8] 由 WaterLOGSY NMR 光谱量测结果中，可发现在 δ H 5. 55 (H-l)、3. 36、3. 28 及 3. 13(为化合物A的糖质子H-2'~H-5'的吸收讯号）均有正向讯号，显示化合物A可与 GLP-1受体蛋白质的胞外区域产生作用。
[0079] 实施例三：化合物对于cAMP的影响
[0080] 将BRIN-BD11细胞以胰蛋白酶取下置于KRBB溶液中，种至384孔盘，每孔密度为 4000个细胞/10 μ 1，之后再加入相同体积、内含IBMX(lmM)的化合物Α(200 μΜ、400 μΜ、 800 μΜ)，静置于37°C下培养60分钟。之后，加入10μ1的HTRF cAMP dynamic 2套组 (Cisbio, Bedford, USA)的试剂至每孔之中，在室温下静置一个小时。另依照套组说明书制 备标准品。最后，利用SpectraMax M5系统（Molecular Device)中预设的程式，读取微量 多孔盘中的样品及标准品，结果如图3所示，其中数据代表平均值土SEM(n = 3)，*P〈0. 05， 相较于载体组（〇)。
[0081 ] 实施例四：化合物于去敏化条件下对于胰岛素分泌细胞BRIN-BD11的活性测试
[0082] 根据前人已发表的去敏化作用（Green et. al (2〇〇1)· Function of a long-te rm, GLP-1-treated, insulin-secreting cell line is improved by preventing DPP IV-mediated degradation of GLP-1. Diabetes, obesity &metabolism 7, 563-569)，利用 乙酰化GLP-1对GLP-1的作用进行去敏化，之后再于GLP-1受体拮抗剂（exendin 9-39)存 在和不存在的条件下加入化合物A进行刺激，以评估不同条件下的胰岛素分泌状况，结果 如图4A至图4C所示。
[0083] 实施例五：化合物对于第二型糖尿病小鼠（db/db mice)的疗效
[0084] 以瘦素受体（leptin receptor)突变的 05713]^(3/]-1^口<111同型合子（db/db)小鼠 做为实验组，将空腹血糖大于400mg/dl、葡萄糖耐受性不良的12周龄db/db小鼠分成三组， 另一方面将同龄的C57BLKS/J-Lep db/+异型合子（db/m)小鼠作为无糖尿病的对照组。每组 以口服的方式分别给予蒸馏水（dH20)、150mg/kg化合物A或300mg/kg化合物A，为期4周。 结束之后，测量下列生理参数：(A)体重、（B)每日摄食量、（C)空腹血糖值、（D)糖化血红蛋 白百分比（HbAlc% )、（E) 口服葡萄糖耐受性测试（0GTT)、（F)血清三酸甘油酯及（G)血清 总胆固醇，结果如图5A至图5G所示。
[0085] 实施例六：化合物对于糖尿病小鼠的疗效
[0086] 经过4周施予蒸馏水或不同浓度的化合物A(150mg/kg、300mg/kg)后，收集各组 db/db小鼠的空腹血清样本，量测其胰岛素浓度。以下式计算胰岛素阻抗指数（H0MA-IR): 胰岛素（μυ/ml) X葡萄糖（mM)/22. 5 ;并以下式计算β细胞功能指数（Η0ΜΑ-Β% ) :20X 胰岛素（yU/ml)/[葡萄糖5]，结果如图6A、图6B所示。
[0087] 据此，于前述说明中，发明人已充分描述关于特定实施例及实例的概念。然应了解 的是，本领域具有通常知识的技术人员可在不偏离权利要求的范畴下进行各种变化、改变 及修饰。因此，于解读权利要求时，应将本发明的说明以说明性而非限制性的方式作为参 考，且前述各种变化、改变及修饰均应涵盖于本发明的范围内。
[0088] 此外，本文所述各实施例中的某些特征，亦可以组合的方式于单独实施例中加以 提供，且各别实施例亦可分别提供或以任何次组合的方式提供之。此外，范围内描述的相关 数值应包括所述范围内的每个数值。
【主权项】
1. 一种式（I)化合物或其医药上可接受的盐类、酯类或立体异构物： 其中，札为c 醛基；C 羧基；C 6-(；。芳基胺基C 烷基，其中该芳基视情况经一或多个 羟基、Ci-Q烷基或C 烷氧基取代；C「C6烷基羰基乙烯基或C 烷氧基羰基乙烯基； R2为哌喃葡萄糖基或Η ; 为单键或双键；且 其中，式（I)化合物不包括： (IS, 4aS，7R，7aR) -7-甲基-1- (((2S，3R，4S，5S，6R) -3, 4, 5-三羟基-6-(羟甲基）四 氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-醛； (IS, 4aS，7R，7aR) -7-甲基-1- (((2S，3R，4S，5S，6R) -3, 4, 5-三羟基-6-(羟甲基）四 氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a, 5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-羧酸；及 (4aS，7R，7aR)-7-甲基八氢环戊[c]哌喃-4-羧酸。2. 如权利要求1的式（I)化合物或其医药上可接受的盐类、酯类或立体异构物，其中 札为C 醛基；C 羧基；苯基胺基C 烷基，其中苯基视情况经一或多个C 烷基或 烷氧基取代；C i-C3烷基羰基乙烯基或C i-C3烷氧基羰基乙烯基。3. 如权利要求1的式（I)化合物或其医药上可接受的盐类、酯类或立体异构物，其选自 以下任一种： (2R，3S，4S，5R，6S) -2-(乙酰氧基甲基）-6- (((IS, 4aS，7R，7aR) -4-甲酰基-7-甲 基-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三基三乙 醋； (2R，3S，4S，5R，6S) -2-(羟甲基）-6- (((IS, 4aR，7R，7aR) -4- (((4-甲氧基苯基）胺基） 甲基）-7-甲基八氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三醇； (2R，3S，4S，5R，6S) -2-(羟甲基）-6- (((1S，4aR，7R，7aR) -7-甲基-4-((苯基胺基）甲 基）八氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三醇； (E) -4- ((IS, 4aS, 7R, 7aR) -7-甲基-1- (((2S, 3R, 4S, 5S, 6R) -3, 4, 5-三羟基-6-(羟 甲基）四氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-基） 丁 -3-烯-2-酮； 3- ((IS, 4aS，7R，7aR) -7-甲基-1- (((2S，3R，4S，5S，6R) -3, 4, 5-三羟基-6-(羟甲基） 四氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-基）丙烯酸（E)-甲 酯；及 (2R，3S，4S，5R，6S) -2-(羟甲基）-6- (((1S，4aR，7R，7aR) -7-甲基-4-((对-甲苯基胺 基）甲基）八氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三醇。4. 一种医药组合物，其包括如权利要求1至3中任一项的化合物或其医药上可接受的 盐类、酯类或立体异构物，及医药上可接受的载体。5. -种式（I)化合物或其医药上可接受的盐类、酯类或立体异构物的用途，其用于制 备治疗受GLP-1受体调控的相关疾病的药物： 其中，札为C 醛基；C 羧基；C 6-(；。芳基胺基C 烷基，其中该芳基视情况经一或多个 羟基、烷基或C 烷氧基取代；C「C6烷基羰基乙烯基或C 烷氧基羰基乙烯基； R2为哌喃葡萄糖基或Η ; =为单键或双键。6. 如权利要求5的用途，其中该相关疾病选自以下至少一种：糖尿病、肥胖症、代谢症 候群、心血管疾病及神经退化性疾病。7. 如权利要求5的用途，其中该相关疾病选自以下至少一种：空腹高血糖、葡萄糖耐受 性不良、血脂异常、糖尿病视网膜病变、糖尿病肾病变、糖尿病神经病变、脂肪肝、动脉粥样 硬化、慢性心脏衰竭、阿兹海默症及帕金森氏症。8. 如权利要求5的用途，其中该（I)化合物或其医药上可接受的盐类、酯类或立体异构 物选自： (IS, 4aS，7R，7aR) -7-甲基-1- (((2S，3R，4S，5S，6R) -3, 4, 5-三羟基-6-(羟甲基）四 氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-醛； (IS, 4aS，7R，7aR) -7-甲基-1- (((2S，3R，4S，5S，6R) -3, 4, 5-三羟基-6-(羟甲基）四 氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a, 5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-羧酸； (4aS，7R，7aR)-7-甲基八氢环戊[c]哌喃-4-羧酸； (2R，3S，4S，5R，6S) -2-(乙酰氧基甲基）-6- (((IS, 4aS，7R，7aR) -4-甲酰基-7-甲 基-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三基三乙 醋； (2R，3S，4S，5R，6S) -2-(羟甲基）-6- (((IS, 4aR，7R，7aR) -4- (((4-甲氧基苯基）胺基） 甲基）-7-甲基八氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三醇； (2R，3S，4S，5R，6S) -2-(羟甲基）-6- (((1S，4aR，7R，7aR) -7-甲基-4-((苯基胺基）甲 基）八氢环戊[C]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三醇； (E) -4- ((IS, 4aS, 7R, 7aR) -7-甲基-1- (((2S, 3R, 4S, 5S, 6R) -3, 4, 5-三羟基-6-(羟 甲基）四氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-基） 丁 -3-烯-2-酮； 3- ((IS, 4aS，7R，7aR) -7-甲基-1- (((2S，3R，4S，5S，6R) -3, 4, 5-三羟基-6-(羟甲基） 四氢-2H-哌喃-2-基）氧基）-1，4a，5, 6, 7, 7a-六氢环戊[c]哌喃-4-基）丙烯酸（E)-甲 酯；及 (2R，3S，4S，5R，6S) -2-(羟甲基）-6- (((1S，4aR，7R，7aR) -7-甲基-4-((对-甲苯基胺 基）甲基）八氢环戊[c]哌喃-1-基）氧基）四氢-2H-哌喃-3, 4, 5-三醇。
【专利摘要】本发明关于一种式(I)化合物或其医药上可接受的盐类、酯类或立体异构物：其中，R1为C1-C6醛基；C1-C6羧基；C6-C10芳基胺基C1-C6烷基，其中该芳基视情况经一或多个羟基、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基取代；C1-C6烷基羰基乙烯基或C1-C6烷氧基羰基乙烯基；R2为哌喃葡萄糖基或H；为单键或双键。该式(I)化合物或其医药上可接受的盐类、酯类或立体异构物可用于制备治疗受GLP-1受体调控的相关疾病的药物。
【IPC分类】A61P9/04, C07H17/04, A61P9/10, A61P3/04, A61P3/00, A61K31/352, A61P13/12, A61P3/10, A61P25/28, A61P25/16, A61K31/7048, A61P9/00, A61P27/02, C07D311/94, A61P1/16, A61P3/06, A61P25/00
【公开号】CN105622687
【申请号】CN201410584351
【发明人】刘慧康, 黄琤, 林丽纯, 李文泰, 蔡耿彰
【申请人】中国医药研究所
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2014年10月27日