一种用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基，所述培养基按照以下方法获得：一、将大豆成株风干叶片40～60g粉碎后加蒸馏水100～200mL浸泡6～10h，过滤备用；二、将新鲜马铃薯去皮，切块150～250g，加蒸馏水500～600mL，加热煮沸20～40min，双层纱布过滤；三、将步骤一中的大豆成株浸泡液加入到步骤二的滤汁中，然后加入葡萄糖15～25g，琼脂15～20g，蒸馏水补充至1000mL，分装入试管中，高压灭菌锅中灭菌，取出制成斜面，备用。本发明的培养基原料易得，配制方法简便，保藏时间长，稳定性好，保藏前后无明显差异，具有方法简单、生长速度快、存活率高、活性恢复快速、安全可靠等优点；而且采用本发明培养基保藏的大豆疫霉菌，大大降低了保藏成本，无需购买专用设备。
【专利说明】
一种用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基
技术领域
[0001]本发明是对大豆疫霉菌保藏方法的改良，涉及一种用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基。
【背景技术】
[0002]大豆疫霉根腐病是由大豆疫霉菌侵染引起的，是危害极其严重的、最具毁灭性的大豆病害之一，在大豆整个生育期均可造成危害，而且发生面积逐年增加，危害程度逐年加重，并造成严重的经济损失。目前比较有效的防治大豆疫霉根腐病的方法就是培育抗大豆疫霉根腐病品种，掌握大豆疫霉菌的毒力类型和大豆疫霉菌保藏方法是进行抗病育种的基础和前提。目前大豆疫霉菌保藏的培养基存在保藏时间短、存活率低、保存条件复杂的缺点，因此急需对保藏的培养基进行改良。
【发明内容】
[0003]为了解决现有大豆疫霉菌保藏的培养基存在保藏时间短、存活率低、保存条件复杂的缺点，本发明提供了一种用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基。
[0004]本发明所述目的是通过如下技术方案实现的:
[0005]—种用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基，按照以下方法获得:
[0006]一、将大豆成株风干叶片40?60g粉碎后加蒸馏水100?200mL浸泡6?1h，过滤备用；
[0007]二、将新鲜马铃薯去皮，切块150?250g，加蒸馏水500?600mL，加热煮沸20?40min，双层纱布过滤；
[0008]三、将步骤一中的大豆成株浸泡液加入到步骤二的滤汁中，然后加入葡萄糖15?25g，琼脂15?20g，蒸馏水补充至lOOOmL，分装入试管中，高压灭菌锅中灭菌，取出制成斜面，备用。
[0009]本发明具有如下优点:
[0010]1、本发明在培养基中加入了大豆成株风干叶粉浸提液，由于在新鲜的叶片上适宜大豆疫霉菌的发生和生长，因此该混合物是一种更有利于大豆疫霉菌生长的混合物；
[0011 ] 2、培养基的原料易得，配制方法简便；
[0012]3、本培养基中各组分具有协同作用，有效地延长了大豆疫霉菌在4°C条件下的保藏时间，一年内无退化或变异，达到了长期保藏的目的，具有保藏时间长、稳定性好、保藏前后无明显差异的优点，具有良好的应用前景；
[0013]4、具有方法简单、生长速度快、存活率高、活性恢复快速、安全可靠等优点；
[0014]5、采用本发明培养基保藏的大豆疫霉菌，大大降低了保藏成本，无需购买专用设备。
【具体实施方式】
[0015]实施例1:
[0016]本实施例提供的用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基按照以下方法获得:
[0017]一、将大豆成株风干叶片40g粉碎后加蒸馏水10mL浸泡6h，过滤备用；
[0018]二、将新鲜马铃薯去皮，切块150g，加蒸馏水500mL，放置在电磁炉中加热煮沸30min(注意火力的控制，可适当补水)，双层纱布过滤；
[0019]三、滤汁加大豆成株浸泡液，然后加入葡萄糖15g，琼脂15g，蒸馏水补充至lOOOmL，分装入试管中，高压灭菌锅中121°C下灭菌30min，取出制成斜面，备用。
[0020]将大豆疫霉菌菌种接种在本实施例的斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用牛皮纸包扎好，把试管放置在灭菌的塑料瓶中，并用真空栗把塑料瓶中的空气抽出达半真空状态，置于4 V冰箱中能保存一年。
[0021]实施例2:
[0022]本实施例与实施例1不同的是，用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基按照以下方法获得:
[0023]一、将大豆成株风干叶片50g粉碎后加蒸馏水150mL浸泡8h，过滤备用；
[0024]二、将新鲜马铃薯去皮，切块200g，加蒸馏水550mL，放置在电磁炉中加热煮沸30min(注意火力的控制，可适当补水)，双层纱布过滤；
[0025]三、滤汁加大豆成株浸泡液，然后加入葡萄糖20g，琼脂18g，蒸馏水补充至lOOOmL，分装入试管中，高压灭菌锅中121°C下灭菌30min，取出制成斜面，备用。
[0026]实施例3:
[0027]本实施例与实施例1不同的是，用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基按照以下方法获得:
[0028]一、将大豆成株风干叶片60g粉碎后加蒸馏水200mL浸泡10h，过滤备用；
[0029]二、将新鲜马铃薯去皮，切块250g，加蒸馏水600mL，放置在电磁炉中加热煮沸30min(注意火力的控制，可适当补水)，双层纱布过滤；
[0030]三、滤汁加大豆成株浸泡液，然后加入葡萄糖25g，琼脂20g，蒸馏水补充至lOOOmL，分装入试管中，高压灭菌锅中121°C下灭菌30min，取出制成斜面，备用。
【主权项】
1.一种用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基，其特征在于所述培养基按照以下方法获得: 一、将大豆成株风干叶片40?60g粉碎后加蒸馈水100?200mL浸泡6?1h，过滤备用； 二、将新鲜马铃薯去皮，切块150?250g，加蒸馏水500?600mL，加热煮沸20?40min，双层纱布过滤；三、将步骤一中的大豆成株浸泡液加入到步骤二的滤汁中，然后加入葡萄糖15?25g，琼脂15?20g，蒸馏水补充至lOOOmL，分装入试管中，高压灭菌锅中灭菌，取出制成斜面，备用。2.根据权利要求1所述的用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基，其特征在于所述灭菌温度为121°C，时间为30min。3.根据权利要求1所述的用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基，其特征在于所述培养基按照以下方法获得: 一、将大豆成株风干叶片40g粉碎后加蒸馏水10mL浸泡6h，过滤备用； 二、将新鲜马铃薯去皮，切块150g，加蒸馏水500mL，放置在电磁炉中加热煮沸30min，双层纱布过滤； 三、滤汁加大豆成株浸泡液，然后加入葡萄糖15g，琼脂15g，蒸馏水补充至1000mL，分装入试管中，高压灭菌锅中121°C下灭菌30min，取出制成斜面，备用。4.根据权利要求1所述的用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基，其特征在于所述培养基按照以下方法获得: 一、将大豆成株风干叶片50g粉碎后加蒸馏水150mL浸泡Sh，过滤备用； 二、将新鲜马铃薯去皮，切块200g，加蒸馏水550mL，放置在电磁炉中加热煮沸30min，双层纱布过滤； 三、滤汁加大豆成株浸泡液，然后加入葡萄糖20g，琼脂18g，蒸馏水补充至100mL，分装入试管中，高压灭菌锅中121°C下灭菌30min，取出制成斜面，备用。5.根据权利要求1所述的用于大豆疫霉菌保藏的改良培养基，其特征在于所述培养基按照以下方法获得: 一、将大豆成株风干叶片60g粉碎后加蒸馏水200mL浸泡1h，过滤备用； 二、将新鲜马铃薯去皮，切块250g，加蒸馏水600mL，放置在电磁炉中加热煮沸30min，双层纱布过滤； 三、滤汁加大豆成株浸泡液，然后加入葡萄糖25g，琼脂20g，蒸馏水补充至100mL，分装入试管中，高压灭菌锅中121°C下灭菌30min，取出制成斜面，备用。
【文档编号】C12R1/645GK105925485SQ201610537372
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年7月8日
【发明人】刘淑霞, 魏国江, 潘冬梅, 关向军, 郭永霞, 徐海军, 郭梦桥, 王晓飞, 肖宇, 杜春玉
【申请人】黑龙江省科学院大庆分院