进行核酸提取的过程如下：
[0028] (1)吸附:待处理样品加入试管中，将吸附管1的吸附端11插入待处理样品，打开真 空栗63,利用吸管61产生的吸力使待处理样品中的核酸成分流经吸附滤芯3因吸附滤芯3的 特异性吸附而被吸附在吸附滤芯3中，滤液为含有细胞碎片和蛋白质等杂质的过滤液，滤液 经吸管61抽吸排出；
[0029] (2)-次漂洗:漂洗液A加入到另一干净的试管中，将吸附端11插入漂洗液A中，打 开真空栗63,利用吸管61产生的吸力使漂洗液A通过吸附滤芯3而清洗残留在吸附滤芯3上 的蛋白质或其他杂质成分，清洗后的漂洗液A进入经吸管61抽吸排出；
[0030] (3)多次漂洗:根据待处理样品处理需要，分步将多种不同的漂洗液注入到对应地 的新试管中，依次将吸附端11插入上述各漂流液中，分步按步骤(2)中的操作进行多次漂 洗；
[0031] (4)洗脱:漂洗结束后，关闭真空栗63,将吸附管1插入装有洗脱液的新试管中并使 吸附端11伸入液面下，打开驱动装置驱动活塞4上下移动，洗脱液在活塞管2的吸力作用下 流经吸附滤芯3,并将吸附在吸附滤芯3上的核酸成分洗脱，重复多次洗脱吸附滤芯3上吸附 的核酸成分，收集至核酸收集容器或检测装置中，完成样品中核酸的提取。
[0032] 以下通过具体实施例对本实用新型进行进一步阐述：
[0033] 实施例3:
[0034] 1、样品前处理
[0035]取60μ1抗凝全血，加入等体积的裂解液GL并混匀，接着加入适量蛋白酶，混匀15s， 37°C下反应lOmin，加入GL体积1.5倍的无水乙醇，混匀得待处理样品。上述裂解液GL、蛋白 酶均来自试剂盒ZD-XY-Micr〇-50(购自宁波重鼎生物技术有限公司）。
[0036] 2、核酸提取
[0037]利用本实用新型中的核酸提取装置，参照上述提取方法对待处理样品进行处理， 提取过程中使用的试剂均来自试剂盒ZD-XY-Micro-50 (购自宁波重鼎生物技术有限公司）， 如图3所示，具体过程如下：
[0038] (1)吸附:将上述制得的待处理样品加入试管I中，将吸附管1的吸附端11插入待处 理样品，打开真空栗63,利用吸管61产生的吸力使待处理样品中的核酸成分流经吸附滤芯3 (购自宁波重鼎生物技术有限公司）因吸附滤芯3的特异性吸附而被吸附在吸附滤芯3中，滤 液为含有细胞碎片和蛋白质等杂质的过滤液，滤液经吸管61抽吸排出；
[0039] (2)-次漂洗:漂洗液A(本实施例中漂洗液A为试剂盒ZD-XY-Mi cro-50中的洗液 W1)加入到试管Π 中，将吸附端11插入漂洗液A中，打开真空栗63,利用吸管61产生的吸力使 漂洗液A通过吸附滤芯3而清洗残留在吸附滤芯3上的蛋白质或其他杂质成分，清洗后的漂 洗液A进入经吸管61抽吸排出；
[0040] (3)多次漂洗:根据待处理样品处理需要，分步将漂洗液B(本实施例中漂洗液C为 试剂盒ZD-XY-Micro-50中的洗液W2)和漂洗液C(本实施例中漂洗液A为试剂盒ZD-XY-Micro-50中的无水乙醇)注入试管ΙΠ 和试管IV中，依次将吸附端11插入上述各漂流液中，分 步按步骤(2)中的操作进行多次漂洗；
[0041] (4)洗脱:漂洗结束后，空吸两分钟使滤芯上的无水乙醇挥发，然后关闭真空栗63， 将吸附管1插入装有洗脱液(本实施例中的洗脱液为50μ1的试剂盒ZD-XY-Mi cro-50中的TE 溶液)试管V中并使吸附端11伸入液面下，打开驱动装置7驱动活塞4上下移动，洗脱液在活 塞管2的吸力作用下流经吸附滤芯3,并将吸附在吸附滤芯3上的核酸成分洗脱，重复多次洗 脱吸附滤芯3上吸附的核酸成分，收集至核酸收集容器中，完成样品中核酸的提取。利用分 光光度法对提取的DNA进行检测，检测结果如表1所示。
[0042]比较例：
[0043]利用MICRO离心柱法对全血中的核酸进行提取，具体过程如下：
[0044] (1)取60μ1抗凝全血，加入等体积的裂解液GL并混匀，接着加入适量蛋白酶，混匀 15s，37°C下反应lOmin，加入GL体积1.5倍的无水乙醇，混勾得待处理样品。
[0045] (2)将待处理样品全部移入套有收集管的微量离心柱中，转速12000g下离心2min， 取出离心柱(勿让离心柱碰到下面废液），弃去收集管中废液后将离心柱放回收集管中。 [0046] (3)向离心柱中加入500μ1溶液W 1，转速12000g下离心2min，取出离心柱后弃去收 集管中废液，将离心柱放回收集管中。
[0047] (4)向离心柱中加入500μ1溶液W 2,转速12000g下离心lOsec，取出离心柱后弃去 收集管中废液，将离心柱放回收集管中。
[0048] (5)转速 12000g 下离心 2min。
[0049] (6)将微量离心柱取出并放入新的1.5ml离心管中，加入50μ1溶液TE，室温静止 2min，转速12000g下离心lmin，DNA即被洗脱。利用分光光度法对提取的DNA进行检测，检测 结果如表1所示。
[0050] 比较例中使用的试剂裂解液GL、蛋白酶、溶液W 1、溶液TE也均来自试剂盒ZD-XY-Micr〇-50〇
[0051 ]表1为实施例和比较例中提取的DNA的检测结果 [0052]
[0053]由表1可见，本实用新型中的核酸提取方法不仅操作方便，提取速度快，0D260/ 0D280在1.8左右，表明提取的DNA纯度高，无蛋白质等杂质，提取效果与离心柱法基本一致， 可广泛应用于各种生物样本中核酸的提取。
【主权项】
1. 一种核酸提取装置，包括具有第一连接端（12)和吸附端（11)的吸附管（1)、设于上述 吸附端（11)并能吸附待处理样品中核酸成分的吸附滤芯(3)及活塞管（2)，该活塞管(2)内 置有能沿其内壁上下移动的活塞(4)，且该活塞管(2)包括第二连接端(22)和敞口端(21)， 并通过第二连接端(22)与第一连接端（12)连接而与吸附管（1)连通，其特征在于，还包括用 于抽吸流经吸附滤芯(3)的液体的抽吸组件(6)。2. -种核酸提取装置，包括具有第一连接端（12)和吸附端（11)的吸附管（1)、设于上述 吸附端（11)并能吸附待处理样品中核酸成分的吸附滤芯（3)及内置有活塞（4)的活塞管 (2) ，该活塞管(2)包括第二连接端(22)和敞口端(21)，并通过第二连接端(22)与第一连接 端（12)连接而与吸附管（1)连通，所述敞口端(21)设置有一密封圈(9)，所述活塞(4)嵌设在 该密封圈（9)中并能沿活塞管（2)长度方向上下移动，其特征在于，还包括用于抽吸流经吸 附滤芯(3)的液体的抽吸组件(6)。3. 如权利要求1或2所述的核酸提取装置，其特征在于，所述抽吸组件（6)包括吸管 (61)、单向阀（62)以及真空栗(63)，该吸管(61)-端用于抽吸液体，另一端通过单向阀（62) 与真空栗(63)连接;或者，所述抽吸组件(6)包括吸管(61)、电动阀门以及电动气栗，该吸管 (61)-端用于抽吸液体，另一端通过电动阀门与电动气栗连接。4. 如权利要求3所述的核酸提取装置，其特征在于，所述吸管（61)插设于由吸附滤芯 (3) 与活塞(4)之间形成的液体腔(5)的腔壁上。5. 如权利要求4所述的核酸提取装置，其特征在于，所述吸管(61)的一端竖向延伸至吸 附管（1)中并位于吸附滤芯(3)上方。6. 如权利要求5所述的核酸提取装置，其特征在于，所述吸管(61)的自由端套设有一次 性保护管(8)。7. 如权利要求1或2所述的核酸提取装置，其特征在于，所述第一连接端（12)与第二连 接端(22)可拆卸连接。8. 如权利要求7所述的核酸提取装置，其特征在于，所述第一连接端（12)和第二连接端 (22)均呈圆台状，第二连接端(22)卡入第一连接端（12)且其外周面与第一连接端（12)的内 周面紧密贴合。9. 如权利要求1或2所述的核酸提取装置，其特征在于，所述吸附滤芯(3)为核酸吸附膜 或核酸吸附填料。10. 如权利要求1或2所述的核酸提取装置，其特征在于，还包括用于驱动所述活塞(4) 沿活塞管(2)内壁上下移动的驱动装置(7)。
【专利摘要】本实用新型涉及一种核酸提取装置，包括具有第一连接端和吸附端的吸附管、设置在上述吸附端并能吸附待处理样品中核酸成分的吸附滤芯以及内置有活塞的活塞管，该活塞管包括第二连接端和敞口端并通过第二连接端与第一连接端连接而与吸附管连通，还包括用于抽吸流经吸附滤芯的液体的抽吸组件。该核酸提取装置中提取过程中无需拆装装置，结构简单、操作方便，实现了核酸提取操作连续性，易于实现核酸的自动化提取，能根据需要进行多次漂洗，保证了核酸提取的质量，是一种快捷、高效的核酸提取方法，可广泛推广应用。
【IPC分类】C12M1/00
【公开号】CN205223192
【申请号】CN201520838200
【发明人】陈辉
【申请人】陈辉
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年10月27日