一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法
【专利摘要】本发明涉及一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，其是选取扇贝加工形成的新鲜漂烫液为原料，经减压浓缩，醇沉，离心，沉淀物干燥后制成粉末；粉末加入石油醚或丙酮进行脱脂处理，干燥，得到固体粉末加入蛋白水解酶进行酶解，灭酶；扇贝酶解液冷却至低温，离心，收集上清液超滤脱盐；截留液冷冻干燥，得扇贝糖蛋白干品。本发明的提取方法工艺合理，设备投入低，技术先进，操作可行，适合大规模工厂化生产。采用该方法提取分离的扇贝糖蛋白，经测定：多糖含量在10-20%，蛋白含量在50-60%。
【专利说明】一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及从其他海洋动物提取食用蛋白组合物，尤其是一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法。
【背景技术】
[0002]近年研究表明，海洋软体动物中糖蛋白具有肿瘤抑制作用，其中鲍鱼、虾夷扇贝、蝾螺的水提取液对移植性S18tl腹水型肿瘤均有强的抑制作用。特别是由海洋贝类中提取分离的糖蛋白具有较强的抗肿瘤活性，引起广泛关注。
[0003]扇贝，是我国沿海主要养殖贝类之一，世界上出产的扇贝共有60多个品种，我国约占一半。常见的扇贝养殖种类有柿孔扇贝、海湾扇贝和奸夷扇贝。目前，采用扇贝制取扇贝糖蛋白的工艺方法已有报道。例如，顾谦群等在《海洋科学》(1998年第五期)发表的“栉孔扇贝糖蛋白的制备及其抗肿瘤活性初步研究”，其工艺步骤如下:取鲜扇贝边，加10倍量热水煮提，过滤除渣；滤液喷雾干燥后得粉末状粗提物，4°C下保存；粗提物用适量水溶解，注入透析袋中透析，透析液通过DEAE-纤维素柱分离，收集洗脱液，浓缩后，再通过Sephadex G-100柱层析纯化，冷冻干燥得栉孔扇贝糖蛋白。该工艺存在原料成本高的不足。
[0004] 在实际生产中，扇贝除鲜销外，大多加工成干制品或罐头制品。在加工扇贝过程中，需要采用沸水对扇贝进行漂烫处理，因此，会产生大量扇贝漂烫液，如果对扇贝漂烫液不进行处理则造成极大的资源浪费和环境污染。据测定:每千克扇贝漂烫液中包含有蛋白质1.8~3.6g、多糖类物质5.5~7.5g、灰分1.5~3.5g以及少量维生素等。因此，如何加强对扇贝漂烫液的处理利用，已成为迫切需要解决的问题。
[0005]目前，还未见有利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的报道。
【发明内容】
[0006]为了克服现有技术中利用鲜扇贝边制取扇贝糖蛋白成本高及扇贝漂烫液不进行处理利用易造成环境污染和资源浪费的不足，本发明提供一种工序合理、技术先进、操作可行的利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法。
[0007]本发明解决其技术问题所采用的技术方案为:一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，其特征在于:经过下列工艺步骤:
(O原料选取与处理选取扇贝加工形成的新鲜漂烫液为原料，利用减压浓缩设备，浓缩至固形物含量在35%~40%，得浓缩液；
(2)醇沉将步骤(1)所得的浓缩液中加入浓度为90~95%乙醇溶液进行沉淀，至其终浓度为55%~65% ；
(3)离心将步骤(2)乙醇沉淀后的溶液送入离心机中，离心，收集沉淀；
(4)干燥将步骤(3)中所收入的沉淀干燥后，再利用粉碎机粉碎成粉末；
(5)脱脂将步骤(4)所得到的粉末加入石油醚或丙酮进行脱脂处理6~IOh;其中，所述的石油醚或丙酮的用量为粉末质量的4~8倍；脱脂后去除有机溶剂，收集固体物料，干燥，得脱脂后的固体粉末；
(6)酶解将步骤(5)中所得到的脱脂后的固体粉末置于酶解罐中，加入固体粉末质量20~45倍的纯净水，充分溶胀，加热至100°C保持20~30min，杀灭微生物；冷却至40~55°C，加入固体粉末质量3~8%。的蛋白水解酶，进行酶解2~5h ;其中，所述的蛋白水解酶为复合蛋白酶、风味酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶中的一种或两种以上的组合；酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20~30min，得扇贝酶解液；
(7)离心、超滤将(6)所得到的扇贝酶解液冷却至2~5°C，送入离心机中，离心，收集上清液；将上清液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；将截留液加入纯净水，再进行超滤3~4次，脱除截留液中盐分；
(8)干燥将步骤(7)中得到的脱盐后的截留液冷冻干燥，得扇贝糖蛋白干品。
[0008]本发明是选取扇贝加工形成的新鲜漂烫液为原料，经减压浓缩，醇沉，离心，沉淀物干燥后制成粉末；粉末加入石油醚或丙酮进行脱脂处理，干燥，得到固体粉末加入蛋白水解酶进行酶解，灭酶；扇贝酶解液冷却至低温，离心，收集上清液超滤脱盐；截留液冷冻干燥，得扇贝糖蛋白干品。本发明利用扇贝加工形成的漂烫液提取糖蛋白，其原料成本低；醇沉后采用石油醚或丙酮进行脱脂处理，其得物纯度高；且经蛋白水解酶进行酶解，一是增加提取物可溶解性及提高生物利用度；二是去除提取物中的蛋白类物质使提取糖蛋白类物质纯度更高；超滤采用3000Da的滤膜，其在脱盐的同时，去除酶解后溶液中的低聚肽和氨基酸类等物质。采用本发明的方法提取分离的扇贝糖蛋白，经测定:多糖含量在10-20%之间，蛋白含量在50-60%之间。经动物实验证实，其具有良好的辅助抗肿瘤活性。本发明的提取方法，其工艺合理，设备投入低，技术先进，操作可行，适合大规模工厂化生产。
【具体实施方式】
[0009]下面结合实施例对本发明做进一步说明。
[0010]实施例1
一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，经过下列工艺步骤:
(1)原料选取与处理选取扇贝加工形成的新鲜漂烫液为原料，利用减压浓缩设备，浓缩至固形物含量在37%，得浓缩液；
(2)醇沉将步骤(1)所得的浓缩液中加入浓度为93%乙醇溶液进行沉淀，至其终浓度为 60% ；
(3)离心将步骤(2)乙醇沉淀后的溶液送入三足式离心机，控制转速2000rpm，离心，收集沉淀；
(4)干燥将步骤(3)中所收入的沉淀干燥后，再利用粉碎机粉碎成粉末；
(5)脱脂将步骤(4)所得到的`粉末加入石油醚进行脱脂处理8h;其中，所述的石油醚的用量为粉末质量的6倍；脱脂后离心去除石油醚，收集固体物料，真空干燥，得脱脂后的固体粉末；
(6)酶解将步骤(5)中所得到的脱脂后的固体粉末置于酶解罐中，加入固体粉末质量30倍的纯净水，充分溶胀，加热至100°C保持25min，杀灭微生物；冷却至45°C，加入固体粉末质量6%。的复合蛋白水解酶,酶解Ih,然后加入固体粉末质量4%。的风味酶酶解2.5h ；酶解完毕后，加热至100°c保持灭酶25min，得扇贝酶解液；其中，复合蛋白水解酶、风味酶酶解均为市售产品；
(7)离心、超滤将(6)所得到的扇贝酶解液冷却至4°C，送入三足式离心机，控制转速2000rpm，离心，收集上清液；将上清液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；将截留液加入纯净水，再进行超滤3次，脱除截留液中盐分；
(8)干燥将步骤(7)中得到的脱盐后的截留液冷冻干燥；其中，料温控制在_22°C，板温控制在40°C，真空度控制在IOOPa ;得扇贝糖蛋白干品。
[0011 ] 本实施例所给出的利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，其工艺合理，设备投入低，技术先进，操作可行。其提取分离的扇贝糖蛋白，经测定:多糖含量在19.6%，蛋白含量在57.9%。经动物实验证实，其具有良好的辅助抗肿瘤活性。
[0012]实施例2
一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，经过下列工艺步骤:
(O原料选取与处理选取扇贝加工形成的新鲜漂烫液为原料，利用减压浓缩设备，浓缩至固形物含量在40%，得浓缩液；
(2)醇沉将步骤(1)所得的浓缩液中加入浓度为95%乙醇溶液进行沉淀，至其终浓度为 65% ；
(3)离心将步骤(2)乙醇沉淀后的溶液送入三足式离心机，控制转速1500rpm，离心，收集沉淀；
(4)干燥将步骤(3)中所收入的沉淀干燥后，再利用粉碎机粉碎成粉末；
(5)脱脂将步骤(4)所得到的 粉末加入丙酮进行脱脂处理IOh;其中，所述的丙酮的用量为粉末质量的4倍；脱脂后抽滤去除丙酮，收集固体物料，真空干燥，得脱脂后的固体粉末；
(6)酶解将步骤(5)中所得到的脱脂后的固体粉末置于酶解罐中，加入固体粉末质量45倍的纯净水，充分溶胀，加热至100°C保持30min，杀灭微生物；冷却至55°C，加入碱性蛋白酶40g水解2h，加入固体粉末质量8%。的碱性蛋白酶，酶解2h ;然后加入固体粉末质量3%。木瓜蛋白酶，酶解3h ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶30min，得扇贝酶解液；其中，碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶均为市售产品；
(7)离心、超滤将(6)所得到的扇贝酶解液冷却至2°C，送入三足式离心机中，控制转速1800rpm，离心，收集上清液；将上清液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；将截留液加入纯净水，再进行超滤4次，脱除截留液中盐分；
(8)干燥将步骤(7)中得到的脱盐后的截留液冷冻干燥；其中，控制料温_25°C，板温控制在50°C，真空度控制在120Pa ;得扇贝糖蛋白干品。
[0013]本实施例所给出的利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，其工艺合理，设备投入低，技术先进，操作可行。其提取分离的扇贝糖蛋白，经测定:多糖含量在16.9%，蛋白含量在55.4%。经动物实验证实，其具有良好的辅助抗肿瘤活性。
[0014]实施例3
一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，经过下列工艺步骤:
(O原料选取与处理选取扇贝加工形成的新鲜漂烫液为原料，利用减压浓缩设备，浓缩至固形物含量在35%，得浓缩液；(2)醇沉将步骤(1)所得的浓缩液中加入浓度为90%乙醇溶液进行沉淀，至其终浓度为 55% ；
(3)离心将步骤(2)乙醇沉淀后的溶液送入三足式离心机，控制转速1500rpm，离心，收集沉淀；
(4)干燥将步骤(3)中所收入的沉淀干燥后，再利用粉碎机粉碎成粉末；
(5)脱脂将步骤(4)所得到的粉末加入石油醚进行脱脂处理6h;其中，所述的石油醚的用量为粉末质量的8倍；脱脂后离心去除石油醚，收集固体物料，真空干燥，得脱脂后的固体粉末；
(6)酶解将步骤(5)中所得到的脱脂后的固体粉末置于酶解罐中，加入固体粉末质量20倍的纯净水，充分溶胀，加热至100°C保持20min，杀灭微生物；冷却至40°C，加入固体粉末质量3%。的风味酶，酶解1.5h ;然后加入固体粉末质量8%。的木瓜蛋白酶，酶解Ih ;酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20min，得扇贝酶解液；其中，风味酶、木瓜蛋白酶均为市
售产品；
(7)离心、超滤将(6)所得到的扇贝酶解液冷却至5°C，再送入三足式离心机中，控制转速2000rpm，离心，收集上清液；将上清液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；将截留液加入纯净水，再进行超滤3次，脱除截留液中盐分；
(8)干燥将步骤(7)中得到的脱盐后的截留液冷冻干燥；其中，料温_20°C，板温控制在30°C，真空度控制在90 ;控制得扇贝糖蛋白干品。
[0015]本实施例所给出的利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，其工艺合理，设备投入低，技术先进，操作可行。其提取分离的扇贝糖蛋白，经测定:多糖含量在18.3%，蛋白含量在57.2%。经动物实验证实，其具有良好的辅助抗肿瘤活性。
【权利要求】
1.一种利用扇贝漂烫液提取糖蛋白的方法，其特征在于:经过下列工艺步骤: (1)原料选取与处理选取扇贝加工形成的新鲜漂烫液为原料，利用减压浓缩设备，浓缩至固形物含量在35%~40%，得浓缩液； (2)醇沉将步骤(1)所得的浓缩液中加入浓度为90~95%乙醇溶液进行沉淀，至其终浓度为55%~65% ； (3)离心将步骤(2)乙醇沉淀后的溶液送入离心机中，离心，收集沉淀； (4)干燥将步骤(3)中所收入的沉淀干燥后，再利用粉碎机粉碎成粉末； (5)脱脂将步骤(4)所得到的粉末加入石油醚或丙酮进行脱脂处理6~IOh;其中，所述的石油醚或丙酮的用量为粉末质量的4~8倍；脱脂后去除有机溶剂，收集固体物料，干燥，得脱脂后的固体粉末； (6)酶解将步骤(5)中所得到的脱脂后的固体粉末置于酶解罐中，加入固体粉末质量20~45倍的纯净水，充分溶胀，加热至100°C保持20~30min，杀灭微生物；冷却至40~550C，加入固体粉末质量3~8%。的蛋白水解酶，进行酶解2~5h ;其中，所述的蛋白水解酶为复合蛋白酶、风味酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶中的一种或两种以上的组合；酶解完毕后，加热至100°C保持灭酶20~30min，得扇贝酶解液； (7)离心、超滤将(6)所得到的扇贝酶解液冷却至2~5°C，送入离心机中，离心，收集上清液；将上清液通过截留分子量为3000Da的滤膜进行超滤，收集截留液；将截留液加入纯净水，再进行超滤3~4次，脱除截留液中盐分； (8)干燥将步骤(7)中得到的脱盐后的截留液冷冻干燥，得扇贝糖蛋白干品。
【文档编号】C07K1/34GK103725740SQ201310649382
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月6日 优先权日:2013年12月6日
【发明者】袁文鹏, 刘昌衡, 张绵松, 胡炜, 孙永军, 孟秀梅, 王志伟, 鞠文明, 唐晓波, 毕春雨 申请人:山东好当家海洋发展股份有限公司, 山东省科学院生物研究所