18. 10
[0125]计算得：η=1
[0126] 因此所制得的达比加群酯香草酸盐的分子结构式为：
[0127]
[0128] 稳定性试验：
[0129] 发明人对实施例1的达比加群酯香草酸盐和达比加群酯甲磺酸盐在不同温度、湿 度和光照条件下进行观察并作含量测定，数据见表2和表3。
[0130] 液相条件：
[0131]色谱柱：AgelaVenusilMPC18 柱（4. 6mmX250mm，5ym)N0:VA952505-0
[0132] 流动相：0.Olmol·L1磷酸氢二铵缓冲液-甲醇（40:60);
[0133]流速：1ml·min1 ;检测波长：250nm;柱温：25°C;进样量：20μ1
[0134] 表2达比加群酯香草酸盐及达比加群酯甲磺酸盐的含量变化
[0135]
[0136] 表2为达比加群酯香草酸盐及甲磺酸盐的含量经影响因素试验结果的对比。数据 表明，在相同条件下（高温、高湿、光照），前者的含量随时间变化很小，属于测定误差范围， 而后者在高湿条件下很不稳定，尤其在10天高湿条件下会降解为50%左右，表现出明显的 不稳定性。
[0137] 表3达比加群酯香草酸盐及达比加群酯甲磺酸盐的外观变化
[0138]
[0139] 从表3可知，高温条件下，达比加群酯香草酸盐几乎无变化，而达比加群酯甲磺酸 盐可以观察到颜色随时间产生明显变化。高湿条件下，前者的外观几乎不变，表现出更加稳 定的性质，而后者则吸潮严重。
[0140] 实施例7
[0141] 本实施例用于说明达比加群酯甲磺酸盐与达比加群酯香草酸盐的抗凝血作用对 比研究。
[0142] 对3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）_苯氨基]-甲基}-1_甲基-1H 苯并咪唑-5-羰基）-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐（实施例1制备得到） 与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）-苯氨基]-甲基}-1_甲基-1H苯并咪 唑-5-羰基）_吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐抗凝血作用对比研究。试验方法 如下：
[0143] 取体重为（20 ± 2)g健康的昆明种小鼠，随机分为3组，每组10只，雌雄各半，给药 方式为：
[0144] 空白组--给等体积生理盐水
[0145] 对照组--给药达比加群酯甲磺酸盐（1. 186mg/kg按活性物质计算）
[0146] 治疗组-给药达比加群酯香草酸盐（1. 186mg/kg按活性物质计算）
[0147] 在实验室中喂养2天后进行试验，对小鼠的灌胃体积为0. 25mL24h后用乙醚麻醉， 在距小鼠尾尖3cm处剪断，血液自然流出。用滤纸在小鼠尾尖轻轻蘸血，每分钟一次，直至 血液出现拉丝现象为止，这时血液出现有凝固状况，每次试验都以同样的拉丝现象为基准， 记录时间。测得结果如表4所示。
[0148] 表4抗凝血时间（均数土标准差，η= 10)
[0149]
[0150] 以上数据表明，本发明实施例1所示的3-[(2-{4_(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲 基）-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1Η苯并咪唑-5-羰基）_吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香 草酸盐的抗凝血对比评价数据优于3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）_苯氨 基]-甲基Μ-甲基-1Η苯并咪唑-5-羰基）-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐， 具有统计学意义。
[0151] 实施例8
[0152] 本实施例用于说明达比加群酯甲磺酸盐与达比加群酯香草酸盐的药代动力学对 比研究。
[0153] 对3- [ (2- {4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）-苯氨基]-甲基} -1-甲基-1Η 苯并咪唑-5-羰基）-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐（实施例1制备得到） 与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）-苯氨基]-甲基}-l-甲基-1H苯并咪 唑-5-羰基）-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐药代动力学对比研究。试验方法 如下：
[0154] 取体重为（200±20)g健康的SD大鼠，随机分为3组，每组10只，雌雄各半，给药 方式为：
[0155] 对照组-给药达比加群酯甲磺酸盐（〇. 945mg/kg按活性物质计算，该剂量是根 据徐叔云教授主编的《药理实验方法学》中人与动物体表面积比值剂量比计的，下同）
[0156] 治疗组--给药达比加群酯香草酸盐（0.945mg/g按活性物质计算）
[0157] 灌胃给药，给药后分别于10、15、25、35、45、60、120、180、240、360min尾静脉取血， 放置于4°C冰箱中储存，样品通过有机溶剂萃取，真空干燥，后溶解于二次蒸馏水中，进行 HPLC分析。测得结果如表5所示。
[0158]表 5
[0159]
[0160] 表5结果表明：本发明实施例1所示的3-[(2-{4_(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲 基）-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基）_吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙 酯-香草酸盐与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）-苯氨基]-甲基}-1_甲 基-1H苯并咪唑-5-羰基）-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐在体内的药代参数 值相似，无显著性差异（P>〇. 05)。
[0161] 实施例9
[0162] 本实施例用于说明达比加群酯甲磺酸盐与达比加群酯香草酸盐的急性毒性对比 结果。
[0163] 对3- [ (2- {4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）-苯氨基]-甲基} -1-甲基-1H 苯并咪唑-5-羰基）-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐（实施例1制备得到） 与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）-苯氨基]-甲基}-1_甲基-1H苯并咪 唑-5-羰基）_吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐急性毒性对比研究。试验方法如 下：
[0164] 采用SOOOmg.kg1作为固定给药剂量，CD-1小鼠，10只，雌雄各半，达比加群酯 甲磺酸盐给药组和达比加群酯香草酸盐给药组按2000mg.kg1的剂量口服给药，以0. 5% CMCNa(羧甲基纤维素钠）为空白溶媒对照组。每日观察动物的生存率和给药后14日内的 毒性反应。分别在第1、8、15日记录每只动物的体重（给药前平均体重为20.2±1.67g)。 所有动物于濒死前或第15日处死，并进行尸体剖检。主要结果如表6所示：
[0165] 表6急性毒性试验对比结果
[0166]
[0167]与溶媒对照组相比，甲磺酸盐给药组在观察期内动物出现自主活动降低，俯卧、呼 吸吃力、眼睑变小、坚毛等非特异性毒性反应，动物的尸检结果可见消化道，甲状腺，和胰腺 出血，动物死亡可能与出血相关。香草酸盐组在给药当天及给药后的14天观察期内动物运 动情况、眼睑指征、呼吸、皮毛、排泄物和分泌物等均未见明显异常。观察期结束，动物进行 大体剖检，动物的头部、体表、皮下及颈部检查均未见明显异常，所有脏器未见明显出血现 象，动物死因不明。
[0168] 以上数据表明，本发明实施例1所示的3-[(2-{4_(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲 基）-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基）_吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙 酯-香草酸盐的急性毒性对比评价数据明显优于3- [ (2- {4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲 基）-苯氨基]-甲基}-1-甲基-1H苯并咪唑-5-羰基）-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙 酯-甲磺酸盐。
[0169] 实施例10
[0170]本实施例用于说明达比加群酯甲磺酸盐与达比加群酯香草酸盐的3个月重复灌 胃给药的长期毒性对比结果。
[0171] 对3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）_苯氨基]-甲基}-1_甲基-1H 苯并咪唑-5-羰基）_吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-香草酸盐（实施例1制备得到） 与3-[(2-{4-(己氧基羰基氨基-亚氨基-甲基）-苯氨基]-甲基}-1_甲基-1H苯并咪 唑-5-羰基）-吡啶-2-基-氨基]-丙酸乙酯-甲磺酸盐3个月长期毒性对比研究。观察 连续3个月重复灌胃给药对大鼠产生的毒性作用，判断毒性的性质、程度、剂量反应关系和 可逆性，预测可能的毒性靶器官或靶组织。
[0172]试验方法如下：
[0173]达比加群酯甲磺酸盐及本发明的达比加群酯香草酸盐分别按0、10、40、160mg/kg的剂量设置给药组并口服给药，以〇. 5%CMCNa为空白溶媒对照组。每个给药组有大鼠24 只，雌雄各半；各给药组大鼠经灌胃给药，每周给药6天，每日给药1次，每日观察动物给药 后的异常反应，每周进行1次体重和进食量检查，给药前5周，每周中期增加一次体重测量； 给药3个月和药后恢复30天后，每组分别随机选择1/2的实验动物，雌雄各半，进行血液、 生化、电解质、凝血、大体剖检、脏器重量、组织病理学检查，各组检测结果分别与溶剂对照 组进行比较，综合分析供试品对大鼠各项检查指标的影响。
[0174]主要结果：①给药期间达比加群酯甲磺酸盐高剂量组死亡率（5/24)高于达比加 群酯香草酸盐组（1/24);②达比加群酯甲磺酸盐高剂量组大鼠体重和进食量与达比加群