含有5?氨基酮戊酸和3?羟基吡啶酮的树形化合物及其制备法和用图

含有5?氨基酮戊酸和3?羟基吡啶酮的树形化合物及其制备法和用图
【专利摘要】本发明公开了一种含有5?氨基酮戊酸和3?羟基吡啶?4?酮的树形化合物，其具有如下结构通式：通式中m≥3，n≥1。本发明还同时公开了上述树形化合物的制备方法及用途：可用于制备光动力学治疗药物，例如用于制备治疗基底细胞癌、鳞状细胞癌、皮肤癌、肺癌、尖锐湿疣、乳腺癌、口腔表皮样癌的光动力学治疗药物。
【专利说明】
含有5-氨基酬戊酸和3-哲基P比暗酬的树形化合物及其制备法 和用途
技术领域
[0001] 本发明属于化学制药领域，设及一类含有5-氨基酬戊酸(ALA)和3-径基化晚-4-酬 化P0)二种功能基的树形化合物及其制备方法和用途----作为光动力学疗法药物。
【背景技术】
[0002] 光动力学疗法(PDT)是二十世纪屯十年代末问世的一种针对(血管)增生性病变组 织的选择性治疗新技术，已成为世界肿瘤防治科学中最活跃的研究领域之一。PDT是W光、 光敏剂和氧的相互作用为基础的一种新的疾病治疗手段;将光敏剂(光动力治疗药物)输入 人体，在一定时间后，W特定波长的光照射肿瘤部位，通过一系列光化学和光生物学反应， 在分子氧的参与下，产生单态氧和/或自由基，氧化破坏组织和细胞中的各种生物大分子， 使肿瘤细胞发生不可逆的损伤，最终使细胞死亡，达到治疗目的。因此，光敏剂是影响光动 力治疗效果的关键所在。
[0003] ALA(即：艾拉）已被广泛用于光动力学疗法来治疗基底细胞癌、鱗状细胞癌、皮肤 癌、尖锐湿痛，且获得了较满意的治疗效果。ALA本身并没有光活性，它在体内通过血红素的 生物合成循环途径代谢，产生有活性的光敏剂原化嘟(缩写为化IX)。运个过程在快速分裂 的细胞，尤其癌细胞中发生得更为有效，因此ALA对正常的组织细胞的毒性较小。ALA的主要 缺点来自ALA本身的高亲水性，在生理pH条件下，ALA是两性离子，运严重影响了它通过细胞 膜的能力，限制了其被细胞吸收。为了解决运个问题，具有更好的脂溶性的ALA前药的到了 广泛的研究，如ALA的醋衍生物、肤衍生物等。ALA-PDT能否取得好的疗效，很大程度上取决 于细胞中由ALA产生的光敏剂化IX水平。而化IX在细胞中的积累除了主要与ALA浓度有关 夕h另一个关键的因素是亚铁馨合酶的活性，该酶能催化由ALA产生的化IX馨合亚铁离子， 使其转变成没有光活性的血红素，导致药物活性降低。因此降低细胞中亚铁馨合酶的活性 能够提高ALA-PDT的疗效。由于铁馨合剂能抑制亚铁馨合酶的活性，因此，铁馨合剂与ALA联 合使用能减少血红素的形成，从而有利于光敏剂巧IX在细胞中积累。已经证明ALA与铁馨合 剂(如:去铁胺、径基化晚酬二齿配体)配伍作用与单独使用ALA相比，能使细胞中化IX浓度 显著增加。
[0004] 树形大分子是一类由多官能基内核出发，向外重复生长，高度支化的Ξ维大分子。 自从二十世纪八十年代中期问世W来，一直受到化学家们的广泛关注。树形大分子作为药 物载体，不仅载药量高，而且能明显改善药代动力学、降低毒性、增强药效，因此具有广阔应 用前景。将ALA引入树形大分子化合物也已有报道，研究表明，与ALA相比，含有ALA的树形化 合物能显著增强细胞中化IX浓度。但关于对于同时含有ALA和铁馨合剂的树形大分子化合 物的研究则未见报道。

【发明内容】

[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种能显著提高5-氨基酬戊酸药效的含有5-氨 基酬戊酸和3-?基化晚酬的树形化合物及其制备方法和用途。
[0006] 为了解决上述技术问题，本发明提供一种含有5-氨基酬戊酸（即ALA)和3-径基化 晚-4-酬(即HP0)的树形化合物，其具有如下结构通式：
[0007]
旨式中 m>3，n>l。
[000引备注说明：树形大分子化合物是由内部的核屯、（Initiator core)，内部的多个支 化官能团（Interior)和外部的表面基团巧xterior)S部分组成。支化官能团连接在核屯、即 构成树形分子骨架，ALA和HP0即为表面基团。
[0009] 作为本发明的含有5-氨基酬戊酸（即ALA)和3-径基化晚-4-酬（即HP0)的树形化合 物的改进:5-氨基酬戊酸(即ALA)通过其簇基与树形分子骨架中的径基形成醋键连接。
[0010] 旨P，树形化合物含有多个ALA和册0结构单元，如为：
[0011]
[0012] 作为本发明的含有5-氨基酬戊酸（即ALA)和3-径基化晚-4-酬（即HP0)的树形化合 物的进一步改进，为W下任意一种化合物(即，为化合物1 Oa、20a、25a、29a、30a):
[0013]
[0014]
[0015] 备注说明：上述分子结构中用虚线框起来部分即为核屯、。10a和25a含3个ALA, 1个 HP0; 20a，29a 和 30a 各含 3 个 ALA，3 个HP0。
[0016] 本发明还同时提供了上述含有5-氨基酬戊酸（即ALA)和3-径基化晚-4-酬（即HP0) 的树形化合物的制备方法，依次包括W下步骤：
[0017] 1)、树形化合物10a的合成：
[0018] W甲硝基Ξ丙醇为起始原料，经乙酷化、硝基还原成氨基、与Boc-β-丙氨酸缩合、 脱去乙酷基、与化Z-ALA成醋(得到化合物7)、脱去Boc(得到化合物8)、与含簇基的ΗΡ0缩合、 最后用催化氨化脱去保护基得到树形化合物10a;
[0019] 2)、树形化合物20a的合成：
[0020] 经Fmoc-β-丙氨酸与胺12(甲氨基Ξ丙酸Ξ叔下醋)缩合、脱去叔下基、与含径基的 HP0缩合成醋、脱去Fmoc、与二簇酸18缩合(得到化合物19H)、再与化合物8缩合、最后用催化 氨化脱去保护基得到树形化合物20a;
[0021] 3)、树形化合物扣曰的合成：
[0022] WALA甲基醋为起始原料，经与化zA-苯丙氨酸缩合、将甲基醋水解、与化合物5缩 合成醋、脱去Boc、与含簇基的HK)缩合、最后用催化氨化脱去保护基得到树形化合物25a;
[0023] 4)、树形化合物29a的合成：
[0024] WALA甲基醋为起始原料，经与化zA-甲硫氨酸缩合、将甲基醋水解、与化合物5成 醋缩合、脱去Boc得到化合物28;化合物5与含簇基的HP0(16C)缩合、脱去Boc、与二簇酸18缩 合得到化合物19C;28与19C缩合、再用催化氨化脱去保护基得到树形化合物29a;
[0025] 5)、树形化合物30a的合成：
[0026] 19H与化合物28缩合、再用催化氨化脱去保护基得到树形化合物30a。
[0027] 本发明还同时提供了上述含有5-氨基酬戊酸（即ALA)和3-径基化晚-4-酬（即HP0) 的树形化合物的用途:用于制备光动力学治疗药物。特别是用于制备治疗基底细胞癌、鱗状 细胞癌、皮肤癌、肺癌、尖锐湿痛、乳腺癌、口腔表皮样癌的光动力学治疗药物。
[0028] 3-径基化晚酬是一类在医药领域有广泛应用前景的铁馨合剂，其二齿配体去铁酬 (Deferiprone)已在治疗地中海贫血等与铁过多相关的疾病中使用多年，本发明选择HFO作 为铁馨合剂。
[0029] 本发明的含有5-氨基酬戊酸和3-径基化晚酬的树形化合物具备如下技术优势：
[0030] 1、与ALA相比，运些树形化合物在Ξ种癌细胞(MCF-7、MCF-7R和KB细胞）中能产生 更高浓度的光敏剂原化嘟(Ppix)。如树形大分子化合物25a(浓度为50μΜ)与MCF-7、MCF-7R 和KB细胞培养4小时，产生的化IX浓度分别是ALA(浓度为50μΜ)的13.8、7.3和23.3倍;树形 大分子化合物30a(浓度为20μΜ)与MCF-7、MCF-7R和邸细胞培养4小时，产生的化IX浓度分别 是ALA(浓度为20μΜ)的56.5、31.4和22.4倍;树形大分子化合物30a(浓度为30μΜ)与KB细胞 培养4和24小时，产生的巧IX浓度分别是ALA(浓度为300μΜ)的1.3和2.4倍。
[0031] 2、对癌细胞的光毒性也比ALA强得多，如本发明的树形化合物与邸细胞培养4小时 后进行光照，其半致死量LDsq为2-15μΜ，而ALA的LDsq为195]iM。
[0032] 本发明的树形化合物的用法可参照ALA的使用法和用量，由于本发明的树形化合 物的活性高，因此用量亦可略微减少。
【附图说明】
[0033] 下面结合附图对本发明的【具体实施方式】作进一步详细说明。
[0034] 图1为树形化合物和ALA与Ξ种癌细胞培养4小时后产生的光敏剂化IX巧光强度， 由本发明实施例1-5得到的含ALA和HP0的树形化合物10a、20a、25a、29a和30a及ALA与KB、 MCF-7和MCF-7RS种癌细胞培养4小时后产生的原化嘟(PpIX)的巧光强度测定结果。
[00巧]图2是树形化合物在MCF-7R细胞中产生巧IX的动力学。10a、20a和25a的浓度为50μ mol/L，29a 和 30a 的浓度为 20 皿 ol/L。
[0036] 图3是树形化合物29a和30a在低浓度下和MCF-7细胞解育4小时和24后产的生巧IX 巧光强度。
[0037] 图4是ALA和ALA-HP0树形化合物和邸细胞在37°C下解化4小时，用蓝光照射后细胞 的存活率(实验结果通过Μ?Τ分析得到）。
[0038] 备注说明：图4A和4B是在两次不同时间做的实验结果。
【具体实施方式】
[0039] 实施例1、树形化合物10a的制备
[0040] 其合成路线如Scheme 1所示：
[0041]
[0042] 其具体制备方法，依次进行W下步骤：
[0043] Ξ(3-乙酷氧丙基）硝基甲烧（2):甲硝基Ξ丙醇（l)(10g，42mmol)溶于化晚 (50mL)，加入乙酸酢(25血），混合液在室溫揽拌18h。在反应液中加入50血水，揽拌30min，然 后浓缩至约一半的体积。残留液中加入二氯甲烧化CM，1 OOmL)，依次用5 %化2〇)3溶液巧OmL) 和水(50mL)洗涂。用无水硫酸钢干燥后，将溶液浓缩至干，得到油状产物2(14.2g，95 %产 率）</H NMR(CDCl3,270MHz)S:1.53(m，6H，30l2)，1.97(m，6H，3ai2)，2.02(s，9H，3C〇ai3)， 4.03(m，細，3CH2);ESI-MS:m/z 362([M+H] +)，384([M+Na] +)。
[0044] Ξ(3-乙酷氧丙基)硝基甲烧(3):化合物2(10g，27.7mmol)溶于乙醇（100血），加入 雷尼儀催化剂(2g)，在室溫下催化氨化24小时化2压力为30psi)。过滤除去催化剂，将滤液 在旋转蒸发仪上蒸干，得到油状产物3 (8.4g，94 %产率）。iH NMR(CDC13，270MHz) δ : 1.36 (m， 6H，3C出），1.57(m，6H，3C此），2.00(s，9H，3C0C曲），4.04(m，細，3CH2).ESI-MS:m/z 332([M+ 扣+ ),354( [M+化]+ )。
[0045] 化合物4::化合物3(lOg，30.2mmol)溶于四氨巧喃（THF，lOOmL)，加入Boc-β-丙氨 酸（6.8g，36mmol)，N，N'-二环己基碳二亚胺（DCC，6.8g，33mmol)，1-径基苯并Ξ挫化0化， 4.5,331111]1〇1)，和1-下基-3-甲基咪挫漠盐（[13111；[1]1化1'，6.6邑，3〇1]11]1〇1)。在氮气保护下，混合液 室溫揽拌24h。过滤除去沉淀，将滤液浓缩至干，得到油状残留物。将其溶于二氯甲烧 (80mL)，依此用5 % (质量％ )稀盐酸（50mL)、饱和碳酸氨钢溶液(50mL)和水(50mU洗涂。有 机层用无水硫酸钢干燥，浓缩，残留物硅胶柱层析分离纯化（乙酸乙醋/甲醇9:1(V/V))，收 集尺:为0.4的洗脱液，除去溶剂，得到产物4(12.4旨，82%产率）。1!1醒1?(〔0(：13,2701化）6: 1.29(m，6H，3Ol2)，1.36(s，9H，3ai3)，1.60(m，6H，3ai2)，2.01(s，9H，3C0ai3)，2.19(m，2H， C出），3.07(m，2H，CH2)，4.03(m，細，3CH2);ESI-MS:503([M+扣 + )，5化（[M+化] + )。
[0046] 化合物5:化合物4 (5g，9.96mmo 1)溶于甲醇(50mL)，用冰浴(0-4 °C)冷却，加入氨氧 化钢溶液(2M，lOOmL)，揽拌15分钟。溶液用Ambcrlilci'|IR12〇酸性离子交换树脂中和至抑7， 滤去树脂，将溶液浓缩得黄色固体5(3.46g，92 %产率）。iH NMR(CDC13，270MHz) δ : 1.29 (m， 6H，3C出），1.36(s，9H，3CH3)，1.55(m，細，3CH2)，2.21(m，2H，CH2)，3.07(m，2H，CH2)，3.33(m， 6H，3C出）；ESI-MS:377([M+H] + )，399([M+Na] + )。
[0047] 化合物7:将Cbz-ALA (6) (1 Ommo 1)和DCC (6.6mmo 1)溶于DCM (30mL) /N，N ' -二甲基甲 酷胺(DMF，lOmL)，混合液在氮气保护下于室溫揽拌50分钟。加入4-二甲胺基化晚（DMAP， 0.6mmol)，然后滴加化合物5(2mmol)的二氯甲烧（lOmL)溶液（1小时加完）。混合液在室溫继 续揽拌24小时。过滤除去沉淀，将滤液浓缩至干，得到残留物溶于二氯甲烧(80mL)，依此用 5 %稀盐酸(50mL)、饱和碳酸氨钢溶液(50mL)和水(50mL)洗涂。有机层用无水硫酸钢干燥， 浓缩，残留物硅胶柱层析分离纯化（乙酸乙醋/甲醇9:1，V/V)，收集Rf为0.38的洗脱液，除去 溶剂，得到黄色固体产物7 (产率36.5 % )。1h NMR(CDCb，270MHz) δ : 1.29 (m，6H，3C此），1.43 (s，9H，3CH3)，1.53(m，細，3CH2)，2.41(m，2H，CH2)，2.56(m，6H，CH2)，2.62(2m，6H，6CH2)，3.25 (m，2H，C出），4.02(2m，細，6CH2)，4.05(s，6H，3NCH2)，5.04(s，細，C出I?)，5.82(br，3H，3NH)， 5.94(br，2H，2NH)，7.28(m，l甜，Ph);ESI-MS:m8([M+扣 + )。
[004引 备注说明：Cbz-ALA可购自英国公司（QiemPharm Research LTD,UK)。
[0049] 化合物8:将化合物7(Ig，0.895mmol)溶于二氯甲烧（50mL)，加入5mL甲酸。混合液 在室溫揽拌18小时，浓缩至干，加入5mL甲苯，蒸干W除去残留甲酸，得到黄色固体SdIhNMR (CDCl3,270MHz)δ:1.28(m，6H，3C出），1.53(m，細，3CH2)，2.41(m，2H，C出），2.56(m，6H，CH2)， 2.62(2m，6H，6C此），3.25(m，2H，CH2)，4.02(2m，6H，6C此），4.05(s，細，3NC此），5.04(s，6H， C 出化），5.82(br，3H，3NH)，5.94(bs，2H，2NH)，7.28(m，l甜，Ph);ESI-MS:1018([M+扣 + )，1040 ([M+Na]")〇
[00加]化合物9:3-节氧基-2-乙基-佔-化喃-4-酬（5旨，22111111〇1)溶于乙醇（3〇111〇/水 (30mL)，加入8-氨基辛酸（8.5g，54mmo 1)和化ο田容液（2M，2mL)。混合液回流18小时，冷却至 室溫，用浓盐酸调节pH至1，然后浓缩至约一半体积，加入50mL水。溶液用乙酸洗涂（2 X 50血），水层用10M NaOH调节pH至6,用二氯甲烧萃取(3X50血）。合并有机层，用无水硫酸钢 干燥，过滤，滤液浓缩至干得到的残留物用乙酸乙醋重结晶得到黄色晶体9(6. lg，75%产 率）。4 NMR(CDCl3,270MHz)Sl.03(t，J = 7.5Hz，3H，CH3)，1.32(m，6H，CH2)，1.56(m，2H，CH2)， 1.66(m，2H，C出），2.57(q，J = 7.5Hz，2H，C出），3.64(t，J = 6.細z，2H，C出），3.74(t，J = 7.6Hz，2H，CH2)，5.28(s，2H，CH2)，6.43(dJ = 7.5Hz，lH，C5-H in pyridinone)，7.17(dJ = 7.甜z，lH，C6-H in pyridinone)，7.29-7.35(m，3H，Ph)，7.43(m，2H，Ph).ESI-MS:m/z 372 ([M+W + )。
[0051 ] 化合物10:将化合物9(0.50g，1.35mmol)溶于DCM/DMF(50mL，3:1)，在氮气保护下， 加入 00：(0.28邑，1.35111111〇1)，册化（0.18邑，1.35111111〇1)和化111山化八0.29邑，1.35111111〇1)，室溫揽 拌50分钟。滴加化合物8( 1.25g，1.3mmol)的DMF(5mL)溶液，1小时滴完。混合液室溫揽拌24 小时，过滤除去沉淀。滤液浓缩至干后溶于DCM(30mL)，依此用5%稀盐酸（20mL)、饱和碳酸 氨钢溶液(20mL)和水(20mL)洗涂。有机层用无水硫酸钢干燥，浓缩，残留物用硅胶柱层析分 离纯化化酸乙醋/甲醇9:1，V/V)，收集Rf为0.29的洗脱液，除去溶剂，得到产物10(0.86g， 产率 48%)</HNMR(CDCl3,270MHz)S:1.01(m，3H，Ol3)，1.23(m，8H，4ai2)，1.45(m，2H，ai2)， 1.60(m，細，3CH2)，1.82(m，6H，3C此），1.86(m，2H，CH2)，2.27(m，2H，CH2)，2.32(m，2H，CH2)， 2.53(m，2H，C出），2.55(q，J = 7.4Hz，細，3CH2)，3.35(m，2H，CH2)，3.72(m，細，3CH2)，4.00(m， 12H，3CH2and buried 3NC出），5.04(s,細，4C出曲），5.82(br，3H，3NH)，5.94(br，2H，2NH), 6.56((1，1 = 7.2，巧，化晚酬环中(：5寸），7.28(111，21山20助5自4口}1，1助5自化晚酬环中〔6寸）； ESI-MS:m/z 1371([M+H+])。
[0052] 树形化合物1 Oa:将化合物10 (0.5mmo 1)溶于甲醇/乙酸乙醋（50mL，1:4)，加入Pd/C (5 %，0.1 g)和氯化节(2.2mmol)。混合液在40psi的氨气中室溫揽拌10分钟。过滤除去催化 剂，滤液浓缩至干，得10a粗产物。用Agilent HPLC半制备柱（250mm X 10.0mm i . d.，C18，扣 m)进一步纯化。乙腊(含0.05%甲酸)和甲醇(含0.05%甲酸）用作流动相（12分钟内梯度比 0-40 %，流速为5mL/min)。产物的保留时间为4.3分钟。溶液浓缩后得到油状产物（纯度 95%，产率47%)。l歷MR(DMS0,270MHz)δ:0.93(t，J = 7.4Hz，3H，CH3)，1.17(m，細，4CH2)， 1.29(m，2H，Ol2)，1.46(m，6H，3ai2)，1.69(m，6H，3ai2)，1.79(m，2H，ai2)，2.04(m，2H，ai2)， 2.25(m，2H，CH2)，2.52(m，2H，CH2)，2.58(q，J = 7.4Hz，細，3CH2)，3.32(m，2H，C此），3.72(m， 6H，3Ol2)，3.97(m，12H，3CH2andburied3NCH2)，6.06(br，3H，3NH)，6.17(br，2H，2NH)，6.21 (d,J = 7.2,lH,C-5H in pyridinone), 7.64(br, 9H, SNHs"), 7.86(d J = 7.2,1H,C-6H in pyridinone)，16.73(s，IH，OH); 1化 NMRS:11.6，17.5，20.1，24.7，26.4，27.3，29.4，33.1， 44.6,48.3,53.1,59.1,61.4,108.3,114.2,120.2,134.6,143.1,171.6,172.3,172.7,and 203.1 .ESI-MS:m/z294( [M+3H]3+) ,879( [M+H+]) ,901 ([M+Na] + )。
[0053] 实施例2、树形化合物20a的制备 [0化4] 其合成路线如Scheme2所示：
[ο化5]
[0056] 其具体制备方法，依次进行W下步骤：
[0057] 化合物13:Fmoc-i3-丙氨酸（2.21g，7.1mmol) ,4-(2-(叔下氧幾基）乙基)-4-氨基庚 二酸二叔下酯（胺 12,3.35邑，8.5111111〇1)，册化（1.3邑，8.5111111〇1)，00：(1.71邑，8.5111111〇1)溶于无 水DMF(30mL)，混合液在室溫揽拌过夜。过滤，将滤液浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化 (乙酸乙醋/环己烧1:1，V/V)，收集Rf为0.42的洗脱液，除去溶剂，得到白色固体产物13 (4.64g，产率92%)。lHNMR(CDCl3,500MHz)δl.43(s，27H，CH3)，1.98(m，細，C也），2.21(m， 6H，CH2)，2.35(m，2H，CH2)，3.48(m，2H，Ol2)，4.21(m，lH，CH)，4.35(m，2H，CH2)，5.70(br，lH， NH)，6.05(s，lH，NH)，7.31(m，2H，Ar)，7.39(m，2H，Ar)，7.60(d，J=7.5Hz，2H，Ar)，7.75(d，J =7.甜z，2H，Ar) .ESI-MS:m/z 709( [M+扣+ )。
[005引化合物14:将化合物13 (2g)溶于96 %甲酸（1 OmL )，室溫揽拌24小时，将溶液蒸干， 定量地得到产物 15。4 NMR(DMS0-d6,500MHz)Sl.83(m，W，Ol2)，2.11(m，6H，ai2)，2.26(m， 2H，Ol2)，3.17(m，2H，CH2)，4.21(m，lH，CH)，4.25(m，2H，ai2)，7.22(m，lH，NH)，7.33(m，2H， Ar),7.41(m,2H,Ar),7.68(d J = 7.0Hz,2H,Ar),7.88(d J = 7.0Hz,2H,Ar),12.08(br,3H, COOH) .ESI-MS(负离子模式）:m/z 539([M-扣-)。
[0059]化合物15:制备方法与9相似。即，将化合物9的制备方法中的8-氨基辛酸改成6-氨 基已醇;其余同等于化合物9的制备法。1η NMR(CDCl3,400MHz)δl.03(t，J = 7.細z，3H，C出）， 1.30-1.44(m，4H，CH2)，1.56(m，2H，Ol2)，1.67(m，2H，CH2)，2.56(q，J = 7.6Hz，2H，CH2)，3.64 (t，J = 6.4Hz，2H，CH2)，3.75(t，J = 7.細z，2H，C出），5.26(s，2H，CH2)，6.41(d，J = 7.6Hz，lH， 化晚酬中 C5-H)，7.18(d，J = 7.6Hz，lH，化晚酬中C6-H)，7.27-7.35(m，3H，I?)，7.42(m，2H， Ph);ESI-MS:m/z 330([M+扣+ ),352([M+Na] + )。
[0060] 化合物16H:化合物14(Immo 1)氮气保护下溶于DCM(5mL)/DMF(5mL)，加入DCC (3.6mmo 1)，室溫揽拌40分钟，然后加入DMAP(0.3mmo 1)，和化合物15 (3.6mmo 1)。混合液在氮 气保护下室溫揽拌24小时。过滤，将滤液浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化（DCM/MeOH (9.5:0.5，V/V)，收集Rf为0.39的洗脱液，除去溶剂，得到无色油状物16H(产率42 % )。iH NMR (CDCl3,400MHz)Sl.01(t J = 7.4Hz，9H，C曲），1.28(m，12H，CH2)，1.55(m，細，C此），1.64(m， 細，C出），2.02(m,細，C此），2.26(m，6H，CH2)，2.46(m，2H，C此），2.57(q，J = 7.4Hz，細，C此）， 3.43(m，2H，CH2)，3.73(t，J = 7.1Hz，細，C此），3.99(t，J = 6.3Hz，細，C出），4.18(m，lH，CH)， 4.31(d J = 7.0Hz，2H，CH2)，5.26(s，細，C出），5.90(br，lH，NH)，6.40(dJ = 7.甜z，3H，C5-H in pyridinone) ,6.79(br, ΙΗ,ΝΗ), 7.16(d, J = 7.5Hz , 3H,C6-H in pyridinone), 7.28- 7.43(m，19H，Ar)，7.59(d J = 7.4Hz，2H，Ar)，7.74(d J = 7.4Hz，2H，Ar).ESI-MS:m/z 1474 ([M+扣+ ),738( [M+2H]2+) ,492( [M+3H]3+)。
[0061 ] 化合物17H:将化合物16H( 1.8g)溶于无水DMF( lOmL)，加入赃晚（0.25mL)。溶液室 溫揽拌20分钟，浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化(DCM/MeOH 3:1，V/V)，收集Rf为0.45的 洗脱液，除去溶剂，得到无色油状物17H(l.lg，产率72%)。4 NMR(CD3〇D，270MHz)Sl.〇9(t，J =7.細z，9H，C出），1.37(m，12H，C此），1.63(m，6H，CH2)，1.71(m，細，C出），2.01(m，6H，CH2)， 2.29(m，6H，CH2)，2.35(m，2H，C此），2.66(q，J = 7.細z，細，C此），2.88(m，2H，CH2)，3.98(m， 細，C出），4.06(m，細，C出），5.17(s,細，C出），6.49(dJ = 7.2Hz，3H，C5-H in pyridinone), 7.：M(m，9HJh)，7.41(m，6HJh)，7.70(d，J = 7.2Hz，3H，C6-Hinpyridinone).ESI-MS: 1252([M+扣+)。
[0062] 化合物18:β-丙氨酸乙基醋盐酸盐（10邑，65.1111111〇1)溶于冷却至1化°(：的饱和化肥〇3 溶液（150mL)，滴加对苯二甲酯氯（5g，24.6mmo 1)溶于二氯甲烧（125mL)和DMF( 25mL)的溶 液。在0°C继续揽拌化，然后室溫揽拌12h。用二氯甲烧（lOOmL)萃取，有机层用水(50mL)洗 涂，用无水MgSCk干燥。蒸去溶剂的白色化合物(6.38g，71 % y ie 1 d)。取1 g溶于甲醇（25mU， 冷却至0°C。加入2M化細溶液(9.50mL)。揽拌化，加入水(20mL) W使产生的沉淀溶解。溶液 用Amberlite IR-120(氨型）阳离子交换树脂中和，调节抑至2,过滤，将滤液完全蒸干，得白 色粉末 18(0.82g，97% 产率）.iHNMR(270MHz，DMS0-d6)S2.68(m，4H，CH2)，3.93(m，4H，2CH2), 7.96(s，4H，Ar)，8.99(t，J = 7.Wz，2H，NH);UCMffi(67.5MHz，DMS0-d6)S:38.6,41.35, 129.66，134.57，166.39，172.54.ESI-MS:m/z 309([M+H] + )。
[0063] 化合物 19H:将化合物 17H(2mmol)，DCC(2.2mmol)，H0Bt(2.2mmol)，[Bmim]Br (2.2mmo 1)和化合物18(2mmo 1)溶于无水DMF(1 OmL)，在0°C揽拌化，然后室溫揽拌24小时。过 滤除去沉淀，将滤液浓缩至干，残留物溶于DCM(40mL)，用水洗涂五次(20mLX5)。将溶液浓 缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化化tOAc/MeOH 4:1)，收集Rf为0.41的洗脱液，除去溶剂， 得到化合物 醒 R(CDCl3,270MHz) S〇.98(t, J = 7.2Hz, 9H，3CH3), 1.23-1.27(m，6H, 3CH2)，1.62-1.97(m，6H，3C出），2.00(m，細，3CH2)，2.22(m，細，3CH2)，2.22(m，2H，CH2)，2.36- 2.58(m，細，3CH2，m，4H，2CH2andq，J = 6.7Hz，細，3CH2)，3.39(m，2H，C出），3.56(m，4H，2CH2)， 3.64(m，4H，2Ol2)，3.79(m，6H，3ai2)，3.95(m，6H，3ai2)，4.10(m，2H，ai2)，5.17(s，6H， 3afeI%)，6.53(dJ = 7.2Hz，3H，C5-Hinpyridinone)，7.25-7.28(m，17H，3Phand2Hin Ar)，7.65(dJ = 7.2Hz，3H，C6-H in pyridinone)，7.77(m，2H，Ar);ESI-MS:m/zl542([M+H ]"),1564([M+Na]")〇
[0064] 化合物20:化合物19H(lmmol)在氮气保护下溶于四氨巧喃（THF)(6mL)，加入DCC (1. Immo 1)，册化（1. Immo 1)，[ Bmim] Br (1. Immo 1)和化合物8 (Immo 1)，混合液在0 °C 揽拌化， 然后室溫揽拌24小时。过滤除去沉淀，将滤液浓缩至干，残留物溶于DCM(30mL)，用水洗涂五 次（20mL X 5)。将溶液浓缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化化tOAc/MeOH 4:1)，收集Rf为 0.46的洗脱液，除去溶剂，得到化合物20，产率45% Mffi(CDCl3，270ΜΗζ)δ〇. 96(t，J = 7.7Hz，9H，3CH3)，1.27(m，12H，6CH2)，1.54-1.61(m，12H，4CH2)，1.97(m，細，3CH2)，2.21(m， 2H，ra2)，2.25(m，6H，3(^2)，2.33(m，4H，2ai2)，2.53(q，J = 7.2Hz，6H，3ai2)，3.61(m，6H， 3CH2)，3.72(m，細，3CH2)，3.94(m，細，3CH2)，5.10(s，細，3C出I?)，6.32(d，J = 7.4Hz，3H，C5- Hinpyridinone)，7.22-7.33(m，l甜，3曲andm，2H，I?)，7.36(d，J = 7.4Hz，J = 8.0Hz， 3H，C6-Hinpyridinone)，7.78(m，4H，Ar);MALDI-T0F:2542([M+H] + )，^64([M+Na] + );ESI- MS:m/z 1271([M+2H]^")〇
[0065] 树形化合物20a:将化合物20 (0.5mmo 1)溶于甲醇/乙酸乙醋（50mL，1:4)，加入Pd/C (5 %，0.1 g)和氯化节(3.3mmol)。混合液在40psi的氨气中室溫揽拌10分钟。过滤除去催化 剂，滤液浓缩得20a粗产物。用Agilent HPLC半制备柱(250mmX10.0mm i.d.，C18,5皿)进一 步纯化。乙腊和水(99:1，含0.05 %甲酸)和甲醇(含0.05%甲酸）用作流动相（15分钟内梯度 比0-30 % )。产物的保留时间为5.6分钟。溶液浓缩后得到油状产物(纯度95 %，产率34 % )。 1h 醒R(CD30D, 270MHz )δ :1.12( tj = 7.細 z，9H，3CH3)，1.33(m，12H，6C此），1.49-1.72(m, 12H，4afe)，2.01(m，6H，3ai2)，2.32(m，2H，CH2)，2.39(m，6H，3ai2)，2.41(m，4H，2ai2)，2.58 (q，J = 7.2Hz，細，3CH2)，3.61(m，6H，3C出），3.72(m，細，3CH2)，3.94(m，細，3CH2)，6.22(d，J = 7.4Hz,3H,C5-H in pyridinone) ,7.14(d,J = 8.0Hz,3H,C6-H in pyridinone),7.94(m, 4H，Ar); "C NMR(67.5MHz，CD3OD)δ : 11.4，22.7，26.8，30.7，33.4，：M.0，36.0，36.5，45.4， 52.6,57.2,61.4,65.2,66.4,68.2,117.3,126.6,128.6,130.2,137.4,142.4,146.4, 156.9,164.4,173.4,203.0.ESI-MS:m/z 624([M+3H]3+) ,1870( [M+H] + ),1892([M+Na] + ), 1908([M+K]")〇
[0066] 实施例3、树形化合物扣a的制备
[0067] 其合成路线如Scheme 3所示：
[006引
[0069] 其具体制备方法，依次进行W下步骤：
[0070] 化合物 21:N-Cbz-L-苯丙氨酸（lOmmol)，ALA 甲基醋盐酸盐（12mmol)，DCC (lOmmol) ,H0Bt( lOmmol)和[Bmim]B;r( lOmmol)溶于THF( lOOmL)。混合液在氮气保护下室溫 揽拌2小时，然后冷却至0°C。二异丙基乙基胺(DIPEA)(12mmol溶于10血THF)滴加到上述混 合液，室溫揽拌过夜。加入丙酬（lOOmL)，过滤除去沉淀，将滤液蒸干。残留物溶于二氯甲烧 (lOOmL)，依次用5%稀盐酸、饱和碳酸氨钢和水洗涂。用无水硫酸钢干燥，过滤，将滤液蒸干 得白色固体产物21。96%产率。lHNMR(CDCl3,270MHz)δ2.58(t，J = 7.0Hz，2H，CH2)，2.74(t， J = 7.0Hz，2H，Ol2)，3.14and3.47(m，2H，ai2)，3.84(s，3H，CH3)，3.98(s，2H，ai2)，4.36(m， lH，CH)，5.08(s，2H，Ol2)，6.71(br，lH，NH)，7.38-7.47(m，10H，Ph)，7.87(br，lH，NH);ESI- MS:m/z 427([M+H]") ο
[0071] 化合物22P:化合物21 (5mmol)溶于甲醇（20mL)，用冰浴冷却，加入2M Na0H(20mL)。 混合液继续揽拌30min，然后用浓盐酸中和至抑7,产物22P沉淀析出，加入40血水有更多沉 淀析出。过滤，将得到的固体在真空烘箱中烘干，得白色粉末22P。95 %产率。iH醒R(CDC13， 270MHz)S:2.78(m，4H，2CH2)，3.37and 3.49(m，2H，C也），4.07(s，2H，Ol2)，4.53(m，lH，CH)， 5.07(s，2H，Ol2)，6.72(br，lH，NH)，7.39-7.48(m，10H，Ph)，8.02(br，lH，NH)，12.3(br，lH C〇2H);ESI-MS:m/z 413([M+H]+)。
[0072] 化合物23:合成步骤与化合物7相似。即，将"化合物7的合成法"中的饥z-ALA换成 22P;将硅胶柱层析分离纯化的条件换成：展开剂为（乙酸乙醋/甲醇10:1，￥八），3:为0.42。 其余等同于化合物7的合成法。
[0073] 产率46.2%，1h NMR(CDCl3,270MHz)0.96(s，9H，3CH3)，1.32(m，細，3C也），1.54(m， 細，3CH2)，2.45(m，2H，CH2)，2.78(m，12H，6CH2)，3.37(m，細，3CH2)，3.49(m，2H，CH2)，3.98(S， 6H，3Ol2)，4.08(m，6H，3ai2)，4.45(m，3H，3CH)，5.09(s，6H，3ai2)，6.72(br，5H，5NH)，7.39- 7.48(m，30H，I%)，8.02(br,3H，3NH);ESI-MS: 1559([M+扣+ ),1581 ([M+Na] + )。
[0074] 化合物24:将化合物23(lg)溶于二氯甲烧(50mL)，加入5mL甲酸。混合液在室溫揽 拌18小时，浓缩至干，加入5mL甲苯，蒸干W除去残留甲酸，得到黄色固体24。iH NMR(CDC13， 270MHz)Sl.43(m，6H，3Ol2)，1.69(m，6H，3ai2)，2.61(m，2H，CH2)，2.72(m，12H，4ai2)，2.93 (m，2H，CH2)，3.37(m，3H，3CH)，3.49(m，3H，3CH)，4.27(s，細，3CH2)，4.53(m，3H，3CH)，5.09 (s,細，3CH2Ph)，6.72(br，5H，5NH) ,7.39-7.48(m，30H，C出曲 and Ph)，8.02(br，3H，3NH) .ESI-MS:m/z 1459([M+扣+)。
[0075] 化合物25:在氮气保护下，化合物9(0.5g，1.4mmol)，化合物24(1.61g，1. Immol)， DCC(0.22g，1. Immol)，册化（0.15g，1. Immol)和bmim(0.24g，1. Immol)中加入THF(50血），用 冰浴冷却。滴加 DI PEA (0.20mL，1. Immo 1溶于5mL THF)，混合液室溫揽拌过夜。加入丙酬 (lOOmL)，过滤除去沉淀，滤液在旋转蒸发仪中浓缩。将残留物溶于二氯甲烧(40mL)，依次用 5 %稀盐酸(3 X 30mL)、饱和碳酸氨钢(30mL)和水(30mL)洗涂。有机层用无水硫酸钢干燥，浓 缩，残留物用硅胶柱层析分离纯化（乙酸乙醋/甲醇9:1V/V)，收集Rf为0.45的洗脱液，除去 溶剂，得到产物25 (0.94g，产率47 % )。1h NMR(CDC13，270MHz): δ 1.05(t，J = 7.2Hz，3H，C出）， I. 36(m，6H，3C出），1.54-1.62(m，4H，2C此），1.78(m, 12H，6C此），2.12,（m，2H，Ol2)，2.57- 2.78(m，12H，6CH2and m，2H，CH2) ,2.84,（q，J = 7.4,2H，C出），3.21-3.39(m,細，3CH2) ,3.51- 3.69(m，4H，2C此），3.92，（m，細，3CH2)，4.01(s，細，3CH2)，4.16，（m，3H，3CH)，5.02，（m，6H， 3CH2),5.06,(s,2H,CH2),6.32,(d J = 7.4,1H,C5-H in pyridinone) ,6.68(br,3H,3NH), 7.26-7.89(m，36H，35hom7PhandlfromC6-Hinpyridinon)，7.86(br，5H，5NH);ESI- MS:1812([M+扣+)。
[0076] 化合物25a:合成步骤与化合物20a相似。即，将"化合物20a的合成法"中的20换成 25;即得25a粗产物。用Agilent HPLC半制备柱（250mm X 10.0mm i . d.，C18，5皿)进一步纯 化。乙腊和水(99:1，含0.05 %甲酸)和甲醇(含0.05 %甲酸)用作流动相（15分钟内梯度比0- 45 % )。产物的保留时间为6.7分钟。溶液浓缩后得到油状产物(纯度96 %，产率36 % )。2〇iH 醒R(CD30D, 270MHz )δ :1.07,（t，J = 7.2Hz，3H，C曲），1.37(m，6H，3C此），1.53-1.68(m，4H, 2C出），1.81 (m，12H，6C出），2.13,（m，2H，CH2) ,2.55-2.82(m，12H，6CH2and m，2H,CH2) ,2.87， (q, J = 7.4,2H，C出），3.22-3.41 (m,細，3CH2) ,3.52-3.71 (m，4H，2C此），4.02,（m，6H，3C此）， 4.11(s，6H，30l2)，4.18，（m，3H，3CH)，6.43(br，3H，3NH)，6.95，（d，J = 7.4，lH，C5-Hin pyridinon)，7.75(br，9H，3NH3+)，7.89(lH，C6-H in pyridinon);i3c NMR(67.5MHz CD30D)S II. 3,15.2,21.8,24.2,28.7,28.6,30.1,31.5,33.5,35.8,35.6,37.2,46.4,50.3,52.6, 53.4,62.4,65.6,68.6,71.7,115.2,116.9,122.8,126.9,127.5,128.6,128.9,145.3, 155.6，165.0，172.1，173.5，173.7，173.9,204.7.ESI-MS:1320([]\Wl] + )，l：M2([M+Na] + )。
[0077] 实施例4、树形化合物29a的制备
[007引首先合成含Ξ个ALA基团的化合物28和含Ξ个ΗΡΟ基团的化合物19C，然后将28与 化合物19C偶联，最后经催化氨化得树形化合物29a(Scheme 4)。
[0079]
[0080] 其具体制备方法，依次进行W下步骤：
[0081 ]化合物 26:N-Cbz-L-甲硫氨酸（lOmmol)，ALA 甲基醋盐酸盐（12mmol)，DCC (lOmmol)，册E5t( lOmmol)和[Bmim]B;r( lOmmol)溶于THF( lOOmL)。混合液在氮气保护下室溫2 小时，然后冷却至0°C。DIPEA(12mmo 1溶于1 OmL THF)滴加到上述混合液，室溫揽拌过夜。加 入丙酬(lOOmL)，过滤除去沉淀，将滤液蒸干。残留物溶于二氯甲烧(lOOmL)，依次用5%稀盐 酸、饱和碳酸氨钢和水洗涂。用无水硫酸钢干燥，过滤，将滤液蒸干得白色固体产物26。产率 93%，1h NMR(CDCl3,270MHz)S:2.06(m，2H，Ol2)，2.14(s，3H，CH3S)，2.60(m，2H，CH2)，2.74 (m，2H，CH2)，2.84(m，2H，Ol2)，3.68(s，3H，CH3)，4.36(m，2H，ai2)，4.45(m，lH，CH)，5.09(s， 2H,CH2Ph),6.71(br,lH,NH),7.38-7.47(m,5H,Ph),8.03(s,lH,NH)；ESI-MS:m/z411([M+H r)。
[0082] 化合物22M:化合物26(5mmol)溶于甲醇（20mL)，用冰浴冷却，加入2M Na0H(20血）。 混合液继续揽拌30min，然后用浓盐酸中和至抑7,产物22M沉淀析出，加入40血水有更多沉 淀析出。过滤，将得到的固体在真空烘箱中烘干，得白色粉末22M。产率93 %。iH醒R(CDC13， 270MHz)S:2.01(m，2H，CH2)，2.04(s，3H，Ol3S)，2.58(m，4H，2CH2)，2.73(m，2H，CH2)，4.09(m， 2H，CH2)，4.35(m，lH，CH)，5.06(s，2H，CH2)，6.68(br，lH，NH)，7.35-7.56(m，5HJh)，7.62(s, 1H，NH);ESI-MS 397([M+扣+)。
[0083] 化合物27:合成方法与化合物7相似。即，将"化合物7的合成法"中的Cbz-AA换成 22M;将硅胶柱层析分离纯化的条件换成：展开剂为（乙酸乙醋/甲醇10:1，￥八），3:为0.45。 其余等同于化合物7的合成法。
[0084] 产率32.5%}deld，iH NMR(CDCl3,270MHz)S:1.09(s，9H，3Ol3)，1.44(m，W，3CH2)， 1.58(m，細，3CH2)，1.87(m，細，3CH2)，1.98(s，9H，3SCHs)，2.25(m，2H，CH2)，2.47(m，12H， 6CH2)，2.62(m，細，3CH2)，3.23(m，2H，CH2)，3.96(m，細，3CH2)，4.02(s，細，3CH2)，4.38(m，3H， 3CH)，5.09(s，細，3CH2)，6.19(br，3H，3NH)，7.28(m，l甜，3曲），7.48(br，3H，3NH);ESI-MS: 1511([M+扣+)。
[0085] 化合物28:将化合物27( Ig，0.66mmol)溶于二氯甲烧(50mL)，加入Ξ氣乙酸（ImL)。 混合液室溫揽拌化，真空浓缩至干，得到黄色固体28。1h醒R(CDC13，270MHz) δ: 1.37(m，6H， 3C此），1.59(m，6H，3Ol2)，1.96(m，6H，3ai2)，2.01(s，9H，3Sais)，2.26(m，2H，CH2)，2.57(m， 12H，6C此），2.62(m，2H，CH2)，2.76(m，細，3CH2)，3.96(m，6H，3C此），4.02(m，6H，3C此），4.38 (m，3H，3CH)，5.09(s，6H，3Ol2)，6.09(br，3H，3NH)，6.41(d，lH，NH)，7.28(m，5H，Ph);ESI- MS:m/z 1411([M+扣+ )，1433([M+Na] + )。
[0086] 化合物16C:合成方法与化合物9相似。即，将"化合物9的合成法"中的8-氨基辛酸 换成6-氨基已酸。其余等同于化合物9的合成法。
[0087] 产率88% ;1h NMR(CDCl3,270MHz)Sl.03(t，J = 7.2Hz，3H，C曲），1.36(m，2H，CH2), 1.62-1.72(m，4H，20l2)，2.：M(t，J = 6.8Hz，2H，CH2)，2.58(q，J = 7.2Hz，2H，CH2)3.82(t，J = 7.細z，2H，C出），5.23(s，2H，CH2)，6.67(dJ = 7.6Hz，lH，C5-Hinpyridinone)，7.27-7.42 (m，6H;5H from Ph and IH from C6-H in pyridinone);ESI-MS: :344([M+H] + ) ,366( [M+ Na]")〇
[0088] 化合物17C:合成方法与化合物7相似。即，将"化合物7的合成法"中的饥z-ALA(6) 换成16C;后处理时不用5%稀盐酸洗涂。将硅胶柱层析分离纯化的条件换成:展开剂为(二 氯甲烧/甲醇9:1，V/V)，Rf为0.37。其余等同于化合物7的合成法。
[0089] 咕 NMR(CDC!3)S: 1.02( t，J = 7.5Hz, 9H，3CH3)，1.34(m，6H，3C 出），1.42(8，9H, 3CH3) ,1.47-1.55(m，6H，3C出），1.61 (t，J = 7.6Hz，6H，3C出），1.65-1.72(m，12H，6CH2) ,2.28 (t J = 7.2Hz,細，3CH2)，2.43(tJ = 6.2Hz，2H，CH2)，2.58(qJ = 7.甜z，細，3CH2)，3.33(q，J = 6.0Hz，2H，afe)，3.80(t，J = 7.2Hz，6H，3ai2)，4.02(t，J = 6.5Hz，6H，3ai2)，5.25(s，6H， CH2)，6.42(d，J=7.5Hz，3H，C5-H in pyridinone)，7.23-7.43(m，18H，3C6-H in pyridinone and 3Ph);MSI-MS:m/z 1352.60([M+W + )。
[0090] 化合物18C:将17C(1.6g)溶于二氯甲烧（15mL)，加入5mL甲酸。混合液室溫揽拌 24h，真空浓缩，定量地得到产物 18C。1h NMR(CDCb，400MHz) δ 1.00 (t，J = 7.5Hz，9H，3CH3)， 1.22-1.32(m,細，3邸2)，1.49-1.58(m，6H，3C此），1.60(t，J = 7.細z,細，3邸2)，1.61-1.71 (m，12H，6CH2)，2.25(t，J = 7.2Hz，細，3CH2)，2.39(t，J = 6.2Hz，2H，CH2)，2.56(q，J = 7.甜z， 6H，3Ol2)，3.30(q，J = 6.0Hz，2H，ai2)，3.77(t，J = 7.2Hz，6H，3ai2)，4.03(t，J = 6.5Hz，6H， 3CH2)，5.27(s，細，3CH2Ph)，6.40(d，J = 7.5Hz，3H，3C5-Hinpyridinone)，7.20-7.35(m， 1細，3C6-H in pyridinone and 3Ph).MSI-ES;m/z 1252[M+H+]。
[OOW]化合物 19C:氮气保护下将化合物 18C(lmmol)，DCC(l.lmmol)，H(Bt(l.lmmol)， Bmim( 1. Immol)和化合物18(2mmol)溶于无水THF，在0°C揽拌化，然后室溫揽拌24小时。过滤 除去沉淀，将滤液浓缩，残留物溶于DCM，用水(lOOmL)洗涂五次。将溶液浓缩，残留物用硅胶 柱层析分离纯化化tOAc/MeOH 4:1)，收集Rf为0.41的洗脱液，除去溶剂，得到化合物19C。产 率65%，1h 醒R(CDCl3,270MHz)δ0.96(t，J = 6.7Hz，9H，3CH3)，1.25(m，12H，6C出），1.54- l.60(m，12H，6CH2)，1.97(m，細，3CH2)，2.21(m，2H，CH2)，2.35(m，細，3CH2)，2.50(m，2H，CH2)， 2.53(m，q，J = 7.2Hz，6H，30l2)，3.37(m，2H，CH2)，3.55(m，4H，2CH2)，3.68(m，4H，2CH2)，3.72 (6H，3CH2) ,3.94( s，6H，3CH2) ,4.83( s，6H，3CH2化），6.32(d，J = 6.7Hz, 3H，C5-H in pyridinone)，7.22-7.36(m，15H，3Ph，m，2H，Ar and d，J = 7.4Hz，J = 8.0Hz，3H，C6-H in pyridinone)，7.78(m，2H，Ar);ESI-MS:m/z 1542([M+扣+ )，1564([M+化])。
[0092] 化合物29 :合成步骤与化合物20相似。即，将"化合物20的合成法"中的19H换成 19C，8换成28;将硅胶柱层析分离纯化的条件换成：展开剂为（乙酸乙醋/甲醇9:l，V/V)，Rf 为0.42。其余等同于化合物20的合成法。产率43%，4MlR(CDCl3,270MHz)Sl.02(t，J = 6.2Hz，9H，3C出），1.26(m，6H，3C出）1.36(m，細，3CH2)，1.37(m，細，3CH2)，1.52-1.62(m，12H， 6Ol2)，1.96(m，6H，3ai2)，1.97(s，9H，3ai2)，2.00(m，6H，3ai2)，2.21(m，8H，4ai2andm，6H， 3CH2)，2.51(m，12H，6CH2)，2.64(m，6H，30l2andm，6H，3ai2)，3.26(m，8H，4ai2)，3.38-3.41 (m，12H，6Ol2)，3.51-3.63(m，6H，3ai2)，3.95(m，6H，3ai2)，4.06(s，6H，2ai2)，4.41(m，3H， 3CH)，5.03(s，細，3CH2)，5.27(s，細，3CH2)，6.32(d，J = 7.4Hz，3H，C-5Hinpyridinone)， 6.49(br，3H，NH)，7.28(m，30H，6I%)，7.33(d，J = 7.4Hz，3H，C-6H in pyridinone)，7.78(m, 4H，Ar)，8.09(br，甜，5NH).MALDI-T0F-MS:m/z 2935([M+扣 + )，2957([M+Na] + )。
[0093] 树形化合物29a:在干冰-丙酬冷却下，将化合物29(0.5g)溶于7N氨的甲醇溶液 (lOmL);在氮气保护下加入钮黑(0.2g)。常压下将氨气通入反应液，20分钟后，把溶液蒸干， 加入甲酸（〇.5mL溶于lOmL甲苯）。过滤除去催化剂，蒸干滤液得到油状物，用HPLC纯化。 Agilent HPLC 半制备柱(250mmX10.0mm i.d.，RP C18,5ym)，乙腊 / 水 99:1(含 0.05% 甲酸） 和甲醇（含0.05 %甲酸）用作流动相，12分钟内梯度比0-40 %。产物6.1分钟后流出。纯度 93%，产率：34%，1 歷MR(CDCl3,270MHz)Sl.l3(t，J = 6.2Hz，9H，3Ol3)，1.27(m，W，3CH2)， 1.38(m，細，3CH2)，1.37(m，細，3CH2)，1.57-1.68(m，12H，6CH2)，2.01(m，細，3CH2)，2.07(s， 9H，3C出），2.11(m，細，3CH2)，2.25(m，8H，4C出andm，6H，3CH2)，2.58(m，12H，6CH2)，2.69(m， 細，3CH2and m，6H，3C此），3.28(m，細，4C此），3.36-3.47(m，12H，6C此），3.58-3.69(m，細， 3CH2)，4.01(m，6H，3Ol2)，4.10(s，6H，2ai2)，4.47(m，3H，3CH)，6.31(br，3H，NH)，7.05(d，J = 7.4Hz，3H，C-5H in pyridinone)，7.62(d，J=7.4Hz，3H，C-6H in pyridinone)，7.78(m, 4H,Ar),8.09(br,甜，5NH);UCNMRS :13.2,16.3,17.4,19.4,22.5 25.6,27.4,27.8,30.1, 32.0,32.5,34.4,36.7,45.9,49.0,54.1,58.5,64.8,67.2,114.5,118.7,128.0,128.3, 128.6,136.2,156.5,161.5,161.8,170.2,172.4,172.7,204.5.MALDI-T0F-MS:m/z found 2263([M+扣+),2285([M+Na]+).ESI-MS:m/z 755([M+3H]3+)。
[0094]实施例5、树形化合物30a的制备
[00M]将19H与化合物28偶联，最后经催化氨化得树形化合物30a(Scheme 5)。
[0096]
[0097] 其具体制备方法，依次进行W下步骤：
[009引化合物30:合成方法与化合物20相似。即，将"化合物20的合成法"中的8换成28;将 硅胶柱层析分离纯化的条件换成:展开剂为（乙酸乙醋/甲醇9:1，V/V)，Rf为0.42。其余等同 于化合物20的合成法。
[0099] 产率:34.5%，iHNMR(CDCl3,270MHz)0.99(t，J = 7.4Hz，9H，3CH3)，1.24(m，6H，3CH2) 1.28(m,細，3CH2)，1.52(m,細，3邸2)，1.61 (m，12H，6CH2) ,1.66-1.78(m，12H，6CH2)，1.98(m， 細，3CH2)，2.06(s，9H，3CH2)，2.12(m，細，3CH2)，2.20-2.28(m，細，4CH2)，2.54-2.67(m，12H， 6C也），2.73(m，細，3CH2)，2.77(m，6H，3C也），3.40(m，6H，CH2)，3.62-3.74(m，細，3CH2)，3.76 (m，6H，30l2)，3.93(m，6H，3ai2)，3.95(m，6H，3ai2)，4.21(m，3H，ai2)，4.96(s，6H，3ai2l%)， 5.17(s，6H，3CH2Ph)，6.40(br，3H，NH)，6.45(br，3H，3NH)，7.05(d，J=7.4Hz，3H，C5-H in pyridinone) ,7.25(m,30H,6F*h) ,7.33(d, J = 7.4Hz ,3H,C6-H in pyridinone) ,7.79(m,4H, Ar)，7.91(br，2H，2NH).MALDI-T0F-MS:m/z 2935([M+H] + )，2957([M+化]+ )，2973([M+K] + ) .ESI-MS:m/z 1468([M+2HF) ,979([M+3HF).
[0100] 树形化合物30a:合成方法与化合物29a相似，即，将"化合物29a的合成法"中的29 换成30;其余等同于化合物29a的合成法。
[0101] 产物6.5分钟后流出。纯度95%，产率29%，1歷]\?(〔0(：13,27(^化）51.04(1，1 = 7.4Hz，9H，3CH3)，1.27(m，細，3CH2)1.29(m，細，3CH2)，1.55(m，細，3CH2)，1.66(m，12H，6CH2)， 1.71-1.82(m，6H，3Ol2andm，6H，3ai2)，2.02(m，6H，3ai2)，2.13(s，9H，3ai2)，2.15(m，6H， 3CH2)，2.27-2.：M(m，8H，4ai2)，2.56-2.69(m，12H，6ai2)，2.77(m，6H，3CH2)，2.82(m，6H， 3C也），3.45(m,細，C也），3.63-3.76(111，細，3(：也），3.79(111，細，3(：也），3.98(111，細，3(：也），4.02 (m，6H，3C也），4.25(m，3H，C也），6.40(br，2H，NH)，7.13(d，J = 7.4Hz，3H，C5-Hin化晚酬）， 7.41(br，2H，2NH).7.79(m，4H，Ar)，7.82(d，J = 7.4Hz，3H，C6-H in化晚酬）.i3cNMRS:13.2, 16.3,17.4,19.4,22.5 25.6,27.4,27.8,30.1,32.0,32.8,34.6,36.7,45.9,49.2,54.7, 57.9,65.9,67.8,113.9,117.8,128.1,128.3,128.7,136.4,156.4,161.3,161.8,170.5， 172.7,172.9,204.3.MALDI-T0F MS:m/z 2263( [M+H]"),2285([M+Na]"),2301 ([M+K]") .ES- MS:m/z 1132([M+2H]2+) ,755([M+3H]3+)0
[0102] 实验1:细胞中的原化嘟(Ppix)产生的药代动力学研究
[0103] 方法:ALA在细胞内经代谢产生光敏剂化IX，由于化IX是巧光化合物，因此用禪合 自动酶标仪的巧光光谱仪进行测定。激发波长405nm，发射波长635nm。
[0104] 细胞培养:人乳腺癌细胞(MCF-7和MCF-7R)在无菌条件下在DEME-F12培养基中培 养，该培养基中含有2〇41的心谷氨酷胺和酪红，W及10 %小牛血清(铁浓度450-60化g/lOOg 之间）和庆大霉素(500U/mL)。人类癌KB细胞在EMEM培养基中培养，该培养基中含有10 %小 牛血清(铁浓度450-600yg/100g之间），2%心谷氨酷胺(200皿ol/L)，2 %链霉素(200U/mL)。 细胞均在37°C，潮湿的5%二氧化碳培养箱生长。
[0105] 药代动力学研究:细胞接种到经灭菌的96孔板培养48小时(细胞密度大约为每孔5 X 1〇4)，除去培养液后，细胞用憐酸缓冲液洗涂。接着细胞与新配制的ALA和树形化合物溶 液一起培养:将含一定浓度ALA或树形化合物的1(Κ)化培养基(不含血清）添加到指定的孔 中。空白对照（即细胞培养时加入不含药物的培养基)和各种不同浓度的药物各进行6次平 行试验。细胞培养4、24小时后，每个孔的巧光信号用禪合自动酶标仪的巧光光谱仪测定。减 去空白对照值后计算平均巧光。
[0106] 本发明制备的5个树形化合物和ALA与邸、MCF和MCF-7RS种癌细胞培养4小时后产 生的光敏剂化IX的结果见图1。由图1A可见，在浓度为50皿ol/L时，树形化合物10a，20a，25a 与ALA相比，在Ξ种癌细胞培养4小时后，产生的光敏剂化IX的浓度显著增加，20a活性略强 于25曰，强于10曰。由图1B可见，在浓度为20ymol/L时，树形化合物29a和30a在Ξ种癌细胞中 产生的光敏剂化IX的浓度分别是ALA的15倍和10倍W上。在Ξ种癌细胞中产生的光敏剂 巧IX的活性强弱顺序：30a〉29a〉20a〉25a〉10a。
[0107] 树形化合物和ALA与MCF-7R细胞解育不同时间后产生巧IX巧光强度见图2。随着解 育时间的增加，PpIX巧光强度也增强。24小时后10a、20a和25a(浓度都为50ymol/L)产生的 化IX浓度分别是ALA的7.2、9.2和8.8倍;29a和30a(浓度为20ymol/L)产生的化IX浓度分别 是ALA的22和24倍。
[010引由图3可见，ALA在低浓度时（2-10ymol/L)与MCF-7细胞解育4小时和24小时后产生 巧IX巧光强度非常弱，树形大分子29a和30a在同样的条件下，则能产生较强的巧光。
[0109] 实验2:光毒性试验
[0110] 将细胞W约10X104/孔的密度接种于96孔板，解育48小时后，用憐酸缓冲液洗涂 细胞，100化含不同浓度(2-10μΜ)的化合物溶液加入指定的孔中，解育4小时。空白对照（即 不加化合物)和五种不同浓度的化合物各进行6次平行试验。用能量密度为2.5J/cm2的低功 率蓝光(420皿)福照（照射区域为14cm X 32畑1)。照射后，立即更换培养基，细胞继续解育18 小时。细胞毒性采用嚷挫蓝(MTT)分析法测定：细胞用含有Img/mL MTT的培养基培养24小 时。小屯、吸去孔内培养基上清液，每孔加入1(Κ)化的二甲亚讽(DMS0)，使紫色结晶物充分溶 解，酶标仪上490nm波长处测定各孔0D值。平均细胞存活率用W下公式计算：
[0111]
[0112]不同浓度的树形化合物和KB细胞在37°C下解化4小时，用蓝光照射后细胞的存活 率(实验结果通过Μ?Τ分析得到），结果如图4(A和B)所示。由图可知，与ALA相比，经不同浓度 的树形化合物处理后，癌细胞的存活率大大降低，表明运些化合物具有比ALA更强的药效。 五个树形大分子化合物对邸，MCF-7和MCF-7RS种癌细胞的半致死浓度LDs庙2-15ymol/L之 间，而ALA对运Ξ种癌细胞的半致死浓度大于100皿ol/L。五个树形大分子化合物的细胞毒 性大小顺序与产生光敏剂巧IX的活性顺序基本一致。
[0113]最后，还需要注意的是，W上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发 明不限于W上实施例，还可W有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容 直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
【主权项】
1. 含有5-氨基酬戊酸和3-?基化晚-4-酬的树形化合物，其特征是具有如下结构通式：通式中m>3，n>l。2. 根据权利要求1所述的含有5-氨基酬戊酸和3-径基化晚-4-酬的树形化合物，其特征 是:5-氨基酬戊酸通过其簇基与树形分子骨架中的径基形成醋键连接。3. 根据权利要求1或2所述的含有5-氨基酬戊酸和3-径基化晚-4-酬的树形化合物，其 特征是为W下任意一种化合物：4. 如权利要求1~3任一所述的含有5-氨基酬戊酸和3-?基化晚-4-酬的树形化合物的 制备方法，其特征是包括如下步骤： 1) 、树形化合物10a的合成： W甲硝基Ξ丙醇为起始原料，经乙酷化、硝基还原成氨基、与Boc-β-丙氨酸缩合、脱去 乙酷基、与化Z-ALA成醋、脱去Boc、与含簇基的HPO缩合、最后用催化氨化脱去保护基得到树 形化合物10a; 2) 、树形化合物20a的合成： 经化oc-β-丙氨酸与胺12(甲氨基Ξ丙酸Ξ叔下醋）缩合、脱去叔下基、与含径基的HP0 缩合成醋、脱去Fmoc、与二簇酸18缩合、再与化合物8缩合、最后用催化氨化脱去保护基得到 树形化合物20a; 3) 、树形化合物25a的合成： WALA甲基醋为起始原料，经与化zA-苯丙氨酸缩合、将甲基醋水解、与化合物5缩合成 醋、脱去Boc、与含簇基的册0缩合、最后用催化氨化脱去保护基得到树形化合物25a; 4) 、树形化合物29a的合成： WALA甲基醋为起始原料，经与化zA-甲硫氨酸缩合、将甲基醋水解、与化合物5成醋缩 合、脱去Boc得到化合物28;化合物5与含簇基的HP0缩合、脱去Boc、与二簇酸18缩合得到化 合物19C;28与19C缩合、再用催化氨化脱去保护基得到树形化合物29a; 5) 、树形化合物30a的合成： 19H与化合物28缩合、再用催化氨化脱去保护基得到树形化合物30a。5. 如权利要求1、2或3所述的含有5-氨基酬戊酸和3-径基化晚-4-酬的树形化合物的用 途，其特征是:用于制备光动力学治疗药物。6. 根据权利要求5所述的含有5-氨基酬戊酸和3-径基化晚-4-酬的树形化合物的用途， 其特征是：用于制备治疗基底细胞癌、鱗状细胞癌、皮肤癌、肺癌、尖锐湿痛、乳腺癌、口腔表 皮样癌的光动力学治疗药物。
【文档编号】A61K31/444GK106083706SQ201610388878
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年6月3日 公开号201610388878.6, CN 106083706 A, CN 106083706A, CN 201610388878, CN-A-106083706, CN106083706 A, CN106083706A, CN201610388878, CN201610388878.6
【发明人】周涛, 思南·贝托, 罗伯特·海德, 亚力山大·麦克罗伯特
【申请人】浙江工商大学