+。
[0060] 化合物 F((2R，3S，4S，5R，6S)-2-(羟甲基）-6-(((lS，4aR，7R，7aR)-7-甲 基-4-((苯基胺基）甲基）八氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三 醇）
[0061]
[0062] 化合物F为橘β油釈物，共令卜列狩T王：La厂D-bb.8 ° (Me0H)，c0.36); UV (MeOH) λ nax (log ε )以7 (4. 〇2)，296 (3· I8) nm ; IR (无溶剂）υ nax3362, 29似，16〇3, ΙδΟ 5,1317,1262,1071,957011^? NMR(CD30D)Sl.04(3H，d，J = 7.2Hz，10-CH3)，1.41(1H， m，Hb-7)，1· 72 (2H，m，H2-6)，1· 74 (1H，m，H-4)，1· 88 (1H，m，Ha-7)，2· 00 (1H，m，H-9)，2· 09 ( 1H，m，H-5)，2. 19 (1H，m，H-8)，2. 89 (1H，m，Hb-11)，3. 17 (1H，m，Ha-11)，3. 23 (1H，m)，3. 30 (2H，m)，3. 40 (1H，m)，3. 65 (1H，m，Hb-6，），3. 75 (2H，d，J = 9. 6Hz，H-3)，3. 88 (1H，d，J = 11. 6Hz，Ha-6，），4. 60 (1H，d，J = 8. 0Hz，H-l，），5. 21 (1H，d，J = 2. 4Hz，H-l)，6. 57 (1H，t，J =7.6Hz，H-4 " )，6.59(2H，d，J = 8.6Hz，H-2 " ，6 " )，7.07(2H，dd，J = 8. 6, 7. 6Hz，H-3，，5，）；13C NMR (CD30D) δ 19. 8 (10-CH3)，29. 8 (C-6)，33. 5 (C-7)，36. 1 (C-8 )，38. 2 (C-4)，39. 2 (C-5)，45. 2 (C-9)，46. 9 (C-l 1)，62. 9 (C-6' )，64. 3 (C-3)，71. 8 (C-4' )，75 .l(C-2, ),78.1(C-3, ),78.2(C-5, ), 96. 1 (C-l), 98. 6 (C-lr ),113.7(0-2^/6^),117.7 (C-4" ),130. 0(C-3" /5" ),150. 3 (C-l" );ES頂Sm/z :446. 27 [M+Na]+。
[0063] 化合物 G ((E) -4- ((IS, 4aS, 7R, 7aR) -7-甲基-1- (((2S, 3R, 4S, 5S, 6R) -3, 4, 5-三 羟基-6-(羟甲基）四氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-l，4a，5,6,7,7a-六氢环戊[c]哌 喃-4-基）丁 -3-烯-2-酮）
[0064]
[0065] 将化合物D、（2-氧丙基）磷酸二乙酯及叔丁醇锂溶于DMF中，加热至60°C反应12 小时后冷却至室温，以饱和NH4C1水溶液终止化学反应，并以乙酸乙酯萃取。收集有机层并 以硫酸镁除水后过滤浓缩，将浓缩物以柱层析法进行纯化而得到白色固体，将此白色固体 溶于甲醇中，在室温下逐滴加入甲醇钠。于室温下持续搅拌8小时并以TLC进行观察。反 应终了，移除溶剂并利用柱层析法进行纯化，以得到化合物G，其为白色固体。
[0066] 化合物G为白色固体，具有下列特性：? NMR(CD30D+CDC13) δ 7. 20 (d，J = 15. 5Hz, 1H), 6. 78 (s, 1H), 5. 68 (d, J = 15. 5Hz, 1H), 5. 47 (d, J = 1. 0Hz, 1H), 4. 66 (d, J = 8. OHz, 1H), 4. 22 (q, J = 7. OHz. 1H), 3. 89 (dd, J = 8. 0, 1. OHz, 1H), 3. 83 (q, J = 8. OHz, 1H ),3. 72-3. 64 (m, 2H), 3. 3 (s, 3H), 3. 19 (t, J = 8. OHz, 1H), 2. 44 (dd, J = 14. 5, 8. OHz, 1H) ，2. 34-2. 25 (m, 2H)，2. 15-2. 02 (m, 2H)，1. 86-1. 76 (m, 1H)，1. 59-1. 47 (m, 2H)，1. 08 (d, J = 8. OHz, 3H) · 13C NMR(CD30D+CDC13) δ 169. 9, 150. 0, 145. 8, 120. 4, 113. 3, 99. 5, 96. 1，78. 9, 77 ? 9, 74. 7, 71. 7, 68. 5, 62. 9, 44. 8, 37. 7, 34. 2, 31. 6, 26. 5, 16. 5. ESMS m/z: 423. 4 (M+23)+。
[0067] 化合物 H(3- ((IS, 4aS, 7R, 7aR) -7-甲基-1- (((2S, 3R, 4S, 5S, 6R) -3, 4, 5-三羟 基-6-(羟甲基）四氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-基） 丙烯酸（E)-甲酯）
[0068]
[0069] 将化合物D(110mg, 0. 21mmol)、磷酰基乙酸三甲酯（42mg, 0. 23mmol)及叔丁醇锂 (26mg，0. 32mmol)溶于DMF(5mL)中。加热至60°C反应12小时后冷却至室温。以饱和NH4C1 水溶液终止反应，并以乙酸乙酯萃取。收集有机层并以硫酸镁除水后浓缩过滤。将浓缩物 以柱层析法进行纯化而得到白色固体，将此白色固体溶于甲醇中，在室温下逐滴加入甲醇 钠（60mg，1. 1_〇1)。于室温下持续搅拌8小时并以TLC进行观察。待反应终了移除溶剂并 利用柱层析法进行纯化，以得到化合物H。
[0070] 化合物Η为白色固体，具有下列特性：? NMR(CDC13) δ 7. 02(d，J = 15. 6Hz, 1H), 6. 76(s, 1H), 5. 98(d, J = 15. 6Hz, 1H), 5. 31 (d, J = 3. 6Hz, 1H), 4. 65 (d, J =7. 6Hz, 1H), 3. 88-3. 71 (m, 2H), 3. 55-3. 41 (m, 2H), 3. 38-3. 23 (m, 2H), 2. 89-2. 75 (m ,1H), 2. 39-2. 23 (m, 1H), 2. 25 (s, 3H), 2. 10-2. 0 (m, 1H), 1. 82-1. 65 (m, 1H), 1. 60-1. 42 (m, 1H), 1.35-1. 16 (m，2H), 1.01 (d，J = 6. 8Hz，3H).13C NMR(CDC13) δ 198.8, 148.8, 143.2, 1 23. 3, 119. 6, 98. 4, 95. 6, 73. 1, 69. 7, 61. 6, 43. 3, 36. 1, 32. 8, 32. 4, 30. 7, 29. 7, 27. 5, 16. 0. E SMS m/z :385. 1 (M+1)+。
[0071] 化合物 I((2R,3S,4S，5R，6S)-2-(羟甲基）-6-(((lS,4aR，7R，7aR)-7-甲 基-4-((对-甲苯基胺基）甲基）八氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌 喃-3, 4, 5-三醇）
[0072]
[0073] 化合物I为橘色液体，具有下列特性：[α
]'+44· 6 ° (MeOH，c 0· 5) ;UV(MeOH) λη·Μ(log ε )246(3. 87)，298(3. 10)nm ;IR(无溶剂）υηΜ 3390, 2928, 1616, 1520, 1454, 1 379,1317,1259,1020,960^11^? NMR(CD30D)Sl.04(3H，d，J = 7.2Hz，10-CH3)，1.41(1H ，m，Hb-7)，1· 72 (3H，m，H-4, H2-6)，1· 87 (1H，m，Ha-7)，2· 00 (1H，m，H-9)，2· 09 (1H，m，H-5)，2 ? 17 (3H，s，4 " -CH3)，2. 87 (1H，dd，J = 6. 8, 6. 9Hz，Hb-11)，3. 13 (1H，dd，J = 13. 2, 4. 0Hz ,Ha-11), 3. 23 (m, 1H), 3. 30 (m, 2H), 3. 40 (m, 1H), 3. 65 (1H, m, Hb-6 ' ), 3. 75 (2H, d, J = 9. 6Hz, H-3), 3. 88 (1H, d, J = 13. 2Hz, Ha-6r ), 4. 60 (1H, d, J = 8. 0Hz, H-lr ), 5. 21 (1H, d, J = 2.4Hz，H-l)，6.52(2H，d，J = 8.4Hz，H-2" ,6" )，6.90(2H，d，J = 8.4Hz，H-3" ,5" ) ;13C NMR (CD30D) δ 18. 8 (10-CH3)，20. 5 (4 " -CH3)，29. 8 (C-6)，33. 5 (C-7)，36. 1 (C-8)，38. 2 (C-4) ，39.2(C-5)，45.2(C-9)，47.3(C-ll)，62.7(C-3)，62.8(C-6,)，71.8(C-4 ,)，75.0(C-2'），-78.1(C-3, ),78.2(C-5, ), 96. 1 (C-l), 98. 6 (C-lr ),114.2(0-2^ /6;/ ),127.0(0-4^ ),1 30.5(C-3" /5" )，147.9(C-1" );ES頂Sm/z:460.14[M+Na] +。
[0074] 实施例一：化合物对于胰岛素分泌细胞BRIN-BD11的活性测试
[0075] 将BRIN-BD11细胞以胰蛋白酶处理并接种至24孔盘中。经一夜的附着后，以5. 6mM 葡萄糖的RPMI-1640培养液（含10%FBS)培养48小时。之后以KRBB缓冲液润洗，静置45 分钟后，以各种化合物（400 μ M)或乙酰化GLP-1 (10nM，作为对照组）以及5. 6mM或16. 7mM 葡萄糖的KRBB处理20分钟，时间终了时收集KRBB以便量测胰岛素含量，结果如图1及图 2所示，其中数据代表平均值土SEM(n = 8~12)，朴〈0.05、*扑〈0.01、#扑〈0.001，相较于 载体组（无）。
[0076] 实施例二：化合物与GLP-1受体的结合能力测试
[0077] 依照前人已发表文献准备人类GLP-1受体蛋白质的胞外区域（His标记的 GLP-1受体，17kDa，纯度95% )，将蛋白质、化合物A、乙酸钠及PBS溶液混合以制备NMR 样品，并进行WaterLOGSY(Water-Ligand Observed via Gradient SpectroscopY)测 试，测试流程详见：Dalvit 等人，（2001). WaterLOGSY as a method for primary NMR screening:practical aspects and range of applicability. Journal of biomolecular NMR 21，349-359 ;Dalvit 等人，（2000) .Identification of compounds with binding affinity to proteins via magnetization transfer from bulk water. Journal of biomolecular NMR 18,65-68。
[007