一种GPR120小分子荧光探针及其应用的制作方法

技术特征：

1.一种GPR120的小分子荧光探针，其特征是，具有下述结构通式(Ⅰ)：

式中，R为各种荧光团；n＝1-6。

2.如权利要求1所述的小分子荧光探针，其特征是：所述R为香豆素类、萘二酰亚胺类荧光团；n＝1-5。

3.如权利要求1所述的小分子荧光探针，其特征是,具有下述结构通式：

其中，n＝1-5。

4.如权利要求1所述的小分子荧光探针，其特征是：n＝1,2,3,5；R为含羧基的香豆素；或者，n＝1,2,4；R为萘二酰亚胺类荧光团。

5.如权利要求1所述的小分子荧光探针，其特征是，所述小分子荧光探针具有如下结构式的化合物：

6.权利要求1～5中任一项所述的小分子荧光探针的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

(1)药效基团的制备：首先由对羟基苯丙酸和甲醇反应制备得到中间体1，然后将由中间体1与4-硝基卤苄反应制备得到中间体2，在将中间体2中的硝基还原为氨基得到中间体3，即得到药效基团；其中，所述中间体1的结构式如1所示，中间体2的结构式如2所示，中间体3的结构式如3所示：

(2)连接基团连接荧光基团得到中间体5，所述连接基团的结构式如(Ⅳ)所示，所述中间体5的结构式如5所示，其中，n＝0～5，R为各种荧光团：

(3)荧光探针的制备：将所述中间体3与所述中间体5进行酰胺化反应制备得到中间体6，然后中间体6中的酯基水解为羧基，得到荧光探针，如(Ⅰ)所示；其中，所述中间体6的结构式如6所示，其中，n＝0～5，R为各种荧光团：

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征是：步骤(1)中，所述4-硝基卤苄为4-硝基氯苄、4-硝基溴苄或4-硝基碘苄；优选4-硝基溴苄；

优选的，所述中间体1的具体制备方法为：对羟基苯丙酸和无水甲醇搅拌溶解后加入催化量的浓硫酸，在55～65℃下搅拌反应5～7h，得到含有中间体1的反应液；进一步优选的，所述中间体1的纯化方法为：向含有中间体1的反应液中加入水和二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水MgSO₄干燥过夜，过滤、浓缩、柱层析纯化，得无色透明油状物，即为中间体1；

优选的，所述中间体2的具体制备方法为：将中间体1溶于乙腈中，加入碳酸铯和4-硝基卤苄，室温反应3～5h，得到含有中间体2的反应液；进一步优选的，中间体2的纯化方法为：向含有中间体2的反应液中加入水和二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水MgSO₄干燥过夜，过滤、浓缩、柱层析纯化，得白色固体，即为中间体2；

优选的，所述中间体3的具体制备方法为：将中间体2溶于甲醇中，加入饱和氯化铵溶液和锌粉，室温反应0.5～1.5h，得到含有中间体3的反应液；进一步优选的，中间体3的纯化方法为：将所述含有中间体3的反应液用硅藻土过滤，甲醇洗涤，浓缩大部分滤液，加入水和二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水MgSO₄干燥，过滤、浓缩，得白色固体，即为中间体3。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征是：步骤(2)中，当所述荧光基团为萘二酰亚胺类荧光团时，4-卤代-1,8-萘二甲酸酐与二甲胺反应制备得到中间体4，所述中间体4与连接基团反应制备得到中间体5ˊ；所述中间体4的结构式如4所示，所述中间体5ˊ的结构式如5ˊ所示，n＝0-5：

或者，

当所述荧光基团为含羧基的香豆素类荧光团时，将连接基团进行活化，得到中间体9；将所述中间体9与含羧基的香豆素荧光团反应制备得到中间体10；然后将中间体10的酯基水解得到中间体5”；

所述含羧基的香豆素荧光团的结构式如8ˊ所示，所述中间体9的结构式如9所示，所述中间体10的结构式如10所示，所述中间体11的结构式如5”所示，其中，n＝1～6，R为甲基或乙基；

9.如权利要求6所述的制备方法，其特征是：步骤(3)的具体方法包括：将中间体5ˊ和中间体3溶于DMF中，加入N-乙基二异丙胺(DIPEA)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，室温反应12～18h，得到含有中间体6的反应液；优选的，所述中间体6的纯化方法为：向含有中间体6的反应液中加入水和二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水MgSO₄干燥过夜，过滤、浓缩、柱层析纯化，得黄色固体，即为中间体6；当中间体5为5ˊ所示的结构的化合物时，将所述中间体6溶于四氢呋喃(THF)中，加入LiOH的水溶液，室温反应10～14h，然后加入盐酸，得到含有荧光探针的反应液；或者，当中间体5为5”所示的结构式的化合物时，向二氧六环中加入所述中间体6，加入盐酸，室温反应23～25h，得到含有荧光探针的反应液；

优选的，所述荧光探针的纯化方法为：向含有荧光探针的反应液中加入二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和食盐水洗，无水MgSO₄干燥过夜，过滤、浓缩、柱层析纯化，得黄色固体，即为荧光探针。

10.下述任一应用：

(1)权利要求1～5中任一项所述小分子荧光探针在制备用于检测GPR120高表达量的细胞或组织试剂中的应用；

(2)权利要求1～5中任一项所述小分子探针在作为识别GPR120受体小分子荧光探针的应用；

(3)权利要求1～5中任一项所述小分子荧光探针在制备用于筛选GPR120相关疾病的药物的试剂中的应用；优选的，所述相关疾病为糖尿病或肥胖；优选的，所述GPR120相关疾病的药物为GPR120拮抗剂或GPR120激动剂。