rpm ;所述发酵培养基的成分为:5wt%的脱脂乳，1?丨％的葡萄糖，余量为蒸馏水；
[0045](4)直投式凝乳酶制剂的制备:在步骤⑶的发酵培养基中加入2被％的海藻糖和0.lwt%的乳糖，冷冻干燥24h，即得所述直投式凝乳酶制剂，其凝乳酶活性为1440SU/g，(测定方法同实施例1)。
[0046]实施例4
[0047](1)格氏乳球菌的活化:将格氏乳球菌(Lactococcus garviea)接种于2%的琼脂-营养肉汤中进行活化，活化温度为28°C，时间为24h ;
[0048](2)格氏乳球菌种子液的制备:将活化后的格氏乳球菌(Lactococcus garviea)接种于M17培养基中培养12h，培养温度为28 °C，转速为240rpm，得到格氏乳球菌(Lactococcus garviea)种子液；
[0049](3)格氏乳球菌的发酵培养:将格氏乳球菌(Lactococcus garviea)种子液按体积比为1 %的接种量接种于发酵培养基中发酵培养144h，培养温度为32°C，转速为240rpm ;所述发酵培养基的成分为:5wt%的脱脂乳，lwt%的葡萄糖，2wt%蛋白胨，余量为蒸馏水；
[0050](4)直投式凝乳酶制剂的制备:在步骤(3)的发酵培养基中加入2被％的海藻糖和0.lwt%的乳糖，冷冻干燥24h，即得所述直投式凝乳酶制剂，其凝乳酶活性为1480SU/g，(测定方法同实施例1)。
[0051]实施例5
[0052](1)格氏乳球菌的活化:将格氏乳球菌(Lactococcus garviea)接种于2*1:%的琼脂-营养肉汤中进行活化，活化温度为28°C，时间为24h ;
[0053](2)格氏乳球菌种子液的制备:将活化后的格氏乳球菌(Lactococcus garviea)接种于M17培养基中培养12h，培养温度为28 °C，转速为240rpm，得到格氏乳球菌(Lactococcus garviea)种子液；
[0054](3)格氏乳球菌的发酵培养:将格氏乳球菌(Lactococcus garviea)种子液按体积比为1 %的接种量接种于发酵培养基中发酵培养144h，培养温度为32°C，转速为240rpm ;所述发酵培养基的成分为:20被％的脱脂乳，余量为蒸馏水；(4)直投式凝乳酶制剂的制备:在步骤(3)的发酵培养基中加入2wt%的海藻糖和0.^^%的乳糖，冷冻干燥24h，即得所述直投式凝乳酶制剂，其凝乳酶活性为1230SU/g，(测定方法同实施例1)。
[0055]实施例6
[0056]取实施例1的直投式凝乳酶制剂配置成10mg/mL的酶液，将适量酶液分别在20°C、25°C、30 °C、35 °C、45 °C、55 °C、65 °C、70 °C处理60min后，迅速取出在冰浴中降温，然后在35°C水浴中保持lOmin，以凝乳活力为指标测定凝乳酶在不同的温度条件下的稳定性。结果如图1所示(凝乳酶活性测定方法同实施例1)，经不同温度条件下处理过后的格氏乳球菌(Lactococcus garviea)的直投式凝乳酶制剂的凝乳酶活性变化不大，在1400SU/g?1565SU/g，当处理温度超过50°C后，凝乳酶活性才略有下降。因此格氏乳球菌(Lactococcusgarviea)的直投式凝乳酶制剂的凝乳酶具有较好的热稳定性。
[0057]实施例7
[0058]取实施例1的直投式凝乳酶制剂配置成10mg/mL的酶液，用浓度为0.lmol/L的NaOH溶液和0.lmol/L的HC1溶液将酶液的pH值分别调整为4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0，然后一起置于4°C避光保存24h后，再将酶液pH值调整至原酶液pH值，在35°C水浴中稳定lOmin后测定凝乳酶的凝乳时间(测定方法同实施例1)，以原酶液的凝乳时间为对照测定实施例1的直投式凝乳酶制剂的凝乳酶在不同的pH值条件的活力变化情况。结果如图2所示，经不同pH条件下处理过后的格氏乳球菌(Lactococcus garviea)的直投式凝乳酶制剂的凝乳酶活性变化不大，在1420SU/g?1565SU/g，当pH超过10以后，凝乳酶活性才略有下降。因此格氏乳球菌(Lactococcus garviea)的直投式凝乳酶制剂的凝乳酶具有较好的酸碱稳定性。
[0059]实施例8
[0060]取实施例中1中的直投式凝乳酶制剂lmg，添加于1L含2.5wt%|i糖的无菌纯牛奶中，4.5h后即获得淡酸、凝块细腻且较结实的甜凝乳食品。
[0061]以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0062]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【主权项】
1.一种直投式凝乳酶制剂的制备方法，其特征在于，直投式凝乳酶制剂由保藏编号为CCTCC Μ 2015633的格氏乳球菌(Lactococcus garviea)发酵培养制备得到，包括以下步骤: (1)格氏乳球菌的活化:将格氏乳球菌(Lactococcusgarviea)在琼脂-营养肉汤斜面培养基上活化； (2)格氏乳球菌种子液的制备:将活化后的格氏乳球菌(Lactococcusgarviea)接种于培养基中进行培养，得格氏乳球菌(Lactococcus garviea)种子液； (3)格氏乳球菌的发酵培养:将格氏乳球菌(Lactococcusgarviea)种子液接种于发酵培养基中进行发酵培养； (4)直投式凝乳酶制剂的制备:在步骤(3)的发酵培养基中加入糖类保护剂，冷冻干燥，即得直投式凝乳酶制剂。2.根据权利要求1所述的直投式凝乳酶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的发酵培养基的成分为:5?30wt%的脱脂乳，0?5被％的葡萄糖、乳糖、果糖或蔗糖，0?5wt %的酵母粉、蛋白胨、氯化钱或硫酸钱，余量为蒸馈水。3.根据权利要求2所述的直投式凝乳酶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述的发酵培养基的成分为:10wt%的脱脂乳，lwt%的葡萄糖，2被％的蛋白胨，余量为蒸馏水。4.根据权利要求1-3任一项所述的直投式凝乳酶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述琼脂-营养肉汤斜面培养基中琼脂的含量为2wt%，活化时间为20h?50h，温度为25°C?48°C。5.根据权利要求1-3任一项所述的直投式凝乳酶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述培养基为M17培养基，培养温度为28°C?48°C，培养时间为10h?50h，转速为lOOrpm ?280rpm。6.根据权利要求1-3任一项所述的直投式凝乳酶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)将格氏乳球菌(Lactococcusgarviea)种子液按体积比为1%?10%的接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养，发酵培养的温度为28°C?48°C，时间为24h?156h，转速为lOOrpm ?280rpm。7.根据权利要求6所述的直投式凝乳酶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)将格氏乳球菌(Lactococcus garviea)种子液按体积比为1 %的接种量接种到发酵培养基中进行发酵培养，发酵培养的温度为28°C，时间为144h，转速为240rpm。8.根据权利要求1-3任一项所述的直投式凝乳酶制剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述加入糖类保护剂为加入0.5?5wt%的海藻糖和/或0.5?5wt%的乳糖，冷冻干燥的时间为20h?28h。9.一种直投式凝乳酶制剂，其特征在于，由权利要求1-8任一项所述的制备方法制备而得。10.权利要求9所述的直投式凝乳酶制剂在制备发酵乳制品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种直投式凝乳酶制剂的制备方法，所述直投式凝乳酶制剂由保藏编号为CCTCC？M？2015633的格氏乳球菌(Lactococcus？garviea)发酵培养制备得到，包括格氏乳球菌(Lactococcus？garviea)的活化、种子液的制备、发酵培养以及直投式凝乳酶制剂的制备的步骤。该方法制备得到的直投式凝乳酶制剂活性高(1230SU/g以上)、稳定性好，制备过程简单、成本低。本发明的直投式凝乳酶制剂可用于制备发酵乳制品。CCTCC NO:M 201563320151022
【IPC分类】C12R1/46, A23C9/12, C12N9/52
【公开号】CN105400759
【申请号】CN201510969828
【发明人】司朝利, 廖振林, 赖学能
【申请人】广州市康优元生物科技有限公司
【公开日】2016年3月16日
【申请日】2015年12月18日