一种治疗前列腺癌的贝壳杉烷型二萜类化合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从干燥的益智仁中分离得到的一种具有治疗 前列腺癌作用的贝壳杉烷型二萜类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 益智仁为姜科山姜属植物益智Alpinia oxyphyllaMiq.的干燥成熟果实，主要分 布于我国的广西、海南、广东等地。益智仁是药食同源常用中药之一，自古以来益智仁就作 为中医临床常用药材，在我国古代众多药物专著中均有记载，其性温，味辛，具有暖肾固精 缩尿，温脾止泻摄唾的功能。
[0003] 到目前为止，从益智仁中分离得到的化合物类型主要有倍半萜类、单萜类、二萜 类、二苯庚烷类、黄酮类、简单芳香族化合物及脂肪族化合物。倍半萜是益智仁中的特征化 学成分，其骨架类型以艾里莫酚烷、桉烷及杜松烷型倍半萜或降倍半萜为主，此外，尚有愈 创木烷、刺参酮及潷草烷型倍半萜。益智仁具有特异的香气，这是由于其中含有丰富的挥发 油，单萜是其挥发油的主要组成部分。
[0004] 近年来关于益智仁的药理作用研究主要集中在提取物和化学成分的神经保护、提 高学习记忆能力、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎、抗过敏及抗应激等方面。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种从干燥的益智仁中分离得到的一种具有治疗前列腺癌 作用的贝壳杉烷型二萜类化合物及其制备方法。
[0006] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0007] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将干燥的益智仁粉碎，用75 ~85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的 正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸 乙酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱10个柱体 积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸 膏用正相硅胶分离，依次用体积比为85 :1、40:1、20:1、12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和 5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反 相硅胶分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0010] 进一步地，步骤(a)中，用80%乙醇热回流提取，合并提取液。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物(I)和药学上可接受的载体。
[0013] 所述的化合物(I)在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。
[0014] 所述的药物组合物在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。
[0015] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0016] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0017] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0018] 图1为化合物(I)结构式；
[0019] 图2为化合物（I)理论ECD值与实验ECD值比较；
[0020] 图3为不同浓度化合物（I)作用72h后PC3和DU145存活率；
[0021]图4为10.0 mg/L化合物（I)作用不同时间后PC3和DU145存活率。
【具体实施方式】
[0022]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0023]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0024] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0025] 制备方法：（a)干燥的益智仁（10kg)粉碎，用80 %乙醇热回流提取（25L X 3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的正 丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(398g)和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏（163g); (c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用200-300目正相硅胶分离，依次用体积比为85:1(8个柱 体积）、40:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、12:1 (10个柱体积)和1:1 (5个柱体积）的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(49g)用200-300目正相硅胶进一步 分离，依次用体积比为20:1(8个柱体积）、12:1(10个柱体积)和5:1(5个柱体积）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2(25g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶 ODS-C18分离，用体积百分浓度为70 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集8~10个柱体积洗脱液， 洗脱液减压浓缩得到纯的化合物(I) (44mg)。
[0026] 结构确证:无色针状（甲醇）；册43頂3显示[1+他]+为111/2 415.1406，结合核磁特 征可得分子式为C2〇H24〇8，不饱和度为9。核磁共振氢谱数据δΗ(ρρηι，DMS0_d6，400MHz): H-1 (4.96，s)，H-3(4.47，s)，H-5(1.39，d，J = 3.3)，H-6(5.87，d，J = 3.3)，H-9(2.22，d，J = 10.6)，H-ll(3.45，m)，H-12(1.78，m)，H-12(1.56，m)，H-13(1.79，m)，H-14(3.84，m)，H-14 (2.62，m)，H-17(1.49，s)，H-18(1.01，s)，H-19(1.01，s)，H-20(4.73，d，J=9.2)，H-20 (4.19，(1，了 = 9.2)，6-0!1(4.57,8)，16-0!1(4.64,8);核磁共振碳谱数据6。(卯111，0130-(1 6， 100MHz):78.5(CH，1-C)，205.1(C，2-C)，94.6(CH，3-C)，32.3(C，4-C)，52.7(CH，5-C)，109.1 (CH，6-C)，171.2(C，7-C)，56.1(C，8-C)，44.0(CH，9-C)，31.1(C，10-C)，89.2(CH，11-C)， 33.8(CH2，12-C)，41.3(CH，13-C)，31.1(CH2，14-C)，211.9(C，15-C)，78.1(C，16-C)，19.0 (CH 3，17-C)，20 · 8(CH3，18-C)，28 · 3(CH3，19-C)，76 · 1 (CH2，20-C);碳原子标记参见图 1。IR光 谱显示3484和1718cm-1吸收带，表明该化合物含有羟基和内酯羰基。13C匪R和DEPT谱显示 20个碳信号，包括三个甲基，三个亚甲基（一个含氧亚甲基），七个次甲基（四个含氧次甲 基），七个季碳(一个含氧季碳，两个酮羰基碳以及一个内酯羰基碳）。此外，核磁和质谱数据 表明该化合物在C-3和C-6位上存在一个氧桥;HMBC谱中H-6 (δΗ5.87，d，J = 3.3Hz)，Me-18 (δ !11.〇1，8)与含氧次甲基0〇94.6);质子信号5!15.87((1，1 = 3.3!^)与(：-1(5〇78.5)，(：-1〇(3 C31.1)和 C-2O0C76.1)的相关性验证了上述的推论。HMBC 谱中 Η2-14(δΗ3·84，πι和 2.62，m)， !1-130!11.79，111)，!12-120!11.78，111和1.56，111)和]\^-17(5!11.49,8)与含氧季碳(：-160〇78.1) 的相关性表明C-16位上连有一个羟基。R0ESY谱中Η-11 (δΗ3.45，m)与Η-1 (δΗ4.96，s)，H-5 (δ !11.39，(1，了 = 3.3!^)和!1-1你0!13.84，111);]\^-17与!1-12〇(3!11.56，111)的相关性表明!1-1，!1-5 和Η-ll为β构型，Me-17为α构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和R0ESY谱，以及文献关于相关类型 核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实 验值基本一致(图2)。
[0027]实施例2:化合物（I)药理作用试验 [0028] 一、材料和仪器
[0029] 前列腺癌细胞株PC3(ArCC-CRL-1435)、前列腺癌细胞株DU145(ATCC-HTB-81)。化 合物⑴自制，HPLC归一化纯度大于98%，用二甲基亚矾(DMS0)配制成浓度为1.0g/L的储存 液备用。CCK-8试剂盒为日本同仁化学研究所产品。RPMI-1640培养基购自Gibco公司。胎牛 血清(FBS)购自Hyelone公司。青/链霉素为上海先锋药业产品。胰蛋白酶购自华美生物工程 公司。二甲基亚砜(DMS0)购自上海华舜生物工程公司。琼脂(Agarose)、二硫苏糖醇(DTT)、 苯甲基磺酞氟(PMSF)、四甲基乙二胺(TEMED)为Sigma公司产品。十二烷基磺酸钠(SDs)、三 氯甲基烷基甲烧(1'1^8)1'1^8-!1(31、1'1'；[1：01^-100为?1'0111683公司产品。丙稀酞胺、过硫酸钱 (AP)购于苏州化学试剂厂产品。
[0030] C02细胞培养箱(ShellLab)，倒置相差显微镜(Nikon)，超净工作台（苏州净化设备 厂），流式细胞仪（BD)，F0393