中和试验中，III号表位置换抗体RV3A5对狂犬病毒CVS株和aG株均 具有较高的中和效价分别为779IU/ml、834IU/ml，与CR4098中和活性相近，RV4B8由于与狂 犬病毒糖蛋白结合活性偏低导致中和活性效价较低。抗体中和效应的实现依赖于多方面机 制共同作用，上述抗体针对狂犬病毒所展现出中和效率的差异可能与其所针对的抗原表位 的独特性及抗体自身针对抗原的亲和力密切相关。由于狂犬病毒基因型别较多，糖蛋白的 序列并不十分保守，使用针对单一中和抗原位点的单克隆抗体不能起到广谱安全的疗效。 将针对不同中和抗原位点的单克隆抗体联合起来制成单克隆抗体鸡尾酒，成为取代RIG作 为狂犬病暴露后预防的被动免疫制剂的最佳选择。研究报道由抗狂犬病毒糖蛋白抗体CR57 和CR4098构成的单克隆抗体鸡尾酒CL184在美国和印度完成了 I期临床，该临床结果表明 CL184安全有效，可取代RIG，用于暴露后预防。发明人曾通过Fab噬菌体抗体库成功地获得 11株抗狂犬病毒糖蛋白的人源Fab抗体，结合本发明成功改造的针对糖蛋白III号表位的新 型中和抗体RV3A5，均可以作为候选抗体，为我国具有自主知识产权的狂犬单克隆抗体鸡尾 酒配伍制剂的研发打下基础。
[0079]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。 [0080] 参考文献：
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【主权项】
1. 人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗体RV3A5，其特征在于，其轻链CDRl、CDR2和CDR3以 及重链⑶Rl XDR2和⑶R3的氨基酸序列为：2. 如权利要求1所述的中和性抗体RV3A5,其特征在于，其轻链可变区氨基酸序列和重 链可变区氨基酸序列分别如SEQ ID No: 1和SEQ ID No:2所示。3. 如权利要求2所述的中和性抗体RV3A5，其特征在于，其为单链抗体ScFv或全抗体免 疫球蛋白IgG。4. 编码权利要求1-3任一项所述中和性抗体RV3A5的基因。5. 如权利要求4所述的基因，其特征在于，编码轻链可变区的核苷酸序列和编码重链可 变区的核苷酸序列分别如SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示。6. 含有权利要求4或5所述基因的表达载体。7. 含有权利要求4或5所述基因的工程菌。8. 含有权利要求4或5所述基因的转基因细胞系。9. 权利要求1-3任一项所述中和性抗体RV3A5在制备预防或治疗狂犬病的药物或诊断 试剂中的应用。10. 含有权利要求1-3任一项所述中和性抗体RV3A5的药物或诊断试剂。
【专利摘要】本发明公开了一种人源抗狂犬病毒糖蛋白中和性抗体RV3A5，该抗体运用噬菌体抗体库技术筛选获得。本发明的抗体特异性识别狂犬病毒颗粒抗原，且均针对狂犬病毒糖蛋白G，与狂犬病毒具有明显的免疫荧光反应和酶联免疫反应，具有抗狂犬病毒感染的中和活性功能。可将本发明抗体制成预防和治疗狂犬病的特异性抗体药物，从而可在临床上用于预防和治疗由狂犬病毒引起的狂犬病。
【IPC分类】C12N15/13, C07K16/10, A61K39/42, A61P31/14
【公开号】CN105481979
【申请号】CN201610008891
【发明人】梁米芳, 孙丽娜, 李川, 李德新
【申请人】中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2016年1月7日